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MiR-7下调LXRβ表达而抑制HepG2细胞脂质生成的作用

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第三军医大学学报 2016年第10期38卷 1085-1089页

作者：付晓红钟丹许志臻周鹏闫小晶赵力黄刚第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水平表... 详细信息

目的初步探讨miR-7对LXRβ的抑制作用及其在肝细胞脂质生成中的作用。方法生物信息学分析,预测LXRβmRNA的3'-UTR上miR-7的可能结合位点。在人肝细胞系Hep G2中转染miR-7,以Real-time PCR、Western blot检测LXRβmRNA水平和蛋白水平表达的变化;构建LXRβ3'-UTR报告基因质粒p MIR/LXRβ,Report assay检测报告基因荧光素酶活性;Real-time PCR检测miR-7对LXRβ激动剂诱导的脂质生成相关靶基因FAS、ACC的表达变化。结果在人肝细胞中,miR-7能够显著抑制LXRβ的表达(P<0.05),且miR-7能降低LXRβ重组质粒p MIR/LXRβ的荧光素酶活性(P<0.05)。同时抑制其激动剂对脂质代谢相关靶基因的诱导作用。结论 miR-7可通过结合在LXRβ3'-UTR区域而抑制其表达,进而抑制FAS、ACC的表达而抑制脂质生成。

关键词：肝X受体β miR-7 肝细胞脂质生成

人类乳头瘤病毒18 E7原癌蛋白对宫颈癌细胞系中组蛋白去乙酰化酶1表达的下调作用

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第三军医大学学报 2010年第2期32卷 139-141页

作者：周鹏何凤田刘东擘黄刚龚薇许志臻第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的研究宫颈癌中人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达之间的关系。方法运用RT-PCR和Western blot方法检测3株宫颈癌细胞中HDAC1表达水平。经脂质体2000介导将含有HPV18... 详细信息

目的研究宫颈癌中人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染与组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase1,HDAC1)表达之间的关系。方法运用RT-PCR和Western blot方法检测3株宫颈癌细胞中HDAC1表达水平。经脂质体2000介导将含有HPV18 E7基因的重组表达质粒瞬时转染人宫颈癌C-33A细胞,运用RT-PCR和Westernblot方法检测转染后C-33A细胞中HDAC1的RNA和蛋白水平改变。结果HDAC1在C-33A细胞中表达最高,CaSki细胞中次之,HeLa细胞中最少。C-33A细胞在转染HPV18 E7基因后HDAC1表达降低。结论HDAC1表达高低可能与HPV是否感染及感染亚型有关,HPV18 E7可能直接或间接下调细胞中HDAC1表达。

关键词：表观遗传学宫颈癌组蛋白去乙酰化酶人类乳头瘤病毒18 E7原癌蛋白

法尼醇X受体对HepG2细胞蛋白C表达的影响及机制的初步研究

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第三军医大学学报 2010年第12期32卷 1267-1270页

作者：李佳霖李媛晁帆龚薇许志臻何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的观察法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)的天然激动剂鹅脱氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)对HepG2细胞蛋白C(protein C,PC)表达的影响,探讨其引起变化的可能机制。方法以不同浓度(25、50、75μmol/L)FXR激动剂CDCA刺激HepG2细胞,RT-PCR分别检测各组细胞FXR特异性靶基因小异源二聚体伴侣分子(small heterodimer partner,SHP)及PCmRNA表达变化,并用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析各组PC的表达量;ELISA检测各组细胞培养上清液中PC蛋白分泌量的变化;瞬时转染结合报告基因检测在人胚肝L02细胞中转入组成性活化的FXR表达质粒(VP-FXR),观察PC启动子活性的改变。结果经FXR配体CDCA刺激的HepG2细胞,随着CDCA浓度的增高,SHP、PC mRNA的表达逐渐增高,细胞培养上清液中PC蛋白表达也逐渐升高,呈剂量依赖性;在人胚肝L02细胞中,活化的FXR可增强PC启动子的活性约2.9倍。结论 CDCA活化FXR引起HepG2细胞中PC mRNA和蛋白表达的升高,其调控机制与PC启动子的活化相关。

关键词：法尼醇X受体鹅脱氧胆酸蛋白质C 肿瘤细胞,培养的 HepG2细胞

白藜芦醇上调BATF2表达及抑制肝癌细胞增殖的研究

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重庆医学 2016年第23期45卷 3193-3195,3200页

作者：付晓红许志臻钟丹吕细林闫小晶赵力黄刚第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的初步探讨白藜芦醇对BATF2表达的调控作用及对肝癌细胞(HepG2)增殖能力的影响。方法用不同剂量的白藜芦醇(终浓度分别为20、40、80μmol/L)处理HepG2细胞,进行逆转录PCR(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、Western blot检测碱性... 详细信息

目的初步探讨白藜芦醇对BATF2表达的调控作用及对肝癌细胞(HepG2)增殖能力的影响。方法用不同剂量的白藜芦醇(终浓度分别为20、40、80μmol/L)处理HepG2细胞,进行逆转录PCR(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、Western blot检测碱性亮氨酸拉链转录因子2(BATF2)mRNA和蛋白水平表达的变化,并采用细胞增殖检测试剂(CCK-8)实验检测对细胞增殖能力的影响。结果在HepG2细胞中,白藜芦醇能剂量依赖性地诱导BATF2在转录和翻译水平的表达,并抑制细胞的增殖(P<0.05);基因检测发现白藜芦醇显著诱导BATF2启动区活性,-244^-152区域存在白藜芦醇的可能结合位点。结论白藜芦醇能增强HepG2细胞中BATF2的表达并抑制细胞的增殖,提示上调BATF2的表达可能是白藜芦醇抑制肝癌细胞增殖的机制之一。

关键词：肝肿瘤细胞增殖肝癌细胞白藜芦醇碱性亮氨酸拉链转录因子2

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提高生物化学合班教学质量的探讨

现代医药卫生 2013年第22期29卷 3505-3506页

作者：许志臻龚薇连继勤何凤田第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

合班教学是为了缓解教学资源紧张的有效方法,但合班教学是把"双刃剑",在实施中存在着不少的现实问题,故有必要对此找到相应的应对策略,以提高教学质量。该文从教学实践中探讨合班教学在生物化学教学中的应用。

关键词：生物化学教学质量控制合班教学

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核受体FXR对血栓调节蛋白表达的影响

核受体FXR对血栓调节蛋白表达的影响

基于人HMGB1-B box的抑制性小肽筛选及其抗炎功能分析

“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代...

作者：李媛何谐龚薇张立黄刚许志臻何凤田第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室第三军医大学第一附属医院神经内科

研究背景与目的:血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是一种主要表达于血管内皮细胞表面的糖蛋白,其具有重要的抗凝与抗炎功能,其功能缺乏与多种疾病密切相关。因此,设法上调TM的表达,无疑有助于相关疾病的防治。法尼酯X受体(famesoid X re... 详细信息

研究背景与目的:血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)是一种主要表达于血管内皮细胞表面的糖蛋白,其具有重要的抗凝与抗炎功能,其功能缺乏与多种疾病密切相关。因此,设法上调TM的表达,无疑有助于相关疾病的防治。法尼酯X受体(famesoid X receptor,FXR)是核受体超家族成员,其密切参与物质代谢调节及抗炎功能,但具体抗炎机制尚不明了。为此,本研究探讨了FXR对TM表达的调节作用,旨在为深入阐明FXR的抗炎机制提供新的科学依据,为探索基于FXR-TM通路的抗炎新策略积累理论资料。材料与方法:以人血管内皮细胞株Ea.hy926为模型,用FXR的激动剂GW4064处理细胞后,经RT-PCR和Real-time PCR检测TM mRNA的变化,经Western blot和流式细胞技术检测TM蛋白的变化,经发色底物法分析TM活性的变化。随后,克隆人Tm基因启动子区域不同长度的片段,经荧光素酶报告基因检测FXR对Tm基因启动子活性的影响。结果:FXR可在血管内皮细胞中呈配体剂量依赖性地上调TM mRNA和蛋白的表达;活化FXR可促进TM的活性;荧光素酶报告基因检测实验表明FXR可促进Tm基因启动子的活性。结论:Tm是FXR的一个新靶基因,促进TM表达可能是FXR的一个抗炎新机制。

关键词：法尼酯X受体血栓调节蛋白血管内皮细胞基因调控核受体

来源： cnki会议评论

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医学分子生物学杂志 2010年第1期7卷 11-15页

作者：许志臻黄刚樊继山曾益军张艳陈岑曦何凤田第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆市400038

目的从噬菌体构象型7肽库中筛选人HMGB1-Bbox的抑制性小肽。方法以重组人HMGB1-Bbox为靶分子对噬菌体构象型7肽库进行6轮亲和筛选，获得Bbox结合的克隆，并经ELISA验证。选取亲和力高的克隆进行DNA测序，并推导出呈现的多肽序列，通过IL... 详细信息

目的从噬菌体构象型7肽库中筛选人HMGB1-Bbox的抑制性小肽。方法以重组人HMGB1-Bbox为靶分子对噬菌体构象型7肽库进行6轮亲和筛选，获得Bbox结合的克隆，并经ELISA验证。选取亲和力高的克隆进行DNA测序，并推导出呈现的多肽序列，通过IL-6 ELISA检测噬菌体呈现的小肽对人HMGB1-B box致炎功能的抑制作用。结果经过6轮亲和筛选，噬菌体的回收率增加，阳性克隆得到富集。挑选15个结合力强的克隆进行测序，推导出2个多肽序列。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制人HMGB1-B box刺激THP-1细胞产生炎症因子的能力。结论获得了噬菌体呈现的能够抑制人HMGB1-B box的两个小肽。

关键词： HMGB1-B box 噬菌体肽库小肽

GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1342-1345页

作者：黄艳黄刚胡长江曾益军许志臻陈岺曦何凤田宋方洲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为加入GW3965共孵育后24 h。用LXR的特异性激动剂GW3965刺激人B细胞淋巴瘤株Raji细胞,经RT-PCR检测LXR特异性靶基因三磷酸腺苷结合盒A1(ATP-binding cassette,ABCA1)mRNA的表达;经RT-PCR和Western blot检测BLyS的表达。结果对照组1‰DMSO D(492)为(0.632±0.055),0.5、5μmol/L和10μmol/L的GW3965 D(492)为(0.609±0.073)、(0.612±0.052)和(0.628±0.055)。LXR的特异性配体GW3965对细胞活性无影响(P>0.05)。GW3965作用于Raji细胞后,ABCA1 mRNA表达剂量依赖性上调,LXR活化后可在转录和翻译水平剂量依赖性下调抑制BLyS的表达。结论 LXR在Raji细胞中可抑制BLyS的表达。

关键词： GW3965 B淋巴细胞刺激因子 Raji细胞

菊苣酸在HepG2细胞中对SOSC3表达的调节作用

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重庆师范大学学报（自然科学版） 2012年第6期29卷 75-79页

作者：潘志生许志臻陈苓曦黄刚何凤田陈斌曾益军第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所重庆高校生物活性物质工程研究中心重庆市动物生物学重点实验室重庆401331

探讨菊苣酸(Chicoric acid,CRA)在人肝细胞系HepG2细胞中对细胞因子信号转导抑制分子3(Suppressor of cyto-kine signaling 3,SOCS3)表达的影响,用剂量为0、5和50μg.mL-1 CRA分别处理HepG2细胞24h后,经RT-PCR、Real-time PCR检测SOCS3基因的mRNA表达情况,再以上述不同剂量CRA分别处理细胞24h以及50μg.mL-1CRA分别处理HepG2细胞0、6、12、18和24h后,用Western blot法检测SOCS3基因的表达情况。研究结果显示CRA作用于HepG2细胞后,SOCS3基因的mRNA和蛋白表达水平随着CRA剂量增加而显著下降(p<0.01),且呈现一定的剂量依赖性;随着处理时间的增加,SOCS3蛋白表达水平下降更加明显,说明在翻译水平CRA不仅呈剂量依赖性,还呈时间依赖性下调SOCS3蛋白的表达。这些结果提示CRA可抑制SOCS3蛋白在HepG2细胞中的表达。

关键词：菊苣酸细胞因子信号转导抑制分子3(SOCS3) HepG2细胞胰岛素抵抗