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朊病毒研究进展

畜牧与兽医 2002年第9期34卷 40-42页

作者：贾小明许于飞浙江大学生命科学学院浙江杭州310029

朊病毒 (Prion)是一类能引起人和动物的亚急性海绵样脑病的病原因子 ,它的化学本质是一种蛋白质侵染颗粒 ,具有不同于病毒的生物学性质与理化性质。细胞型朊病毒蛋白 (PrPC)经过折叠可转变为致病型朊病毒蛋白 (PrPSC)。目前人和大多数... 详细信息

朊病毒 (Prion)是一类能引起人和动物的亚急性海绵样脑病的病原因子 ,它的化学本质是一种蛋白质侵染颗粒 ,具有不同于病毒的生物学性质与理化性质。细胞型朊病毒蛋白 (PrPC)经过折叠可转变为致病型朊病毒蛋白 (PrPSC)。目前人和大多数动物的PrP基因序列已经被测定 ,这也为朊病毒的研究提供了重要的信息。

关键词：朊病毒致病型朊病毒蛋白 PrP基因酵母朊病毒

HPV 58 L1改造基因的表达及其VLP产物抗血清制备

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第7期25卷 677-682页

作者：范东升张婷彭清林杨丽君许于飞张然许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理与结构生物学系北京100005

高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)慢性持续性感染是诱发宫颈癌的主要病因.体外表达的HPV主要衣壳蛋白(L1)可自组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),免疫后可诱导产生型别特异性中和抗体,有效保护机体免受同型病毒... 详细信息

高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)慢性持续性感染是诱发宫颈癌的主要病因.体外表达的HPV主要衣壳蛋白(L1)可自组装成病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),免疫后可诱导产生型别特异性中和抗体,有效保护机体免受同型病毒的感染,因此可望预防病毒感染及感染相关的宫颈癌等病变.HPV58是诱发我国妇女宫颈癌的主要高危型病毒之一,目前尚无针对HPV58的疫苗问世.本研究联合采用多种策略对HPV 58 L1野生型基因进行改造,获得HPV 58 L1改造基因,命名为HPV 58 mL1,用杆状病毒-昆虫细胞表达系统进行HPV 58 mL1的表达,CsCl密度梯度离心法纯化获得HPV58 mL1重组蛋白,电镜分析结果显示,重组蛋白形成直径约55 nm的VLP.皮下免疫新西兰兔和豚鼠,ELISA检测显示,免疫动物产生高滴度针对HPV 58 mL1 VLP的抗血清,免疫斑点印迹检测显示,抗血清是针对VLP表面表位的.本研究表达了均一性好的HPV 58 mL1 VLP,并获得两个种属的HPV 58 mL1 VLP抗血清,为进一步研究有效预防HPV 58感染的疫苗打下基础.

关键词：人乳头瘤病毒58型病毒样颗粒基因改造抗血清

CD40L融合改造后的人乳头瘤病毒16型E7基因DNA疫苗的构建及其免疫原性测定

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中国医学科学院学报 2007年第5期29卷 584-591,I0002页

作者：王庆勇许于飞范东升彭清林张婷许雪梅中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所生物物理学系北京100005

目的研究针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的DNA疫苗,测定其免疫原性,用于治疗HPV16感染及感染相关恶性肿瘤。方法联合采用基因切割重排、定点突变及密码子优化等策略改造HPV16的转化基因E7,基因合成法获得改造后的E7基因(mE7);PCR法将mE7基因... 详细信息

目的研究针对人乳头瘤病毒(HPV)16型的DNA疫苗,测定其免疫原性,用于治疗HPV16感染及感染相关恶性肿瘤。方法联合采用基因切割重排、定点突变及密码子优化等策略改造HPV16的转化基因E7,基因合成法获得改造后的E7基因(mE7);PCR法将mE7基因与CD40L胞外区编码序列融合,然后以pVR1012为载体构建pVR1012-mE7(mE7)及pVR1012-mE7/CD40L(mE7/CD40L)表达质粒;经肌肉免疫C57BL/6小鼠;ELISA法检测E7特异性血清抗体水平,ELISPOT法分析E749-57(H-2b)特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞活化水平,胞内染色-流式细胞检测分析E7特异性CD4+Th细胞活化水平;并在C57BL/6小鼠体内进行疫苗抗瘤活性检测。结果与野生型E7基因(wE7)相比,mE7基因诱发产生的E7特异抗体水平(P<0.01)、分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目(P<0.01)及CD4+Th细胞活化水平(P<0.05)均显著提高;与mE7基因相比,mE7/CD40L融合基因可进一步显著提高E7特异性分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目(P<0.01),但对E7特异性抗体产生及CD4+Th细胞活化水平没有明显影响。疫苗小鼠体内预防性免疫实验中,经wE7免疫的小鼠接种瘤细胞后2周内全部形成移植瘤,而所有经mE7及mE7/CD40L免疫的小鼠在瘤细胞攻击后第7周仍未见移植瘤形成;疫苗体内治疗性免疫实验中,小鼠在接种wE7后第8天左右全部形成移植瘤,并呈渐进性生长,而接种mE7的小鼠移植瘤清除率为30%,接种mE7/CD40L的小鼠移植瘤清除率增高至45%。对移植瘤的组织学检查结果显示,mE7/CD40L及mE7免疫组小鼠瘤细胞间及瘤组织周围可见大量淋巴细胞浸润,而wE7组小鼠的瘤细胞呈编织状紧密排列,未见有淋巴细胞浸润。结论HPV16型mE7/CD40L融合基因疫苗免疫小鼠后可诱发较强的E7特异性细胞免疫及体内抗瘤活性,具有较强的免疫原性。

关键词：人乳头瘤病毒子宫颈癌 DNA疫苗 CD40配体

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人乳头瘤病毒16型DNA疫苗的实验研究

人乳头瘤病毒16型DNA疫苗的实验研究

HPV 18 L1病毒样颗粒的表达纯化及其豚鼠抗血清制备

中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议

作者：许雪梅许于飞王庆勇中国医学科学院基础医学研究所

目的:宫颈癌是危害妇女健康和生命的严重疾病,每年约有50万新发病例,20万的死亡病例,其中发展中国家的病例占2／3。我国是宫颈癌的高发区,近年来我国宫颈癌的发病率又进一步增高,且发病年龄趋于年轻化。目前对晚期宫颈癌的治疗尚无良策...

目的:宫颈癌是危害妇女健康和生命的严重疾病,每年约有50万新发病例,20万的死亡病例,其中发展中国家的病例占2／3。我国是宫颈癌的高发区,近年来我国宫颈癌的发病率又进一步增高,且发病年龄趋于年轻化。目前对晚期宫颈癌的治疗尚无良策,对早期宫颈癌及癌前病变的治疗不能防止HPV16的再感染的可能,且技术条件要求相对较高,不适合在贫困地区推广应用。研究表明50％以上的宫颈癌与人乳头瘤病

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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基础医学与临床 2009年第10期29卷 1039-1043页

作者：彭清林张婷范东升郑伟谢喜秀许于飞许雪梅中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物物理与结构生物学系北京100005

目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体... 详细信息

目的优化人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期基因L1并在昆虫细胞中表达,获得HPV18L1病毒样颗粒(VLP),制备豚鼠抗血清。方法联合利用昆虫细胞偏性密码子、C末端截短32个氨基酸、降低mRNA二级结构等策略优化HPV18L1基因,合成后克隆入pFastBac1载体,构建重组病毒,感染sf9昆虫细胞72h后进行Western blot表达鉴定,密度梯度离心法纯化后进行纯度鉴定及形态学鉴定,获得HPV18L1VLP,联合弗氏佐剂免疫豚鼠制备抗血清。结果HPV18L1优化基因在昆虫细胞中可有效表达,纯化的HPV18L1蛋白纯度达90%以上,电镜观察可见直径约为50nm的VLP,豚鼠免疫血清中HPV18L1VLP特异性抗体滴度达5.12×105。结论HPV18L1优化基因可在昆虫细胞中高效表达并组装成VLP,制备的高滴度抗血清为HPV18L1VLP疫苗的进一步研究打下基础。

关键词：人乳头瘤病毒18型病毒样颗粒杆状病毒表达系统抗血清

白介素2基因佐剂协同单纯疱疹病毒1型糖蛋白D核酸疫苗免疫诱导的特异性免疫应答

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中国医学科学院学报 2005年第1期27卷 67-72页

作者：刘晓娟朱明昭宋国兴许于飞刘宏伟王盛杨宝玲董方田许雪梅中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室北京100005

目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定... 详细信息

目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响,以及在HSV-1病毒角膜攻击时的保护效果。方法利用pcDNA3.1载体分别构建HSV-1糖蛋白D和IL-2的真核表达质粒pgD和pIL-2,体外鉴定其表达。动物实验分为pcDNA3.1空载体对照组、pgD单独免疫组和pgD+pIL-2联合免疫组3组,具体为通过肌肉免疫接种BALB/c小鼠3次,间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体滴度并做亚型分析,利用3H-TdR掺入法进行Th细胞增殖实验,ELISA试剂盒检测Th细胞分泌的IL-2、IFN-γ和IL-10水平,耳廓肿胀实验检测迟发型超敏反应(DTH)反应;HSV-1病毒角膜攻击后,裂隙灯显微镜观察角膜上皮病变。结果与pgD单独免疫组相比,pIL-2的协同免疫可以显著提高IgG2a抗体滴度、Th细胞增殖反应和DTH反应,Th细胞分泌IL-2和IFN-γ水平也显著提高,IL-10水平明显下降。在动物保护实验中,pIL-2的协同免疫明显增强了pgD疫苗在病毒攻击时对角膜的保护效果。结论IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高pgD核酸疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,增加核酸疫苗的免疫保护效果。

关键词： DNA疫苗白介素2 单纯疱疹病毒1型角膜炎

建设习近平文化思想生动实践地——推动“富起来、乐起来”的“嵊州探索”

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人民论坛 2025年第1期 90-93页

作者：人民论坛专题调研组于飞不详人民论坛调研部

文化,乃国家之根基、民族之魂魄。党的十八大以来,习近平总书记着眼宣传思想文化领域的新形势新情况新问题,站在全局和战略高度,作出一系列重要论述和指示批示。当下,如何立足本地特色,深入践行习近平文化思想,推动物质文明与精神文明... 详细信息

文化,乃国家之根基、民族之魂魄。党的十八大以来,习近平总书记着眼宣传思想文化领域的新形势新情况新问题,站在全局和战略高度,作出一系列重要论述和指示批示。当下,如何立足本地特色,深入践行习近平文化思想,推动物质文明与精神文明协调发展。

关键词：党的十八大以来宣传思想文化习近平文化思想生动实践立足本地新情况新问题习近平总书记战略高度

“三全育人”背景下高校劳动教育面临的现实困境与路径探究

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2025年第1期 048-051页

作者：于飞大连民族大学辽宁大连116600

“三全育人”是指全面育人、全程育人、全方位育人,它是贯彻中共中央、国务院《关于加强和改进新形势下高校思想政治工作的意见》提出的“全员、全程、全方位育人”的具体要求,也是对大学生进行全面、系统、深入教育的理念。从“三全育... 详细信息

“三全育人”是指全面育人、全程育人、全方位育人,它是贯彻中共中央、国务院《关于加强和改进新形势下高校思想政治工作的意见》提出的“全员、全程、全方位育人”的具体要求,也是对大学生进行全面、系统、深入教育的理念。从“三全育人”的角度来看,学校劳动教育是整个教育系统中不可或缺的一环,它直接关系到学生的身心健康成长。然而,在新的历史条件下,我国普通高等学校的劳动教育还存在着诸多的实际困难,因此,各高校应积极地寻求新的途径,以求更好地推动其发展。

关键词： “三全育人” 高校劳动教育现实困境路径探究

维普期刊数据库评论

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民族高校铸牢中华民族共同体意识的实现路径

中国科技期刊数据库科研 2025年第1期 073-076页

作者：于飞大连民族大学辽宁大连116600

铸牢中华民族共同体意识是新时代党的民族工作主线,也是民族地区各项工作主线,民族高校承担铸牢中华民族共同体意识教育的重要使命。当前,民族高校在铸牢中华民族共同体意识教育工作存在一些问题,对推进教育工作的理解不够全面,推进工... 详细信息

铸牢中华民族共同体意识是新时代党的民族工作主线,也是民族地区各项工作主线,民族高校承担铸牢中华民族共同体意识教育的重要使命。当前,民族高校在铸牢中华民族共同体意识教育工作存在一些问题,对推进教育工作的理解不够全面,推进工作囿于理论,缺乏创新。民族高校应提高政治站位、深化教育理解,注重实践,引导学生积极参与并深刻理解铸牢中华民族共同体意识的内涵。此外,民族高校应紧跟时代发展脚步,结合时代需求推动教育工作的创新,增强学生对中华民族的认同感和归属感。通过提高教育质量和创新教育路径,民族高校可以有效推进铸牢中华民族共同体意识的教育工作,促进民族团结和发展。

关键词：铸牢中华民族共同体意识民族高等教育思想政治教育