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基于UPLC-Q-Orbitrap-MS的整合定性策略分析茯苓类药材差异化学成分

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王佳媛范晓涵魏晓晓曹蓉王进王蕾许凤清黄顺旺吴德玲赵宏苏安徽中医药大学药学院国家中医药管理局中药炮制传承基地省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心中药饮片制造新技术安徽省重点实验室合肥济生源药业饮片有限公司合肥创新医药技术有限公司

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），联合质量亏损过滤（MDF）和分子网络整合技术，建立快速鉴定茯苓类药材中差异化学成分的分析方法。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS在正负离子模式下... 详细信息

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS），联合质量亏损过滤（MDF）和分子网络整合技术，建立快速鉴定茯苓类药材中差异化学成分的分析方法。方法：采用UPLC-Q-Orbitrap-MS在正负离子模式下对茯苓类药材进行质谱数据采集及鉴定，借助MDF对三萜类成分进行裂解行为研究和结构鉴定，基于各成分MS/MS离子碎片的相似度创建全球天然产物社会分子网络（GNPS），利用软件Cytoscape 3.6.1可视化结构相似的分子簇，对主要的化合物类别的结构进行鉴定及确证。采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）等多元统计分析，以变量重要性投影（VIP）值>1、P<0.05为标准筛选5种茯苓类药材的差异成分。结果：通过数据库比对鉴定出66种化合物，经MDF新鉴定出8种化合物，经GNPS新鉴定出28种化合物，共鉴定出102种化学成分，其中三萜类成分43种，糖类成分16种，氨基酸及肽类26种，核苷类3种，其他类化合物14种，并筛选出15种共有差异化学成分，包括D-色氨酸、丝氨酸、鸟嘌呤核苷、没食子酸、2-辛烯醛、木糖、麦芽三糖、栓菌酸、去氢齿孔酸、松苓新酸、茯苓酸A、茯苓酸B、茯苓酸E、茯苓酸G、过氧去氢土莫酸，在不同茯苓类药材中的相对含量有明显差异。结论：在5种茯苓类药材中，成分的种类整体相似，但其相对含量存在显著差异，尤其是在三萜类成分的分布上。UPLC-Q-Orbitrap-MS、MDF与GNPS整合技术的联用，可为其他中药的快速定性分析提供思路。

关键词：分子网络质量亏损过滤超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS) 多元统计分析差异化合物成分鉴定三萜类成分

多花黄精炮制前后化学成分差异的UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：任萃姣丁杨飞李靖季历帅帅李鹏飞张伟赵宏苏许凤清金传山刘军玲安徽中医药大学药学院国家中医药管理局中药炮制传承基地省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽省食品药品检验研究院国家药监局中药质量研究与评价重点实验室

目的：基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）探讨多花黄精生品与酒制品化学成分差异。方法：采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液... 详细信息

目的：基于超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）探讨多花黄精生品与酒制品化学成分差异。方法：采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0～5 min，5%B；5～10 min，5%～15%B；10～12 min，15%～20%B；12～15 min，20%B；15～18 min，20%～40%B；18～22 min，40%～65%B；22～25 min，65%～95%B；25～32 min，95%B；32～32.5 min，95%～5%B；32.5～38 min，5%B），使用电喷雾离子源（ESI），正、负离子模式检测，扫描范围m/z 80～1 200。使用Compound Discoverer v.3.3软件对原始数据处理后提取有效响应离子，结合多元统计分析并根据VIP>1，P2或FC<0.5条件筛选多花黄精炮制前后的差异化合物，基于保留时间、准分子离子、碎片离子等信息结合并结合对照品及文献信息进行成分鉴定，通过聚类分析进一步分析显著性差异化合物并进行半定量分析黄精炮制前后主要成分变化规律。结果：共鉴定出多花黄精生品与酒制品差异成分72个，包括生物碱类15个、有机酸类12个、氨基酸类12个、黄酮类6个、糖类4个、其他类23个。共有显著性差异成分18个，其中L-苹果酸、乳酸、天师酸、L-焦谷氨酸、新甘草素、黄精碱A、黄精碱B、果糖、5-羟甲基糠醛、3-（2，6-dioxocyclohexyl）propanenitrile、8-羟基色原酮、3-（9，12）-十八碳二烯酰基甘油和邻苯二甲酸二丁酯炮制后含量呈现上升趋势；反式-3-吲哚丙烯酸、L-精氨酸、D-色氨酸、disporopsin和5，7-dihydroxy-3-（4'-hydroxybenzyl）-chroman-4-one炮制后含量呈现下降趋势。结论：多花黄精炮制前后化学成分存在明显差异，主要为有机酸类、糖类、氨基酸类、黄酮类、生物碱类成分，可为黄精炮制机理的深入研究奠定基础。

关键词：黄精酒制多花黄精超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS) 半定量分析化学成分差异

基于化学计量学评价不同类型多花黄精药材和酒黄精饮片的品质

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安徽中医药大学学报 2024年

作者：李靖季任萃姣历帅帅李鹏飞许凤清柳春风金传山中药饮片制造新技术安徽省重点实验室金寨润元生物科技有限公司安徽中医药大学药学院省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽中医药大学国家中医药管理局中药炮制传承基地

目的比较不同生境、不同性状多花黄精药材和酒黄精饮片质量，优选黄精品质和种植生境，为优质酒黄精饮片的选择提供参考。方法以醇浸出物、多糖、单糖、二糖和黄精碱A为指标，运用双因素分析法、层次聚类分析、正交偏最小二乘-判别分... 详细信息

目的比较不同生境、不同性状多花黄精药材和酒黄精饮片质量，优选黄精品质和种植生境，为优质酒黄精饮片的选择提供参考。方法以醇浸出物、多糖、单糖、二糖和黄精碱A为指标，运用双因素分析法、层次聚类分析、正交偏最小二乘-判别分析分析不同类型多花黄精药材和酒黄精饮片质量的影响因素，结合熵权-TOPSIS法综合评价其品质。结果生境类型和性状对多花黄精质量均有不同程度的影响，且性状的影响大于生境，生境与性状的交互作用无显著影响；不同类型多花黄精炮制前后差异显著，黄精药材与酒黄精质量呈正相关，以山地背阴大田白及形黄精质量较为突出，姜形和白及形酒黄精饮片质量相近。同生境下白及形酒黄精的醇浸出物、多糖、果糖、黄精碱A含量最高，其次是姜形，圆柱形最少。综合评分得出，性状相同的多花黄精大田背阴生境下质量优于林下生境，且呈现白及形黄精质量优于姜形和圆柱形。结论不同类型多花黄精药材与酒黄精饮片均以背阴大田白及形黄精质量较优，营养成分积累最多。

关键词：多花黄精生境性状质量评价化学计量学

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瓜蒌皮的化学成分研究

安徽中医药大学学报 2024年第3期43卷 104-109页

作者：尹嘉敏王仁中曾凡俊刘劲松黄圣卓许凤清吴德玲安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012 海关总署(北京)国际旅行卫生保健中心北京100013 中国热带农业科学院海南热带农业资源研究所海南海口571101

目的研究瓜蒌Trichosanthes kirilowii Maxim.干燥成熟果皮的化学成分。方法应用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、ODS反相色谱柱以及半制备HPLC等方法对瓜蒌皮水提物进行分离纯化,根据1H-NMR、13 C-NMR和HRMS等波谱学方法对所得化合物进行结... 详细信息

目的研究瓜蒌Trichosanthes kirilowii Maxim.干燥成熟果皮的化学成分。方法应用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、ODS反相色谱柱以及半制备HPLC等方法对瓜蒌皮水提物进行分离纯化,根据1H-NMR、13 C-NMR和HRMS等波谱学方法对所得化合物进行结构鉴定。结果从瓜蒌皮水提物的乙酸乙酯萃取部位共分离得到12个化合物,其结构鉴定为葫芦素D(1)、葫芦素B(2)、异葫芦素D(3)、fabacein(4)、23,24-二氢葫芦素D(5)、柯伊利素7-O-β-D吡喃葡萄糖苷(6)、blumenol A(7)、对羟基苯甲酸(8)、5-oxymaltol(9)、香草酸(10)、烟酸(11)和3-maleimide-5-oxime(12)。结论化合物4为首次从天然植物中分离得到,化合物3、8、9、11、12为首次从瓜蒌皮中分离得到。

关键词：瓜蒌皮化学成分提取分离结构鉴定

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天麻花茎的化学成分研究

中草药 2023年第23期54卷 7717-7722页

作者：秦诗慧吴丝雨杨柳许凤清胡江苗安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室中国科学院植物研究所云南昆明650201

目的研究天麻Gastrodia elata花茎的化学成分。方法利用硅胶、Sephadex LH-20等各种色谱技术进行分离纯化,通过核磁图谱、IR、UV、质谱等多种方法并结合文献对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从天麻花茎95%乙醇提取物的醋酸乙酯... 详细信息

目的研究天麻Gastrodia elata花茎的化学成分。方法利用硅胶、Sephadex LH-20等各种色谱技术进行分离纯化,通过核磁图谱、IR、UV、质谱等多种方法并结合文献对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从天麻花茎95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为(S)-6,12-二羟基-9-甲氧基-3,3-二甲基-8,9-二氢-3H,7H-苯并[2,3]氧杂?并[4,5-b]吡喃并[2,3-h]苯并吡喃-7-酮(1)、2-(2,4-二羟基苯基)-5-羟基-3-(2-羟基-3-甲基丁-3-烯-1-基)-8,8-二甲基-4H,8H-吡喃并[2,3-f]苯并吡喃-4-酮(2)、桑黄酮C(3)、黑桑素H(4)、新环桑色烯(5)、morusin hydroperoxide(6)、桑辛素(7)、licofavone C(8)、环桑素(9)、交链孢酚(10)、3,4-dihydroxy-benzoic(11)、对羟基苯甲醇(12)、N-trans-grossamide(13)。结论化合物1为新化合物,命名为降环桑色烯;化合物2~9为首次从该植物中分离得到。

关键词：天麻降环桑色烯黑桑素H 环桑素桑辛素

基于TLR4/NF-κB通路探讨石斛多糖改善CSE诱导的人支气管上皮细胞炎性损伤

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中国实验方剂学杂志 2023年第23期29卷 64-71页

作者：王蕾王雅娟贺增洋许凤清王文斌王桐生舒俊生安徽中医药大学合肥230012 安徽中烟工业有限责任公司技术中心合肥230088 安徽中医药大学药学院合肥230012

目的:探讨石斛多糖对香烟烟雾提取物(CSE)损伤的人支气管上皮细胞(16HBE)的炎症因子分泌及TLR4/NF-κB通路活性的影响。方法:体外培养16HBE细胞,设置空白组、CSE损伤组、CSE+石斛多糖组(100、200、400 mg·L^(-1)),CCK-8法检测细胞活力... 详细信息

目的:探讨石斛多糖对香烟烟雾提取物(CSE)损伤的人支气管上皮细胞(16HBE)的炎症因子分泌及TLR4/NF-κB通路活性的影响。方法:体外培养16HBE细胞,设置空白组、CSE损伤组、CSE+石斛多糖组(100、200、400 mg·L^(-1)),CCK-8法检测细胞活力,显微镜观察细胞状态,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-8、IL-1β、IL-4、IL-13、转化生长因子(TGF)-β含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)及IL-4 mRNA的相对表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白细胞介素-4受体(IL-4R)、TLR4、髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及核蛋白NF-κB(NEs-NF-κB)蛋白相对表达量,免疫荧光法检测NF-κB核转位水平。结果:与空白组比较,CSE损伤组细胞存活率降低,细胞皱缩,细胞培养上清中IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量明显增加(P<0.05,P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平显著升高(P<0.01),NF-κB入核现象明显;与CSE损伤组比较,石斛多糖各剂量组细胞存活率显著升高,细胞状态恢复,IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量及TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核明显减少。结论:石斛多糖对CSE诱导的16HBE细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性有关。

关键词：石斛多糖人支气管上皮细胞(16HBE) 香烟烟雾提取物(CSE) 炎症因子 Toll样受体4(TLR4) 核转录因子-κB(NF-κB)

多花黄精炮制前后不同极性部位抗氧化与降血糖活性研究

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食品与发酵工业 2022年第8期48卷 70-75页

作者：滕欢欢王仁中吴德玲金传山柳春风唐旭黄圣卓许凤清安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽合肥230012 金寨润元生物科技有限公司安徽六安237300 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南省黎药资源天然产物研究与利用重点实验室海南海口571101

研究多花黄精炮制前后不同极性部位的抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,筛选最佳活性部位。采用50%乙醇回流提取制备多花黄精生品和蒸制品醇提物,并测定其多糖、总黄酮、总酚含量。利用系统溶剂萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇... 详细信息

研究多花黄精炮制前后不同极性部位的抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,筛选最佳活性部位。采用50%乙醇回流提取制备多花黄精生品和蒸制品醇提物,并测定其多糖、总黄酮、总酚含量。利用系统溶剂萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水相4个不同极性部位,以维生素C为对照,采用DPPH法、ABTS法、羟自由基法和超氧阴离子自由基等方法评价其抗氧化活性,同时以阿卡波糖为阳性对照测定各部位对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,多花黄精炮制加工后的醇提物中多糖含量降低,总黄酮、总酚含量升高,抗氧化和降血糖活性增强。多花黄精炮制前后不同极性萃取相均显示不同程度的作用,抗氧化综合能力顺序为:乙酸乙酯相>水相>正丁醇相>石油醚相,且制多花黄精醇提物>生多花黄精醇提物,蒸制品多花黄精乙酸乙酯相抑制α-葡萄糖苷酶活性最强,IC_(50)=(1.369±0.004)mg/mL。该研究结果为药食同源植物多花黄精作为降血糖食品和天然抗氧化剂提供了理论依据。

关键词：多花黄精提取物抗氧化 α-葡萄糖苷酶自由基

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正交试验法优选半夏有效部位的提取工艺

中药材 2004年第7期27卷 524-525页

作者：吴皓王媚许凤清张永太南京中医药大学海洋药物研究中心南京210029

目的 :研究半夏药材中总游离有机酸的最佳提取条件。方法 :以电位滴定法为含量测定方法 ,采用重复正交试验法 ,选择乙醇浓度 (A)、提取时间 (B)、溶剂量 (C)、提取次数 (D) 4个因素 ,每个因素选取 3个水平进行试验 ,最后确定提取工艺... 详细信息

目的 :研究半夏药材中总游离有机酸的最佳提取条件。方法 :以电位滴定法为含量测定方法 ,采用重复正交试验法 ,选择乙醇浓度 (A)、提取时间 (B)、溶剂量 (C)、提取次数 (D) 4个因素 ,每个因素选取 3个水平进行试验 ,最后确定提取工艺。结果 :因素A、B、C、D均对总游离有机酸的含量有极显著的影响。结论 :10倍量 75 %乙醇 ,加热回流提取 2次 ,每次 1h为半夏中总游离有机酸的最佳提取条件。

关键词：正交试验法优选半夏有效部位提取工艺中药

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毛泽东与外语

理论导刊 1994年第2期 18-20页

作者：许凤清

毛泽东与外语许凤清１９１３：我学习写英文大家都熟知毛泽东有着渊博的中国文史知识，其实，毛泽东也历来重视外国语言的学习和对世界知识的了解。１９１０年毛泽东在湖南湘乡县东山高等小学堂读书时，就开始学习英语。当时教英语的是... 详细信息

毛泽东与外语许凤清１９１３：我学习写英文大家都熟知毛泽东有着渊博的中国文史知识，其实，毛泽东也历来重视外国语言的学习和对世界知识的了解。１９１０年毛泽东在湖南湘乡县东山高等小学堂读书时，就开始学习英语。当时教英语的是一位从日本留学回国的年轻教员．他对...

关键词：毛泽东学习英语世界语基辛格学习外语英语词汇尼克松达尔文学英语英文