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基因枪转化籼稻的影响因素

中山大学学报（自然科学版） 1998年第1期37卷 88-92页

作者：许新萍卫剑文胡明李宝健中山大学生物工程研究中心

将含有ｇｕｓＡ基因的质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织，通过检测ｇｕｓＡ基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况，对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究．这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参... 详细信息

将含有ｇｕｓＡ基因的质粒ｐＡｃｔ１－Ｄ包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织，通过检测ｇｕｓＡ基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况，对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究．这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参数．实验表明，在合适的转化条件下，籼稻品种青风占１２、穗优占的最高转化效率分别为４３９。

关键词：籼稻基因枪法初生愈伤组织 β-葡萄苷酸酶

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用基因枪法转化水稻获得转基因植株

中山大学学报（自然科学版） 1997年第6期36卷 25-29页

作者：许新萍胡明卫剑文李宝健中山大学生物工程研究中心

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织．将分别含有苏云金杆菌δ－内毒素基因［ＣｒｙⅠＡ（ｂ）］、潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织．经过筛选和再生培养，得... 详细信息

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织．将分别含有苏云金杆菌δ－内毒素基因［ＣｒｙⅠＡ（ｂ）］、潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织．经过筛选和再生培养，得到９２个系的潮霉素抗性再生植株．点杂交结果表明９７．８％的抗性植株含有ｈｐｔ基因，７３．９％的植株同时含有ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因和ｈｐｔ基因．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析进一步证实外源ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因已经整合到水稻基因组中．

关键词：基因枪转化转基因水稻植株水稻

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多个抗虫基因转化水稻两用系培矮-64S

实验生物学报 2002年第1期35卷 42-46页

作者：范钦许新萍李宝健中山大学生物工程研究中心广州510275

应用基因枪法对水稻两用系培矮-64S进行了转化。质粒载体pKC-3串联了三个抗虫基因,将其转化成熟胚诱导形成的愈伤组织,共获得33株转基因植株。分别对R_0代植株不同的基因进行PCR及Southern blot分析,并对R_1代植株进行了PCR分析。结果表... 详细信息

应用基因枪法对水稻两用系培矮-64S进行了转化。质粒载体pKC-3串联了三个抗虫基因,将其转化成熟胚诱导形成的愈伤组织,共获得33株转基因植株。分别对R_0代植株不同的基因进行PCR及Southern blot分析,并对R_1代植株进行了PCR分析。结果表明,三个抗虫基因均已整合到水稻基因组并获得稳定遗传。

关键词：水稻基因枪法抗虫基因培矮-64S 两用系基因转化

转GNA+SBTi双价基因抗虫水稻的遗传分析及抗虫性研究

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中山大学学报（自然科学版） 2003年第1期42卷 125-126页

作者：李桂英许新萍夏嫱傅家谟盛国英中国科学院广州地球化学研究所中山大学生物工程研究中心广东广州510275

研究了转GNA +SBTi双价基因籼稻的遗传规律及对褐飞虱和稻纵卷叶螟的抗虫实验。分子检测结果表明 :外源基因在R2代株系中发生了分离 ,部分株系分离符合 3∶1或 15∶1的孟德尔遗传规律 ,但也有分离比为 1∶1及其它不正常分离的株系存在... 详细信息

研究了转GNA +SBTi双价基因籼稻的遗传规律及对褐飞虱和稻纵卷叶螟的抗虫实验。分子检测结果表明 :外源基因在R2代株系中发生了分离 ,部分株系分离符合 3∶1或 15∶1的孟德尔遗传规律 ,但也有分离比为 1∶1及其它不正常分离的株系存在。对这些株系的特别追踪发现这几种分离式样在R3代中出现交叉。对R2和R3代转基因植株进行抗虫实验 ,结果表明分别有 83 3%和 76 9%的株系对褐飞虱的抗性较原种对照均有了显著的提高。 78 6 %的R2代株系对稻纵卷叶螟的抗性比原种对照的抗性强 ,且大部分R3代株系继续保持良好的抗稻纵卷叶螟的性质。获得了 9个分子检测阳性率高且对褐飞虱和稻纵卷叶螟抗性增强的水稻株系。

关键词：双价抗虫水稻遗传分析褐飞虱抗性稻纵卷叶螟抗性

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一种简捷的Southern印迹杂交方法

中山大学学报（自然科学版） 2004年第4期43卷 128-130页

作者：朱华晨许新萍李宝健中山大学生物工程研究中心基因工程教育部重点实验室广东广州510275

在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系... 详细信息

在综合前人方法的基础上,发展了一种简捷、灵敏、廉价、效果可靠的Southern印迹杂交方案。使用0 4mol LNaOH溶液将琼脂糖凝胶上的DNA在变性的同时转移到尼龙膜上,晾干膜后无需固定就可以直接用于杂交。预杂交液和杂交液选用Church缓冲系统,该缓冲系统中仅需10g LBSA作为封闭剂即可。整个洗膜过程可简化为一种溶液、2～3次洗涤。碱变性及转移后的尼龙膜,也可以用于地高辛(DIG)等非放射性检测系统,并可耐多轮杂交和洗脱。本方法可适用于包括高等植物基因组在内的多种生物材料的DNA检测。

关键词： Southern印迹 DNA 杂交植物基因组

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高效的水稻基因枪转化和可育转基因植株再生

作物学报 1999年第6期25卷 691-696页

作者：许新萍胡明蚁乐洲卫剑文李宝键中山大学生物工程研究中心广东广州510275

从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3～4周的愈伤组织,经过1～3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组... 详细信息

从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3～4周的愈伤组织,经过1～3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验.将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、hpt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组织,在含30～50mg/L潮霉素的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养.使用干燥处理来增加再生频率和出苗数,并摸索出移栽再生小植株的有效方法.从接种到获得转化小植株只需要13～21周.三次转化实验共轰击536块胚性愈伤组织,获得199个系的2783株潮霉素抗性植株.DNA点杂交检测表明73.4%的抗性植株同时含有GNA基因和hpt基因,Southern杂交分析进一步证实了GNA基因在转基因水稻基因组中的整合.89.3%的转基因植株可育.分子证据表明GNA基因和hpt基因已遗传至子代,并且主要按孟德尔规律进行分离.

关键词：水稻胚性愈伤组织基因枪转让 hpt基因

用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

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中山大学学报（自然科学版） 2000年第Z2期39卷 52-55页

作者：卫剑文许新萍李宝健中山大学生物工程研究中心广州510275

建立了一个用于转基因小苗检测的ＤＮＡ快速微量方法．每２０ｍｇ新鲜叶片可提出约１０ μｇＤＮＡ，且ＤＮＡ有较好的完整性，Ａ２６０／２８０值在１．７～１．９范围内，并适合于点杂文和ＰＣＲ分析．

关键词： DNA快速微量提取方法点杂交 PCR 转基因小苗

快速制备水稻基因组DNA PCR模板的煮沸法

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植物生理学通讯 2003年第1期39卷 41-42页

作者：赫然黄小乐刘秋云许新萍中山大学基因工程教育部重点实验室与生物工程研究中心广州510275

文章发展了一个采用煮沸法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。

关键词：快速制备水稻基因组DNA PCR模板煮沸法

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使用双抗真菌蛋白基因提高水稻抗病性的研究

Acta Botanica Sinica 1999年第11期41卷 1187-1191页

作者：冯道荣许新萍卫剑文李宝健杨祁云朱小源中山大学生物工程研究中心广州510275 广东省农业科学院植物保护研究所广州510234

将含有串联的RC24基因和β-1，3－Glu基因的pGB12质粒与含有hpt基因的p35H质粒用基因枪法同时导入华南地区一优良籼稻（***）品种“七丝软占”中。Southernblot分析证明获得17个同时整合有RC24基因和β-1，3－Glu基因的转基因系。而Nort... 详细信息

将含有串联的RC24基因和β-1，3－Glu基因的pGB12质粒与含有hpt基因的p35H质粒用基因枪法同时导入华南地区一优良籼稻（***）品种“七丝软占”中。Southernblot分析证明获得17个同时整合有RC24基因和β-1，3－Glu基因的转基因系。而Northernblot分析表明在不同的转基因系中两基因的表达量存在很大差异。对R1及R2代转基因植株的分子分析表明，这两个基因已稳定遗传到R1、R2代，并在RNA水平上持续表达。转基因植株苗期抗稻瘟病试验表明，部分R1代转基因植株苗对广东省稻瘟病菌（Magnaphorthagrisea）中的5个代表菌株表现出不同程度的抗性提高。而其中18株抗性提高的R1代转基因植株的R2代各苗对广东省稻瘟病菌优势生理小种中的3个代表菌株表现出一致的抗性提高，结合分子分析，初步证明获得10株整合有RC24和β-1，3－Glu双基因的稻瘟病抗性提高的R1代转基因纯系植株。且这些转基因纯系植株的离体叶片对纹枯病菌（RhizoctoniaSolaniKuhn的抗性也明显提高。

关键词：转基因水稻碱性几丁质酶基因纹枯病菌