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作者：许勰浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的胸腺是连接衰老和免疫的关键器官。本研究通过构建阿霉素(Adriamycin,ADM)诱导的急性胸腺退化小鼠及其器官模型,研究急性免疫衰老胸腺中的胸腺上皮细胞(Thymic epithelial cells,TECs)的空间分布异常现象,探讨传统中药当归中有效成... 详细信息

目的胸腺是连接衰老和免疫的关键器官。本研究通过构建阿霉素(Adriamycin,ADM)诱导的急性胸腺退化小鼠及其器官模型,研究急性免疫衰老胸腺中的胸腺上皮细胞(Thymic epithelial cells,TECs)的空间分布异常现象,探讨传统中药当归中有效成分藁本内酯(Ligustilide,LIG)延缓胸腺免疫衰老的药效和作用机制。方法第一部分:腹腔注射ADM诱导小鼠胸腺急性退化,天突穴皮下或穴位注射藁本内酯干预。设置正常组、模型组、穴位/皮下注射PBS组,穴位/皮下+藁本内酯低、中、高剂量组(0.2、1、5 mg/kg)、雷帕霉素组(2 mg/kg i.p.)、盐酸二甲双胍组(200 mg/kg i.p.)。观察小鼠自主活动、抓力等衰老相关表征,检测胸腺部位微循环血流量;TRECs法检测胸腺输出功能;qPCR分析胸腺中irt6、P53、P21、PTMα、Tβ4、Tβ15、Tβ10mRNA表达;H&E和免疫荧光法观察胸腺结构及TECs分布;流式细胞术分析胸腺细胞亚群;Western Blot 法检测胸腺中 CYCLIN D1、α-TUBULIN、ECADHERIN、PROFILIN 2、P53蛋白表达。制备ADM诱导的胸腺上皮细胞衰老模型,0.01、0.1、1 μM藁本内酯干预。MTT法观察细胞存活率;β-半乳糖苷酶特异染色法检测细胞衰老;qPCR检测细胞中Sirt6、Sirt3、P53、P21,衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)Il-1α、Il-1β、Il-6、Il-8、Hgf、Cxcl 9、Cxcl 2,以及 PTMα、Tβ4、Tβ15、Tβ10、Tα1、Ts1p mRNA表达水平;荧光标记F-actin和G-actin观察细胞骨架;Western Blot 法检测细胞中 CYCLIN D1、α-TUBULIN、VIMENTIN、ECADHERIN、PROFILIN 2、P53蛋白表达。采用ADM诱导小鼠离体胸腺衰老,上述方法观察胸腺结构、TECs分布以及T细胞亚群的变化。采用肌动蛋白聚合抑制剂、Tβ15和 Tβ4过表达腺病毒验证药物可能的作用机制。第二部分:采用Tβ15敲低和过表达技术干预胸腺组织,观察胸腺结构变化及TECs分布;免疫组化法检测胸腺中CD3、CD4、CD8、TCR β 表达;qPCR 检测胸腺中 Aire、Fezf2、L1cam、β2M H2-K1、Gi、map3、Gimap4 S1p1、CD69、Sp1、Icam-1、Vcam-1 mRNA表达水平;流式细胞术分析胸腺细胞亚群的变化。构建人工胸腺类器官并裸鼠腋下移植类器官;采用上述方法观察胸腺类器官结构、TECs分布和胸腺输出功能。敲低和过表达iTECs细胞的Tβ15验证Tβ15调控TECs空间分布的可能机制。结果第一部分:与正常组相比,模型组小鼠胸腺结构紊乱,胸腺输出加速(P<0.01),P53、P21水平增加(P<0.05),Tβ4、Tβ15水平降低(P<0.01)。与模型组相比,穴位/皮下注射PBS组均降低胸腺输出功能(P<0.01),但穴位注射PBS组增加胸腺部位微循环血流量(P<0.05)、CD3+TCR β+和CD4SP T细胞比例(P<0.01);而皮下注射PBS组增加小鼠自主活动次数(P<0.01)。与对照组相比,穴位注射藁本内酯组小鼠皮髓质分界清晰,髓质网状上皮细胞数量增加,P53、P21水平降低,Tβ4、Tβ15水平升高,胸腺T细胞阳性选择过程恢复。皮下注射藁本内酯组相比对照组能增加小鼠体重、抓力及微循环血流量,降低P53、P21水平,增加胸腺哺育细胞数量及DPT细胞比例。ADM诱导的iTECs细胞经藁本内酯干预后衰老比例减少,微丝结构增加,P53、P21等衰老相关因子表达减少,PROFILIN2、α-TUBULIN、CYCLIND1蛋白表达增加。ADM诱导离体胸腺结构紊乱,TECs数量减少,DN T细胞发育受阻。藁本内酯逆转该过程,增加TECs数量和网状结构,促进DN向DP T细胞发育,增加CD3+TCRβ+和CD4SP T细胞比例。机制研究发现,ADM减少iTECs中的微丝,降低PROFILIN 2、CYCLIN D1、α-TUBULIN蛋白表达,增加Tβ4、Tβ15表达。藁本内酯通过调节Tβ4和Tβ15的表达,特别是Tβ15,平衡TECs的微丝组装。第二部分:Tβ15过表达时离体胸腺缩小,TECs数量减少,CD4SP T细胞比例降低,Aire、L1cam、51p1等mRNA水平降低。相反,Tβ15敲低促进胸腺萎缩(P<0.05)但扩张髓质,并逆转各项变化。人工胸腺类器官实验中,胸腺细胞与过表达Tβ15的iTECs细胞共培养的类器官体积更小(P<

关键词：藁本内酯胸腺素β15 空间发育胸腺上皮细胞免疫衰老

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孕期胸腺退化与产后再生的机制研究进展及产后方剂用药规律挖掘

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中国中药杂志 2023年第16期48卷 4275-4284页

作者：舒耀莹许勰张卓文高建莉浙江中医药大学药学院浙江杭州311499 浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053

为防止母体对半同种异体胎儿的免疫反应,孕期机体会出现以胸腺急性退化为代表的特殊适应性免疫系统改变,并能于产后快速修复。这种妊娠期胸腺急性退化(acute thymic involution,ATI)与性激素水平有关,主要由孕激素引起,表现在胸腺体积,... 详细信息

为防止母体对半同种异体胎儿的免疫反应,孕期机体会出现以胸腺急性退化为代表的特殊适应性免疫系统改变,并能于产后快速修复。这种妊娠期胸腺急性退化(acute thymic involution,ATI)与性激素水平有关,主要由孕激素引起,表现在胸腺体积,特别是皮质部分持续缩小,被膜下皮质上皮细胞(cortical thymic epithelial cells,cTECs)起皱并出现吞噬能力,其他胸腺上皮细胞(TECs)相对不变。而产后胸腺由转录因子叉头框N1(forkhead box N1,FOXN1)及其靶基因趋化因子(C-C基元)配体25[chemokine(C-C motif)ligand 25,CCL25]、趋化因子(C-X-C基元)配体12[chemokine(C-X-C motif)ligand 12,CXCL12]、δ样蛋白4(delta-like 4,DLL4)、组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)、丝氨酸蛋白酶16(serine protease,PRSS16)等共同介导再生,一旦产后胸腺修复不良,会导致母体免疫功能失调并罹患产褥疾病,严重危及母体及其后代的生存。中医学认为气血为胎孕的基石,而胸腺发挥关键的气血调控作用。由此可知孕产期的气虚血弱与孕期的ATI和产后胸腺再生不良息息相关。在此理论基础上,中医产后调理累积了丰富的学术思想和临床经验,该综述在系统阐述妊娠期ATI机制修复过程的基础上,通过数据挖掘分析2部中医经典女科著作《万氏女科》《傅青主女科》,发现产后常用中药有当归、人参、甘草、川芎,其中人参、当归、川芎是高频中药,对产后康复具有积极作用,而这些中药如何促进产后胸腺再生尚需进一步深入研究。

关键词：胸腺退化妊娠胸腺再生当归人参

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慢性不可预知温和应激通过抑制JAK2-PI3K通路影响乳腺癌小鼠胸腺功能的实验研究

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浙江中医药大学学报 2022年第4期46卷 376-387页

作者：郭文琴许勰刘曦高建莉浙江中医药大学药学院杭州310053 浙江中医药大学基础医学院

[目的]研究慢性应激导致的抑郁/焦虑等情绪失调状态下,乳腺癌机体胸腺免疫功能异常的神经-免疫学机制。[方法]将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)-1组、CUMS-2组和... 详细信息

[目的]研究慢性应激导致的抑郁/焦虑等情绪失调状态下,乳腺癌机体胸腺免疫功能异常的神经-免疫学机制。[方法]将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)-1组、CUMS-2组和CUMS-3组,每组6只。在小鼠乳腺脂肪垫接种4T1乳腺癌细胞,构建4T1乳腺癌模型,并采用不同程度CUMS刺激,分别构建不同程度CUMS乳腺癌小鼠模型。以旷场及强迫游泳实验观察行为活动;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大脑组织5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平;免疫荧光法观察胸腺上皮细胞(thymus epithelial cells,TECs)细胞角蛋白5(cytokeratin 5,CK5)和CK8的表达;流式细胞术分析胸腺细胞亚群分化簇3(cluster of differentiation 3,CD3)、CD4和CD8的比例;T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TRECs)法检测胸腺输出功能;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)分析胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素-7(interleukin-7,IL-7)、叉头样转录因子p3(forkhead transcription factor p3,Foxp3)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的mRNA表达水平;免疫印迹法检测胸腺TSLP、STAT3、Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)等相关蛋白表达水平。[结果]与正常组比较,模型组和CUMS各组胸腺结构紊乱,模型组胸腺组织TGF-β1、IL-5、IL-6、IL-10等mRNA水平显著增加,CD3+CD4-CD8-及CD3+CD4+CD8+T细胞比例显著降低,磷酸化信号转导和转录激活因子3(phospho-STAT3,p-STAT3)蛋白表达异常升高。与模型组比较,CUMS-3组小鼠大脑5-HT水平明显降低,肺转移率增高,胸腺输出功能明显抑制,髓质中TECs数量显著减少,IL-5等多个细胞因子mRNA水平显著降低,TSLP和IL-7 mRNA水平显著升高,胸腺组织磷酸化Janus激酶2(phospho-JAK2,p-JAK2)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶p55(phospho-PI3K p55,p-PI3K p55)降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]乳腺癌小鼠的胸腺功能紊乱,而CUMS可能通过抑制JAK2-PI3K通路,进一步抑制乳腺癌小鼠的胸腺功能,促进乳腺癌肺转移。

关键词：慢性不可预知温和应激情绪失调乳腺癌 Janus激酶2-磷脂酰肌醇-3-激酶通路胸腺功能作用机制

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供应链金融与企业投资效率——基于准自然实验的研究

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武汉金融 2024年第1期 21-31页

作者：芦彩梅杨吉勰山西大学经济与管理学院

在金融赋能实体经济、供给侧结构性改革大力推进的背景下,供应链金融是否影响企业投资效率备受关注。本文以2018年“供应链创新与应用试点”为准自然实验,实证探究供应链金融对企业投资效率的影响效应及作用机制。研究发现,供应链金融... 详细信息

在金融赋能实体经济、供给侧结构性改革大力推进的背景下,供应链金融是否影响企业投资效率备受关注。本文以2018年“供应链创新与应用试点”为准自然实验,实证探究供应链金融对企业投资效率的影响效应及作用机制。研究发现,供应链金融显著提高了企业投资效率。机制检验发现,供应链金融主要通过缓解企业融资约束和提高企业会计信息质量等渠道促进企业投资效率提升。异质性分析发现,当企业位于金融发展程度较高地区或产权性质为非国有时,供应链金融对其投资效率的促进效应更显著。进一步的检验结果表明,供应链金融提升企业投资效率主要表现为缓解投资不足,并且供应链金融引起的企业投资效率变化有助于企业价值的提升。建议政府以多层次、系统化的支持政策推动供应链金融的实施和发展,进一步促进企业投资效率提升。

关键词：供应链金融投资效率融资约束会计信息质量

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掌握史学概念解历史习题

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历史学习 2009年第12期 23-24页

作者：许勰浙江省回浦中学

高一习题中有这样一道题目:材料一(周)武王追思先圣王,乃褒封神农之后与焦,黄帝之后于祝,帝尧之后于蓟,帝舜之后于陈,大禹之后于杞。于是封功臣谋士,而师尚父为首封,封尚父于营丘,曰齐。封弟周公旦于曲阜,曰鲁。——《史记·周本纪》

关键词：实物史料习题历史事实史记梁启超二手文献资料发展过程材料类定义

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长距离跑步着地模式运动生物力学特征的可视化分析

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中国组织工程研究 2024年第32期28卷 5159-5166页

作者：杨俊聪黄睿伍勰上海体育大学运动健康学院上海市200438

背景:近年来,随着长距离健身跑的热度持续上升,相关的科学问题也有了更多的研究进展,其中长距离跑的着地模式在跑步技术层面上是一个重要的生物力学研究热点。目的:借助CiteSpace对相关文献进行可视化分析,对近10年来足着地模式为主题... 详细信息

背景:近年来,随着长距离健身跑的热度持续上升,相关的科学问题也有了更多的研究进展,其中长距离跑的着地模式在跑步技术层面上是一个重要的生物力学研究热点。目的:借助CiteSpace对相关文献进行可视化分析,对近10年来足着地模式为主题的文献进行梳理,明晰足着地模式的现状、热点和趋势。在此基础上,从生物力学角度对足着地模式的主要研究热点进行进一步讨论。方法:以“Foot strike pattern,Rearfoot strike,non-Rearfoot strike,Forefoot strike,Midfoot strike”作为英文关键词,在Web of Science核心集数据库中检索,对纳入文献采用CiteSpace软件进行可视化分析。结果与结论:①最终纳入896篇相关文献。年发文量总体呈上升趋势,发文量Top 3国家依次为美国、中国和英国;Top 3机构依次为哈佛大学、上海体育大学和马萨诸塞大学;Top 3作者依次为Davis Irene S,Hamill Joseph和傅维杰教授。②研究关键词以“裸足跑、跑者、损伤、足着地模式、运动学”出现频次较高,关键词聚类以“能量成本、负载率、足着地模式、危险因素、步态分析”研究至今仍持续火热。③详细分析上述数据后发现,近年来足着地模式整体研究热度保持稳定,热点主要集中于足着地模式的生物力学研究,此类研究趋势集中于不同着地模式(前足着地和后足着地)对于长距离跑者(裸足、穿鞋、距离、速度、损伤风险、跑步经济性和能量消耗等方面)的影响和适应性。④因此,目前研究提示,并无所谓“标准化最佳着地模式”,但可能存在“个性化最佳着地模式”,建议研究者未来要根据自己习惯方式、动作模式特征、运动水平以及任务属性进行有针对性的选择最优的着地模式和跑步技术策略,切勿生搬硬套。

关键词：着地模式可视化跑步距离马拉松步速跑步经济性损伤疲劳跑步鞋

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向光而生

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三角洲 2024年第6期 5-15页

作者：程勰中国民主同盟

一文化是什么？明天一辈子也没搞清楚，虽然在文化馆干了一辈子！有时，明天想，文化是不是就是政治，正如某个同志对政治的解说一样：政治就是我上来，你下去。事实好像也如此，明天在文化馆工作多年，就好像是这么回事。要不然，铁头...

一文化是什么？明天一辈子也没搞清楚，虽然在文化馆干了一辈子！有时，明天想，文化是不是就是政治，正如某个同志对政治的解说一样：政治就是我上来，你下去。事实好像也如此，明天在文化馆工作多年，就好像是这么回事。要不然，铁头怎么会下去，他怎么会上来。说起这件事儿，还真有些难以启齿。那是为了当馆长，自己是想了好多办法、动了好多脑子。就拿文化来讲，自己莫过于嘴皮子薄些，即爱说，拿当地人的话就是：屄屄鬼！文明些说或者说讲点文化就是嘴会说些，再文诌些就叫有口才。明天想起与铁头的“政治斗争”中铁头输了，输了一辈子，

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2023年中国自行车电动自行车行业十件大事

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中国自行车 2024年第1期 10-15页

作者：智勰不详

2023年是贯彻落实党的二十大精神开局之年,是改革开放45周年,是“一带一路”倡议提出10周年,同样也是疫情防控转段后的第一年。在国家一系列扩大内需、提振信心、防范风险的政策举措作用下,国民经济延续恢复态势,发展质量稳步提高,中国... 详细信息

2023年是贯彻落实党的二十大精神开局之年,是改革开放45周年,是“一带一路”倡议提出10周年,同样也是疫情防控转段后的第一年。在国家一系列扩大内需、提振信心、防范风险的政策举措作用下,国民经济延续恢复态势,发展质量稳步提高,中国自行车电动自行车行业也在2023年迎来了发展的新周期;全行业勠力同心,不负众望地提交了一份“干中有成、稳中有进”的年度答卷。

关键词：防范风险扩大内需疫情防控电动自行车行业稳中有进一带一路第一年政策举措

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国库集中支付在财政支出管理中的应用与探索

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财经界 2024年第2期 9-11页

作者：陆勰常熟市常福街道社会事务服务中心

伴随着国库集中支付制度的实施以及大范围的落地，我国的财政资金由原来的分散支付转变为集中管理，紧随而来的便是集中支出带来的财政风险，国库集中支付在财政支出环节会面临多样化的危机。基于此，积极探索国库集中支付在财政支出管... 详细信息

伴随着国库集中支付制度的实施以及大范围的落地，我国的财政资金由原来的分散支付转变为集中管理，紧随而来的便是集中支出带来的财政风险，国库集中支付在财政支出环节会面临多样化的危机。基于此，积极探索国库集中支付在财政支出管理中的应用有着重要的现实意义。本文主要分析在国库集中支付环境下财政支出管理的各类危机等，并研究科学举措，运用各项精准措施，优化国库集中支付在财政支出管理中的应用。

关键词：国库集中支付财政支出管理应用

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黄芩苷通过调控PI3K/AKT信号通路抑制登革病毒感染诱导的人静脉内皮细胞的自噬

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南方医科大学学报 2024年第7期44卷 1272-1283页

作者：程瑶王远迎姚飞扬胡盼陈铭勰吴宁贵州医科大学基础医学院化学与生物化学实验室贵州贵阳561113

目的探究2型登革病毒(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)对细胞自噬的影响及黄芩苷(BA)抗DENV-2感染的具体作用机制。方法HUVECs体外培养,设置对照组:HUVECs正常培养;DENV-2感染组:HUVECs+DENV-2;黄芩苷组:HUVECs+DENV-2+BA。用DENV-2感染HUVECs通过透射电镜观察自噬;Western blotting检测细胞自噬相关蛋白LC3、P62的表达,采用溶酶体红色荧光探针染色法观察DENV-2感染后HUVECs内溶酶体的pH变化;蛋白质组学筛查DENV-2感染HUVECs后差异蛋白的表达情况;使用CCK-8法测定黄芩苷对HUVECs活性的影响;RT-qPCR检测细胞内病毒RNA的复制情况;检测病毒NS1蛋白的表达情况;通过透射电镜观察细胞自噬;采用Lyso-Tracker Red染色法观察黄芩苷对DENV-2感染后HUVECs内溶酶体酸化的影响;检测细胞自噬相关蛋白ATG5、Beclin-1、LC3、P62的表达,自噬小体和溶酶体融合的关键蛋白STX17、SNAP29、VAMP8表达情况及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果DENV-2感染可诱导细胞自噬小体的形成;DENV-2感染后LC3Ⅱ/LC3 I表达逐渐增高,48 h达到峰值(P<0.05);p62表达水平在感染前中期无明显变化,48 h后降低(P<0.05);Lysotracker red染色结果显示DENV-2感染组红色亮点较多,且染色明亮。CCK-8结果显示50μg/mL被视为黄芩苷对HUVECs细胞的最大无毒剂量。RT-qPCR结果显示随着黄芩苷浓度增加药物对病毒的抑制作用增强。黄芩苷可降低DENV-2 NS1蛋白的表达(P<0.001)。与DENV-2组相比,经过黄芩苷(50μg/mL)处理后,自噬减少,加入黄芩苷后抑制溶酶体酸化。黄芩苷组48 h LC3 II/LC3 I比值降低(P<0.05),48 h时p62表达增加(P<0.05)。经过黄芩苷处理后DENV-2诱导的自噬相关蛋白Beclin-1、ATG 5、STX17、SNAP29和VAMP8的表达下调(P<0.01)。蛋白组学结果显示PI3K-AKT通路在DENV的发病机制中可能发挥重要作用。加入PI3K抑制剂(LY294002)后,DENV-2的RNA表达水平降低,各组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达水平的蛋白表达水平降低(P<0.01)。用黄芩苷处理后,DENV-2感染组PI3K、AKT的mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),而mTOR mRNA表达无明显变化。DENV-2感染组上调的p-PI3K、p-AKT的蛋白表达水平均降低(P<0.05),而p-mTOR表达无明显变化。DENV-2诱导的LC3、P62蛋白表达降低(P<0.05);在黄芩苷治疗组中也抑制了病毒诱导的自噬。结论DENV-2感染可促进HUVECs细胞自噬的发生,黄芩苷可抑制DENV-2的RNA和NS1蛋白的表达,可能通过抑制自噬发生及自噬体和溶酶体融合,降低DENV-2诱导的自噬,其作用机制可能是通过PI3K/AKT信号通路调控。

关键词：登革病毒黄芩苷自噬 PI3K/AKT 人脐静脉内皮细胞

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