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一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定

畜牧兽医学报 2023年第4期54卷 1713-1720页

作者：许鑫燕郑亚婷刘迪马波刘家森曲连东东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子,PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离,前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性,第三代开始只有FCV阳性... 详细信息

采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子,PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离,前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性,第三代开始只有FCV阳性,由此分离出FCV。制备此株FCV的鼠源多克隆抗体,并中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态观察、间接免疫荧光试验(IFA)和基因序列分析等方法鉴定HRB2019株,并研究其体外生长动力学。结果显示,HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变,测得其第四代病毒滴度为1×10^(8.43) TCID 50·mL^(-1);电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子;IFA结果显示,分离株可与FHV-1阳性血清结合,出现特异性荧光;扩增分离株的gD基因,其与国内外流行株高度同源。病毒一步生长曲线表明,HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖,12~36 h为快速增殖期,48~72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰,84 h病毒滴度开始下降。本研究首次从FCV与FHV-1混合感染的病料中成功分离出FHV-1,为FHV-1的流行病学调查和病原学研究提供了重要数据,为混合感染中生长弱势毒株的分离提供了方法学依据。

关键词：猫疱疹病毒猫杯状病毒分离鉴定

基因工程表达鸡IFN-λ抗Ⅰ群禽腺病毒感染

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中国兽医学报 2020年第7期40卷 1302-1305页

作者：许鑫燕王延龙杨倩吴艳涛张小荣扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

Ⅲ型干扰素(IFN)又被称为IFN-λ,具有与Ⅰ,Ⅱ型IFN类似的抗病毒特性,但利用不同的配体-受体系统,主要在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥作用。本研究评价了用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组鸡IFN-λ(chIFN-λ)在体内、外对禽Ⅰ群腺病毒4... 详细信息

Ⅲ型干扰素(IFN)又被称为IFN-λ,具有与Ⅰ,Ⅱ型IFN类似的抗病毒特性,但利用不同的配体-受体系统,主要在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥作用。本研究评价了用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组鸡IFN-λ(chIFN-λ)在体内、外对禽Ⅰ群腺病毒4型(FAdV-4)GX2013株和8b型(FAdV-8b)QD2016株感染的抗病毒效果。在体外抗病毒试验中,重组chIFN-λ在LMH细胞上对GX2013株和QD2016株的抗病毒效价分别达到1.33×10^6,1.78×10^6 U/mL。在体内抗FAdV-4感染试验中,重组chIFN-λ治疗组在攻毒5 d后试验鸡存活率达60%,而未进行治疗的对照组3 d内死亡率为100%。在体内抗FAdV-8b感染试验中,重组chIFN-λ治疗组和非治疗组试验鸡均无明显临床症状,但治疗组在攻毒5 d后呼吸道和消化道排毒水平均低于未治疗组,且差异极显著(P<0.01)。上述结果表明重组chIFN-λ作为一种新型的生物制剂,有望在禽腺病毒感染防控中发挥重要的作用。

关键词： chIFN-λ 杆状病毒表达系统 Ⅰ群禽腺病毒抗病毒试验

检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用

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中国兽医学报 2022年第1期42卷 53-60页

作者：刘迪郑亚婷许鑫燕董丽丽康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL,比普... 详细信息

为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL,比普通RT-PCR检测下限高100倍;特异性试验结果显示,该检测方法与猫疱疹病毒、猫细小病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应;通用性试验结果显示,针对引物靶位点区间,该方法对所有已知变异位点的人工合成质粒和本实验室保存的不同变异位点的FCV毒株,均能够良好检出;重复性试验结果显示,组内的变异系数为0.09%~0.71%,组间变异系数为0.05%~0.82%,均小于1%。对23份临床样品进行检测,该方法的阳性检出率为60.9%,检出的14份阳性病料分别接种到CRFK细胞中,对细胞病变产物进行扩增并测序,BLAST对比后结果证实为FCV毒株。结果表明,本试验建立的荧光定量RT-PCR检测方法可用于FCV的快速诊断及流行病学的调查。

关键词：猫杯状病毒实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ ORF1

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猫细小病毒适配体的筛选与鉴定

中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 826-831页

作者：董丽丽许鑫燕刘迪郑亚婷康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27... 详细信息

为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27和Apt52为候选适配体。MTT试验表明,Apt27和Apt52对CRFK细胞(猫肾细胞)无毒性作用。利用酶联寡核苷酸法(ELONA)测定Apt27和Apt52的解离常数,结果显示分别为18.3249±7.1723 nmol/L和24.7882±10.0067 nmol/L。同时采用dot blot、间接免疫荧光试验(IFA)方法检测Apt27和Apt52对不同病毒的结合情况,结果显示其对猫杯状病毒、猫疱疹病毒的结合力弱,而对FPV的结合能力较强。预测二者二级结构可见,Apt27和Apt52均具有环状、发卡状结构,其中茎环结构可能为适配体特异性识别FPV的基本结构。本研究首次筛选到特异性识别FPV的适配体序列,为FPV的检测与治疗制剂的开发提供了新思路。

关键词：猫细小病毒适配体 SELEX技术

猫疱疹病毒ERA-LFD检测技术的建立与应用

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中国兽医科学 2022年第1期52卷 11-18页

作者：刘迪许鑫燕郑亚婷杨育鹏康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×10^... 详细信息

为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×10^(1)copies/μL,比普通PCR的检测下限高10倍,与实时荧光定量PCR方法的检测限相当。特异性试验表明,该检测方法与猫细小病毒、猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应。重复性试验表明,组内的变异系数在1.15%~4.76%之间,组间变异系数在2.09%~2.66%之间,均小于5%。对30份临床样品进行检测,该方法的阳性检出数为6,包含用普通PCR方法的检出的5份阳性病料。对临床检测为阳性的ERA扩增产物进行测序,BLAST对比结果证实为FHV毒株。综上所述,建立的ERA-LFD方法可用于猫疱疹病毒的快速检测及流行病学调查。

关键词：猫疱疹病毒 ERA-LFD 快速检测

杯状病毒疫苗免疫猫中杯状病毒分离株的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 555-559,571页

作者：郑亚婷刘迪许鑫燕杨育鹏康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为了解猫杯状病毒(FCV)疫苗免疫猫中FCV的感染情况及分子特征,本研究随机采集哈尔滨和大连经灭活疫苗免疫的猫口腔拭子样品29份,从中分离鉴定获得8株FCV,对分离到的病毒进行全基因组测序及同源性与遗传进化分析。全基因组序列同源性分... 详细信息

为了解猫杯状病毒(FCV)疫苗免疫猫中FCV的感染情况及分子特征,本研究随机采集哈尔滨和大连经灭活疫苗免疫的猫口腔拭子样品29份,从中分离鉴定获得8株FCV,对分离到的病毒进行全基因组测序及同源性与遗传进化分析。全基因组序列同源性分析结果显示:8株分离病毒与国内FCV参考株的核苷酸同源性为76.1%~89.3%,与国外FCV参考株的同源性为77.1%~83.5%;8株FCV间的同源性为76.9%~97.9%,DL31株与DL37株的同源性高达97.9%;与疫苗株F4、F9、F65、255相比,8株分离病毒与其同源性在76.2%~79.8%。VP1和全基因组序列遗传进化分析显示:34株FCV可以分为2个大分支,即基因群Ⅰ和Ⅱ,8株分离病毒在两个基因群均有分布,其中分离株HRB46与韩国株12Q087-1处于同一分支,但8株FCV与疫苗株F4、F9、F65、255等均不在一个分支。将分离病毒VP1重要氨基酸位点与传统疫苗株F9比较分析,结果显示:其D区和conE区的氨基酸相对保守,但其5’高变区(5’HVR)与3’HVR的变异较大,而已有研究发现疫苗株F9在E区5’HVR的Asn-GlyThr序列(aa439~aa441)具有较强的免疫原性,8株分离株在该位点发生了1aa~3aa变异;部分B细胞抗原表位中的氨基酸也发生了突变,8株FCV在aa448~aa450这3个位点发生了连续性变异。以上结果表明FCV具有高度的遗传变异性,由此可能造成FCV疫苗免疫失败。本研究首次对FCV疫苗免疫猫开展FCV的分离鉴定,并分析了分离株与疫苗株的差异,为FCV感染的防控和疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猫杯状病毒疫苗全基因组遗传进化

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数据资产管理平台标准化分析与实践

中国标准化 2025年第1期 133-138页

作者：许鑫泰州市市域社会治理现代化指挥中心

在数字化时代,数据资产重要性日益突出。已经有不少为数据资产的存储、管理、分析和应用提供技术的平台开始建设运营,为实现平台的高效、安全和规范运行,建立完善的标准化体系至关重要。本研究分析了构建数据资产管理平台标准化体系的... 详细信息

在数字化时代,数据资产重要性日益突出。已经有不少为数据资产的存储、管理、分析和应用提供技术的平台开始建设运营,为实现平台的高效、安全和规范运行,建立完善的标准化体系至关重要。本研究分析了构建数据资产管理平台标准化体系的关键要素,包括技术标准、业务流程标准、安全标准、合规标准和运营标准。通过标准体系梳理、行业案例分析、实践效果分析等方式,聚焦数据资产管理平台的标准化问题,结合江苏省泰州市数字资产管理平台建设的实际案例,分析当前标准化实施的现状,依据行业趋势提出未来发展方向建议,以推动平台的高效、安全运行,助力数字化转型与高质量发展。

关键词：数据资产标准化数字化转型

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社区医护人员呼吸道传染病卫生应急能力调查研究

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中国全科医学 2025年

作者：靳惠子许鑫李智婧高冰麻永怀纪颖北京大学医学部公共卫生学院丰台中西医结合医院北京大学医院

背景近年来，新型呼吸道传染病为我国带来了严重的疾病与经济负担。社区卫生服务中心在呼吸道传染病的防控中逐渐受到重视，因此社区卫生服务中心的医护人员需要具备一定的呼吸道传染病卫生应急能力以应对增多的呼吸道传染病防控工作... 详细信息

背景近年来，新型呼吸道传染病为我国带来了严重的疾病与经济负担。社区卫生服务中心在呼吸道传染病的防控中逐渐受到重视，因此社区卫生服务中心的医护人员需要具备一定的呼吸道传染病卫生应急能力以应对增多的呼吸道传染病防控工作。但目前针对社区医护人员呼吸道传染病的应急能力及其相关因素的研究还较少。目的调查并分析社区医护人员不同维度的呼吸道传染病卫生应急能力，探究其相关因素，为社区医护人员呼吸道传染病卫生应急能力评价与培训提供依据。方法 2023年11月采用分阶段方便抽样法，从北京市的中心城区、城区和近郊区中抽取西城区、丰台区、大兴区3个区，每个区抽取3个社区卫生服务中心，每个社区卫生服务中心招募50名左右的医护人员作为调查对象。本研究采用课题组自行开发的社区医护人员呼吸道传染病卫生应急能力调查问卷进行调查。结果本研究共调查509名社区医护人员，剔除工作科室为非业务科室，以及工作科室为业务科室但工作内容与科室业务无关的问卷2份后，得到有效问卷507份。本研究中社区医护人员应急能力平均得分为（0.598±0.136）分。2个一级指标中，医护人员的应对能力得为（0.602±0.152）分，知识准备的平均得分为（0.590±0.173）分。多元线性回归分析结果显示：医生（β=0.322,P<0.001）、正高级职称（β=0.118,P=0.012）、过去一年参与相关培训与应急演练次数6次及以上（β=0.225,P<0.001）的人员，呼吸道传染病卫生应急能力得分较高；临床医学背景（β=-0.210,P=0.015）的医护人员应急能力得分较低。结论北京市社区医护人员呼吸道传染病卫生应急能力有待提升。应针对“法律法规及标准”“监测预警”“报告”等得分较低的能力对社区医护人员加强培训，同时关注职业为护士、医技与药师、职称较低、参与培训与应急演练次数较少的人员。

关键词：呼吸道感染传染病社区卫生服务中心医护人员卫生应急能力相关因素分析

融媒时代党的创新理论传播路径探析——“无废文化”的传播案例研究

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融媒 2025年第1期 13-16页

作者：许鑫上海大学新闻传播学院

媒体融合时代,充分利用多种融合传播方式和手段来推动党的创新理论“飞入寻常百姓家”成为重要的时代命题“。无废文化”作为在生态文明建设中贯彻新发展理念的具体文化表现,在日趋更新的媒介技术和呈现形式的影响下正面临传播推广的新... 详细信息

媒体融合时代,充分利用多种融合传播方式和手段来推动党的创新理论“飞入寻常百姓家”成为重要的时代命题“。无废文化”作为在生态文明建设中贯彻新发展理念的具体文化表现,在日趋更新的媒介技术和呈现形式的影响下正面临传播推广的新机遇与新挑战。现阶段“,无废文化”传播推广面临全媒体传播建设不足、缺乏新媒体宣传教育途径、新媒体内容制作不佳的发展困境“。无废文化”传播推广需要建设全媒体传播链条,打造“无废文化”新媒体教育平台和资源,深挖新媒体内容策划、内容叙事、内容创意,从而不断增强“无废文化”新媒体传播的感染力与吸引力,用文化力量助推“无废城市”建设向纵深发展。

关键词：媒体融合无废文化党的创新理论环境保护绿色低碳

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