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内含肽介导的撕裂Cas9:一种非转基因的植物基因编辑系统

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西南大学学报（自然科学版） 2023年第8期45卷 105-112页

作者：贾凌许冰心叶冬梅李亚秀夏庆友西南大学前沿交叉学科研究院生物学研究中心重庆400715

CRISPR/Cas9技术在植物的基础研究以及谷物的遗传改造方面展现出了前所未有的潜力.目前植物基因编辑方法大多是基于农杆菌介导的遗传转化,该方法不仅涉及转基因过程,容易引发公众关注,同时该方法对较难转化的植物而言有一定的技术挑战.... 详细信息

CRISPR/Cas9技术在植物的基础研究以及谷物的遗传改造方面展现出了前所未有的潜力.目前植物基因编辑方法大多是基于农杆菌介导的遗传转化,该方法不仅涉及转基因过程,容易引发公众关注,同时该方法对较难转化的植物而言有一定的技术挑战.研究开发了一个简单的非转基因植物基因编辑方法,即采用病毒递送的方式将片段化的Cas9和gRNA运送到烟草中.为了适应马铃薯病毒X载体的运载能力,将金黄色葡萄球菌SaCas9分成3个部分,用2个片段化的内含肽将其连接成完整的Cas9蛋白.结果表明:在培养的细胞和植物叶片中,2个片段化的内含肽均能使3个片段化的Cas9重组为完整的Cas9蛋白.将3个片段化的载体和1个sgRNA载体注射到叶片中,能对PDS基因进行靶向编辑.该非转基因的植物基因编辑方法可能对其他多种植物有一定的应用效果.

关键词： CRSIPR/Cas9技术基因工程基因组修饰植物基因编辑

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寒香蜜自然发酵葡萄酒香气成分的研究

寒香蜜自然发酵葡萄酒香气成分的研究

作者：许冰心沈阳农业大学

学位级别：硕士

寒香蜜葡萄属于欧美品系,天然无核,果肉脆而多汁,味道香甜如蜜,具有极强的抗病抗寒性。其自然发酵的葡萄酒颜色呈浅红色,香气特殊,口感清爽。本试验以采自辽宁鞍山地区新鲜成熟寒香蜜葡萄为原料,采用液-液萃取法对寒香蜜葡萄及其自然发... 详细信息

寒香蜜葡萄属于欧美品系,天然无核,果肉脆而多汁,味道香甜如蜜,具有极强的抗病抗寒性。其自然发酵的葡萄酒颜色呈浅红色,香气特殊,口感清爽。本试验以采自辽宁鞍山地区新鲜成熟寒香蜜葡萄为原料,采用液-液萃取法对寒香蜜葡萄及其自然发酵葡萄酒富集香气,通过气相色谱-质谱联用仪、内标法分析不同发酵时期寒香蜜葡萄酒香气成分的差异变化,使用标准品分析了主要香气成分的绝对含量,掌握其香气变化规律,分析了主要香气的来源及其与品质指标的变化关系,鉴定寒香蜜白兰地的香气成分,了解其与寒香蜜葡萄酒香气差异,为酿造优质寒香蜜葡萄酒及其开发利用提供理论依据。主要研究结果如下：1.寒香蜜葡萄中共鉴定35种成分,包括13种酯类、9种烷烃类、4种醇类、3种醛类、3种酮类和3种其它成分,含量较高的有己二酸二乙基己酯、棕榈酸、邻苯二甲酸二丁酯、3-羟基丁酸乙酯、2,4-癸二烯酸乙酯、棕榈酸乙酯、己二酸二辛酯、顺-3-己烯醇等。根据OVA值得出主要活性香气成分有丁酸乙酯、3-羟基丁酸乙酯、顺-3-己烯醇、水杨酸甲酯、仲辛酮、苯乙醇、肉桂酸乙酯。2.寒香蜜葡萄酒在四个不同发酵时期的香气分析共被鉴定出127种香气成分,均以醇类、酯类、酸类为主。在发酵30d时寒香蜜葡萄酒鉴定的成分最多,为56种,而在发酵70d时鉴定的香气成分含量最多,为410.97mg/L。其中含量较高的有：2,3-丁二醇、L-乳酸、乳酸乙酯、异戊醇、苯乙醇、异丁醇等。3.通过比较在四个不同时期寒香蜜葡萄酒香气成分的变化,得出香气成分种类数量随时间的变化先增加后减少,香气成分含量的变化是一直持续增加;醇类、酯类、有机酸类含量随着时间的变化而呈现一直增加的状态;羰基化合物(醚酮类)其随着时间的变化而呈现出减少状态;其他类物质的含量随着时间的变化而呈现出波动状态先增加再减少。4.通过主成分分析方法确定寒香蜜葡萄酒的主要香气成分有1-丙醇、正丁醇、异丁醇、异戊醇、2,3-丁二醇、苯甲醇、苯乙醇、3-羟基丁酸乙酯、4-羟基丁酸内酯、丁二酸二乙酯、丁二酸单乙酯、乳酸乙酯、4-羟基-2,5-二甲基-3-2H-呋喃酮。比较寒香蜜葡萄和葡萄酒的香气成分,其中苯乙醇、3-羟基丁酸乙酯来源于果香和发酵香,其他主要香气成分来源于发酵香。5.寒香蜜葡萄酒中不同发酵期的不同种类香气含量变化与其主要营养指标变化进行相关性分析,得到总糖变化与醇类含量和醚酮类含量显著相关,总酚变化与酯类含量、酸类含量、醚酮类含量显著相关,总酸变化与酸类含量极显著相关,酒精度变化与醇类含量极显著相关,色度值变化与醇类含量、酯类含量、醚酮类含量显著相关。6.寒香蜜葡萄酒主要香气成分中异戊醇、苯甲醇和苯乙醇进行准确定量分析,可得出异戊醇和苯乙醇含量在发酵过程中持续增加,而苯甲醇含量则先增加后减少。异戊醇与酒精度正相关显著,对色度值是正相关极显著;苯甲醇与pH值正相关显著;苯乙醇对酒精度正相关显著,对总糖和色度值是正相关极显著。苯乙醇、苯甲醇、异戊醇含量变化与寒香蜜葡萄酒品质理化指标有关联性。7.在寒香蜜白兰地香气分析中,鉴定出13种成分化合物,主要成分为乙酸(28%)、异戊醇(26%)、乳酸乙酯(21%)、异丁醇(5.7%)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(4.8%)、苯乙醇(4.6%)。寒香蜜白兰地主要香气成分与葡萄酒主要香气成分种类一致。含量有差异。8.寒香蜜葡萄酒在香气分析和感官分析中感官特性一致,具有酿制优质葡萄酒的潜质,亦可制成寒香蜜白兰地。

关键词：寒香蜜葡萄酒香气成分气相色谱/质谱分析(GC-MS)

机械刺激在体小鼠早衰卵巢激活休眠卵泡的实验研究

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机械刺激在体小鼠早衰卵巢激活休眠卵泡的实验研究

作者：许冰心中国医科大学

学位级别：硕士

目的:卵巢早衰是当今女性不孕的主要原因之一。由于原始卵泡储备较少且成熟障碍,导致自然受孕率极低,因此如何激活残余的原始卵泡成为治疗的关键。2013年日本学者通过片段化卵巢皮质体外激活剂共培养激活休眠的原始卵泡获得一例妊娠,201... 详细信息

目的:卵巢早衰是当今女性不孕的主要原因之一。由于原始卵泡储备较少且成熟障碍,导致自然受孕率极低,因此如何激活残余的原始卵泡成为治疗的关键。2013年日本学者通过片段化卵巢皮质体外激活剂共培养激活休眠的原始卵泡获得一例妊娠,2016年我国学者仅通过片段化皮质移植也成功获得妊娠。由于体外激活剂安全性未知,且卵巢皮质移植后没有快速的血管吻合和血供建立,早期处于一种缺血缺氧状态,引起大量卵泡丢失等问题,该项技术仍处于探索阶段。本实验通过在体刺激早衰小鼠卵巢,检测处理前后各组卵泡数目及前后激素变化,探究卵巢早衰患者辅助生殖技术的新方法及其运用的可行性。材料与方法:本研究采取环磷酰胺构建早衰小鼠模型,将全部小鼠分为6组,空白对照组、模型对照组、实验组A、实验组B、老年对照组、老年实验组。取眶后静脉血备用后实验组针刺双侧卵巢各25次,深度约1mm,对照组仅需探查见卵巢即可关腹。除实验组B于术后第10d促排卵,第13d处死外,其余各组于术后第5d给予促排卵,第8d处死。取双侧卵巢组织及静脉血,检测处理前后激素水平变化及各组小鼠卵巢组织HE染色观察各级卵泡数目。剩余造模小鼠于干预后1h取卵巢组织行免疫组化检测YAP蛋白表达。研究结果:1.造模后小鼠体重26.83±0.68g,造模前28.5±0.57g,二者相比差异有统计学意义(P0.05),实验组A生长卵泡数为40.2±4.1个,较实验组B相比差异无统计学意义(P>0.05)。5.免疫组化结果提示:机械刺激小鼠卵巢皮质颗粒细胞核内YAP蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。研究结论:1.机械刺激小鼠卵巢组织可激活卵巢早衰小鼠休眠卵泡。2.机械刺激早衰卵巢激活休眠卵泡可能是通过阻断Hippo信号通路,使颗粒细胞核内YAP蛋白表达增多实现的。

关键词：卵巢早衰机械刺激休眠卵泡 Hippo信号通路

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某混动变速器挡位离合器微动磨损问题分析

汽车实用技术 2022年第16期47卷 104-109页

作者：华晓波刘耀东许冰心泛亚汽车技术中心有限公司上海201201

某混动变速器挡位离合器在耐久试验过程中出现摩擦片与内毂连接花键微动磨损失效问题。基于微动磨损理论,找出影响磨损量的关键因素。结合有限元分析(FEA),复现失效问题,得出轴系弯曲变形、外毂轴向变形、花键齿面接触应力为失效的主要... 详细信息

某混动变速器挡位离合器在耐久试验过程中出现摩擦片与内毂连接花键微动磨损失效问题。基于微动磨损理论,找出影响磨损量的关键因素。结合有限元分析(FEA),复现失效问题,得出轴系弯曲变形、外毂轴向变形、花键齿面接触应力为失效的主要原因。综合考虑空间限制因素后,从降低齿面接触应力着手,通过增加花键齿数、摩擦片与钢片连接关系互换等,有效降低理论接触应力达到85%,并通过有限元仿真进一步确认实际内毂接触应力降低75%以上。最终改进方案通过离合器耐久试验认证。研究结果为变速器内出现的微动磨损问题解决提供了一定的指导。

关键词：混动变速器挡位离合器微动磨损问题分析耐久试验

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铁路超重货物运输的制约因素与相关建议

铁道运输与经济 2010年第5期32卷 62-64页

作者：牛琳璇许冰心巩伟中铁特货大件运输有限责任公司市场技术部北京100070

结合我国既有铁路桥梁及车辆装备现状,分析铁路超重货物运输的制约因素主要是既有桥梁设计标准偏低和早期特种车辆设计较少考虑过桥性能两个方面。针对铁路超重货物运输的发展,在提高货车装备水平的基础上,建议在提高桥梁承载能力、优... 详细信息

结合我国既有铁路桥梁及车辆装备现状,分析铁路超重货物运输的制约因素主要是既有桥梁设计标准偏低和早期特种车辆设计较少考虑过桥性能两个方面。针对铁路超重货物运输的发展,在提高货车装备水平的基础上,建议在提高桥梁承载能力、优化车辆设计、铁路特种车辆与大型设备相匹配和加强桥梁日常安全管理等方面综合改善超重货物运输条件。

关键词：铁路超重货物桥梁承载能力

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热源移动方式对熔池元素分布的影响

工程热物理学报 2017年第1期38卷 176-182页

作者：童莉葛许冰心尹少武高婷王立白世武北京科技大学能源与环境工程学院北京100083 北京科技大学北京市高效节能与环保工程研究中心北京100083 中国石油天然气管道科学研究院廊坊065000

本文对比了匀速(V1)、先匀加速后匀减速(V2)、三角函数(V3)、先匀加速再匀速后匀减速(V4)等四种不同焊炬移动方式下的熔池内部传热传质和元素分布的规律,结果表明:V1方式下的熔池的形状比较规则,而其他三种情况的熔池形状不规则。焊炬... 详细信息

本文对比了匀速(V1)、先匀加速后匀减速(V2)、三角函数(V3)、先匀加速再匀速后匀减速(V4)等四种不同焊炬移动方式下的熔池内部传热传质和元素分布的规律,结果表明:V1方式下的熔池的形状比较规则,而其他三种情况的熔池形状不规则。焊炬移动方式对不同元素在熔池内的分布的影响不同,以Mn元素为例,V1方式的熔池元素含量的最大偏差为1.79%;V2的元素含量在熔池和母材交界处会有一些波动,熔池内Mn元素含量差异最大为5.61%;V3方式下,元素含量波动较为剧烈,Mn元素含量差异最大达到13.23%;V4方式下,熔池内元素分布呈单峰或单谷,在熔池内部元素含量并不均匀。焊炬移动方式对熔池与母材中元素含量的差异也有较大影响,对比四种不同移动方式下的C元素分布发现:V1方式下,整个熔池区域的C元素含量比母材中C元素含量高8.43%,而V2、V3、V4方式下,则分别比母材中C含量高16.40%、12.25%和25.00%。由此可见,V1方式下,熔池内元素含量与母材元素含量相差最小,元素分布更为均匀,焊接性能更加良好。

关键词：元素分布高温熔池相变传热焊炬移动

寒香蜜自然发酵葡萄酒酿造过程中挥发性成分分析

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沈阳农业大学学报 2019年第3期50卷 298-305页

作者：辛广高雪许冰心张博沈阳农业大学食品学院沈阳110161 鞍山师范学院化学与生命科学学院辽宁鞍山114005

为进一步掌握寒香蜜葡萄酒酿造过程中的挥发性成分变化规律,为优质的寒香蜜葡萄酒质量体系的建立及酿酒工艺的优化实施提供理论依据。采用溶液萃取法和气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对寒香蜜葡萄酒酿造... 详细信息

为进一步掌握寒香蜜葡萄酒酿造过程中的挥发性成分变化规律,为优质的寒香蜜葡萄酒质量体系的建立及酿酒工艺的优化实施提供理论依据。采用溶液萃取法和气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对寒香蜜葡萄酒酿造过程中(10,30,50,70d)的挥发性成分进行提取和定性定量分析,采用相关性分析法对寒香蜜葡萄酒的挥发性成分种类含量与其主要理化成分变化进行处理分析,采用主成分分析法对寒香蜜葡萄酒的挥发性成分进行综合评价,以主成分综合得分量化寒香蜜葡萄酒的挥发性成分。在寒香蜜葡萄酒酿造过程中共鉴定出111种挥发性成分,以醇类、酯类和酸类为主,但种类和含量各不相同,在酿造第50天时挥发性成分种类最多,为52种,在酿造第70天时挥发性成分含量最多,为375.78mg·L^-1。寒香蜜葡萄酒的挥发性成分种类含量与酒精度、总酸、pH值、总酚及色度值均具有关联性。1-丙醇、正丁醇、异丁醇、异戊醇、2,3-丁二醇、苯甲醇、苯乙醇、3-羟基丁酸乙酯、4-羟基丁酸内酯、丁二酸二乙酯、丁二酸单乙酯、乳酸乙酯、4-羟基-2,5-二甲基-3-2H-呋喃酮这13个挥发性成分可用来评价寒香蜜葡萄酒的挥发性成分综合情况。综合评价的结果表明,在酿造第30天时,寒香蜜葡萄酒的挥发性成分综合得分最高,它们具有果香、花香和奶油香。由此可见,酿造30d更易获得香味独特且品质上佳的寒香蜜葡萄酒。

关键词：寒香蜜葡萄酒挥发性成分气相色谱-质谱联用主成分分析

某三甲综合医院2004-2013年门诊量变化趋势预测分析

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中国卫生统计 2016年第1期33卷 115-117页

作者：张文涛许冰心孙鹏王进申铜倩济南市第四人民医院医务科 250031 济南市第四人民医院信息科 250031 济南市中医医院办公室 250012

目的探讨某医院门诊量季节分布变化规律,制定合理工作计划,优化资源配置。方法 2004年至2013年某医院月门诊量拟合ARIMA(1,1,0)×(0,1,0)_(12)模型,分析门诊量年度、月度变化规律,并作出短期预测。结果门诊量呈逐年上升趋势,且门诊量变... 详细信息

目的探讨某医院门诊量季节分布变化规律,制定合理工作计划,优化资源配置。方法 2004年至2013年某医院月门诊量拟合ARIMA(1,1,0)×(0,1,0)_(12)模型,分析门诊量年度、月度变化规律,并作出短期预测。结果门诊量呈逐年上升趋势,且门诊量变化有明显的季节波动性和周期性。结论采用ARIMA模型预测医院门诊量操作简单,模型拟合和预测效果较好,是值得推广的医院门诊量的短期预测工具。

关键词：门诊量 ARIMA模型季节分布预测医院管理

基于区域尺度的高速铁路外部经济效应分析——以京沪高铁山东段为例

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潍坊学院学报 2019年第3期19卷 26-31页

作者：许冰心济南市第四人民医院

以山东为例,从区域尺度视角,论证高速铁路对区域经济影响效应的特性,明确效应体系及其效应内容,并对5个站点城市的效应结果进行测度检验.结果显示,以溢出为特征的经济效应可以分为直接效应和间接效应,直接效应以正向为主,包括时间价值... 详细信息

以山东为例,从区域尺度视角,论证高速铁路对区域经济影响效应的特性,明确效应体系及其效应内容,并对5个站点城市的效应结果进行测度检验.结果显示,以溢出为特征的经济效应可以分为直接效应和间接效应,直接效应以正向为主,包括时间价值效应、可达空间效应和客运扩容效应,间接效应包括消费效应、产业效应、货运效应和建设效应,在区域尺度下,这四种效应可以是正向的,在消费效应和产业效应中,由于虹吸、替代等作用也可能出现负向效应,其加总结果作用于区域经济发展过程,实证表明,京沪高铁对山东站点城市的作用结果具有显著的正向经济效应.

关键词：高速铁路外部经济效应京沪高铁山东