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小鼠内细胞团标志蛋白的性质、分离和纯化

分子细胞生物学报 1984年第3期 29-35页

作者：许以盛,P.Brulet 中国科学院昆明动物研究所法国巴斯德研究所细胞遗传室

我们用二相电泳方法在小鼠畸胎瘤系统中发现小鼠胚胎内细胞团标志蛋白双联体(分子量39,000,p14.4—4.5)也存在于未分化的胚胎癌细胞株(PSAI-NG2、F9、PCC3)中,但在已分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1中用二相电泳方法不能检查到这蛋白。把E... 详细信息

我们用二相电泳方法在小鼠畸胎瘤系统中发现小鼠胚胎内细胞团标志蛋白双联体(分子量39,000,p14.4—4.5)也存在于未分化的胚胎癌细胞株(PSAI-NG2、F9、PCC3)中,但在已分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1中用二相电泳方法不能检查到这蛋白。把EC细胞分为细胞质、细胞核、染色体三部分再进行检查,可以清楚地看到这蛋白主要存在于染色体部分。把染色体再分成0.35M NaCl可溶性,2M NaCl可溶性及2M NaCl不溶性三个组份时,则这蛋白出现在0.35M NaCl可溶性组分中,表明它是与染色体疏松结合的非组蛋白染色体蛋白。这蛋白是一种耐热性蛋白,在80℃受热10分钟不能使它变性。用制备型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对经热处理的0.36M NaCl可溶性染色体蛋白进行分离,可得到电泳纯的小鼠内细胞团标志蛋白。由于这蛋白约占细胞总蛋白0.6%,与染色体疏松结合,又与早期胚胎细胞的多能性相关,提示它在维持多能细胞染色体构象方面有重要作用。

关键词： Mouse embryo.Inner cell mass.Non-histone chromosomal protein.

一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆

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Journal of Genetics and Genomics 1984年第5期 325-331页

作者：许以盛 P.Br■let 中国科学院昆明动物研究所法国巴斯德研究所细胞遗传室

用胚胎癌细胞株(EC)PCC,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM的PcDNA作探针,对PCCeDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。... 详细信息

用胚胎癌细胞株(EC)PCC,的poly(A)~+RNA及质粒pBR 322在大肠杆菌中建立了一个eDNA文库。用另一株EC细胞F(?)及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM的PcDNA作探针,对PCCeDNA文库作了差别筛选。自3,000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS,含有长250bp的cDNA。用MS,cDNA作探针,在F(?)细胞中能检出1个占poly(A)~+RNA约0.2—0.4％、长6kb的RNA(MSRNA)。用点印迹杂交及Northern印迹杂交分析法,证明MSRNA还存在于供试的另2株未分化EC细胞株PCC、PSA-NG中。在供试的全部分化细胞株,即TDM、PSA-2、3/A/1-D3、C-S-T(284)中,均查不到MSRNA。用Southern印迹杂交分析法,证明MS基因在小鼠基因组中存在着大量的拷贝,对小鼠胚胎基因文库的筛选表明,MS基因有一个中等重复的基因家族,这个家族在小鼠基因组中约有3,000个成员。

关键词： cDNA 特异性比活力 MS 菌落原位杂交法分子克隆基因文库胚胎癌细胞小鼠小家鼠

用原位分子杂交技术检测F9-1EC细胞甲胎蛋白基因的表达

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细胞生物学杂志 1986年第1期 39-41页

作者：林斯骏何全品许以盛中国科学院上海细胞生物学研究所中国科学院昆明动物研究所

甲胎蛋白(AFP)是一种糖蛋白,在胚胎发育阶段先由卵黄囊合成,以后由胚胎肝合成,成年肝细胞不再合成或合成甚微,但是肝细胞癌变后又重新合成,并分泌到血液中,故属于癌胚性蛋白,是肝癌临床诊断和实验研究的重要标志物之一。

关键词：甲胎蛋白 AFP cDNA 球蛋白细胞株 F9-1EC 分子杂交基因

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三个MS3基因克隆的初步鉴定

遗传 1984年第5期 1-2页

作者：许以盛,P.勃吕莱中国科学院昆明动物研究所法国巴斯德研究所细胞遗传室

我们已经克隆了一个小鼠未分化胚胎癌（EC）细胞特异的cDNA顺序（MS3cDNA）。用MS3cDNA作探针,证明编码MS3cDNA的基因在小鼠基因组中约有3,000个拷贝。由于Ms3cDNA顺序较短,仅长250bp,就产生了这样一个可能性:MS3cDNA仅是一个中等

关键词：基因克隆 MG MS3 DNA RNA

MS_(3)RNA在小鼠胚胎癌细胞中特异表达的可能机理

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Zoological Research 1984年第2期5卷 139-144,I0002页

作者：许以盛 P.勃吕莱中国科学院昆明动物研究所法国巴黎巴斯德研究所细胞遗传学处

MS_(3) RNA是小鼠胚胎癌细胞特异RNA。为了阐明MS_(3)基因在未分化细胞中特异表达的机理,我们应该首先确定此特异表达是在哪一级水平上被调控的。Naveh-Many等(1981)指出积极进行转录的基因一般是甲基化程度不足的。由于MS_(3)基因有一... 详细信息

MS_(3) RNA是小鼠胚胎癌细胞特异RNA。为了阐明MS_(3)基因在未分化细胞中特异表达的机理,我们应该首先确定此特异表达是在哪一级水平上被调控的。Naveh-Many等(1981)指出积极进行转录的基因一般是甲基化程度不足的。由于MS_(3)基因有一个中等重复的家族,因此如果MS_(3)基因的调控主要在转录水平上进行,我们应该发现MS_(3)基因的甲基化程度在分化细胞及未分化细胞之间有明显差别,于是用测定甲基化程度的一组酶HpaⅡ和Msp1水介代表分化细胞的TDM_(1)及代表未分化细胞的F_(9)的高分子量DNA,然后用MS_(3) cDNA作探针分析MS_(3)基因区的甲基化程度。在可用MS_(3) cDNA探查到的范围内,MS_(3)基因区的甲基化程度在TDM_(1)及F_(9)细胞中未见明显不同。对这一结果可有四种不同解释:***_(3)基因家族中除少数成员外其余绝大部分成员在未分化细胞中是不转录的,在分化细胞中则全部不转录:***_(3)基因家族的绝大部分成员在未分化细胞以及在分化细胞中都是转录的;3.虽然MS_(3)基因家族中的绝大部分成员都是不转录的,但个别成员在未分化细胞以及分化细胞中都是转录的;4.由于MS_(3) cDNA只能探查MS_(3)基因的分端区域,可能此区域的甲基化程度与MS_(3)基因的转录水平无关。为了区别这些可能性,我们检查了F_(9)细胞及TDM_(1)细胞中的核RNA,发现在这二种细胞核内都存在若数量几乎相等的大量MS_(3)基因转录物。因此我们推断,MS_(3)基因家族中至少有一部分成员,很可能是大部分成员,不论在未分化细胞还是在分化细胞中都是转录的。在色分化细胞的细胞质中不能探查到MS_(3)RNA的原因可能在于MS_(3)基因在转录后水平上的调控,即在已分化细胞的核内缺乏加工MSRNA前体的能力或缺乏把成热的MS_(3) RNA从细胞核输送到细胞质中去的能力。

关键词：未分化细胞探针分析小鼠胚胎甲基化程度癌细胞可能机理基因转录 TDM

从提取细胞色素丙后的猪心残渣中制备辅酶Q_(10)的研究

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Zoological Research 1985年第1期6卷 1-7页

作者：许以盛胡钧张汉云中国科学院昆明动物研究所

辅酶Q_(10)(以下简称Q_(10))是一种新的生化药物,有重要的临床用途(中国科学院昆明动物研究所辅酶Q_(10)研究组,1979)。Q_(10)的制备虽可采用化学合成法,但此法难度较大且不经济。自动物、植物、微生物中提取Q_(10)是国外工业生产Q_(10... 详细信息

辅酶Q_(10)(以下简称Q_(10))是一种新的生化药物,有重要的临床用途(中国科学院昆明动物研究所辅酶Q_(10)研究组,1979)。Q_(10)的制备虽可采用化学合成法,但此法难度较大且不经济。自动物、植物、微生物中提取Q_(10)是国外工业生产Q_(10)的主要途径。我国大部分生物制药厂以猪心为原料生产细胞色素丙,因此经提取细胞色素丙后的猪心残渣数量极大。但这些猪心残渣一般被用作肥料或饲料。已知在猪心中Q_(10)含量丰富和Q_(10)在酸性条件下不稳定。(Korner,1974)于是这种经酸性溶液处理的猪心残渣是否还含有未分解的Q_(10),其含量是多少?是综合利用这些猪心残渣的前提。本文证明,这种猪心残渣仍然含有未分解的Q_(10),其含量与新鲜猪心中相同,从而为Q_(10)的工业生产找到了一种来源充足、价廉物美的原料。另外,本文比较并发展了一些Q_(10)的制备方法,为确定Q_(10)的工业生产工艺路线提供了实验依据。最后本文发展了一种Q_(10)的扫描薄层层析分析法,是目前已知各种Q_(10)分析法中较理想的一种。

关键词：生化药物猪心残渣辅酶Q_(10)

辅酶Q_(10)的毒性试验及对溶血空斑形成细胞的刺激效应

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Zoological Research 1985年第3期6卷 219-225页

作者：胡钧许以盛张汉云李朝达中国科学院昆明动物研究所

辅酶Q_(10)(以下简称CoQ_(10))是生物体内普遍存在的一类生物活性物质,具有重要的生理、生化作用。它是细胞呼吸链中主要的递氢体,在生物能量转化中占重要地位,它又能作为非特异性免疫增强剂,增强机体的防御能力,因此人们对于CoQ_(10)... 详细信息

辅酶Q_(10)(以下简称CoQ_(10))是生物体内普遍存在的一类生物活性物质,具有重要的生理、生化作用。它是细胞呼吸链中主要的递氢体,在生物能量转化中占重要地位,它又能作为非特异性免疫增强剂,增强机体的防御能力,因此人们对于CoQ_(10)的临床研究越来越受到重视(中国科学院昆明动物研究所,1979)。我们结合我国具体情况,独创地从提取细胞色素丙的猪心残渣中分离制备了CoQ_(10),(许以盛等,1985),并与有关生产及临床单位协作,于1977年12月通过了鉴定,为我国的生化药物填补了一项空白。

关键词：生化药物猪心残渣辅酶Q_(10)

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS3基因表达的影响

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Zoological Research 1986年第4期7卷 325-330页

作者：何全品林斯骏许以盛姚錱中国科学院上海细胞生物学研究所

MScDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS基... 详细信息

MScDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86%。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90%,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS基因的表达被抑制。

关键词：胚胎性癌细胞(EC) 环六亚甲基双乙酰胺诱导分化多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序点印迹杂交

500拉德γ-射线照射对大鼠肝脏非组蛋白染色体蛋白的影响

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Zoological Research 1981年第4期2卷 371-378页

作者：丁邦裕姜文昌周碧华杨瑞琨许以盛中国科学院昆明动物研究所中国科学院昆明动物研究所(南京)江苏省肿瘤防治研究所

500拉德;钴-线照射后,大鼠肝脏非组蛋白染色体蛋白,经等电聚焦—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,考马斯亮兰R250染色,蛋白斑点可达到高度的重复性。UP组分可以看到100—150个蛋白斑点,NP可以看到40—60个蛋白斑点。照射后不同时间,在凝胶板... 详细信息

500拉德;钴-线照射后,大鼠肝脏非组蛋白染色体蛋白,经等电聚焦—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,考马斯亮兰R250染色,蛋白斑点可达到高度的重复性。UP组分可以看到100—150个蛋白斑点,NP可以看到40—60个蛋白斑点。照射后不同时间,在凝胶板上,蛋白斑点的变化,与放射病的发展有一定的关系。本文就辐射致癌和辐射致畸等原理进行了讨论。

关键词： SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳非组蛋白大鼠肝脏辐射致癌等电聚焦拉德染色体蛋白考马斯亮兰