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噬菌体表面呈现技术及在抗寄生虫免疫中的应用

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中国公共卫生 2000年第9期16卷 844-846页

作者：俞慕华陈代雄梁瑜詹希美中山医科大学广州510089

近10年来,噬菌体表面呈现技术(Phage Dislay Techniques,PDT)发展迅速,特别是在蛋白质结构研究、抗原表位分析、分子识别、细胞间信号传导、药物设计、疫苗研制、诊断试剂等方面应用广泛.Smith[1]博士于1985年首先报道小分子多肽可以在... 详细信息

近10年来,噬菌体表面呈现技术(Phage Dislay Techniques,PDT)发展迅速,特别是在蛋白质结构研究、抗原表位分析、分子识别、细胞间信号传导、药物设计、疫苗研制、诊断试剂等方面应用广泛.Smith[1]博士于1985年首先报道小分子多肽可以在丝状噬菌体表面表达形成有活性的多肽片段.由于噬菌体易于扩增,可从含多种外源蛋白的噬菌体库中筛选出表达特异外源蛋白的噬菌体,且外源多肽或蛋白的氨基酸序列可通过测定插入噬菌体DNA序列来推测,故该技术受到许多学者的青睐.

关键词：噬菌体表面呈现技术抗寄生虫免疫抗体文库

抗华支睾吸虫CAg噬菌体抗体表达与活性鉴定

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中国公共卫生 2004年第11期20卷 1320-1322页

作者：俞慕华陈代雄詹希美深圳市南山区疾病预防控制中心 518054 广州医学院寄生虫教研室中山大学中山医学院病原生物学部

目的　对从抗华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选到的阳性克隆进行诱导表达和鉴定。方法　对阳性克隆株B0 5、C10和E38用异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)和蛋白印迹试验 (Westernblot)观... 详细信息

目的　对从抗华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选到的阳性克隆进行诱导表达和鉴定。方法　对阳性克隆株B0 5、C10和E38用异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)和蛋白印迹试验 (Westernblot)观察有无Fab抗体条带。然后 ,用卫氏并殖吸虫 (Pw)、肝片吸虫 (Fh)、姜片吸虫 (Fb)、华支睾吸虫 (Cs)、日本血吸虫 (Sj)脱脂全虫粗抗原和华支睾吸虫代谢抗原 (Cs-MAg)进行SDS -PAGE ,并分别和B0 5、C10和E38噬菌体抗体进行Westernblot,鉴定抗体活性。结果　Westernblot结果表明 ,3株阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清在约 5 0kD和 2 7kD处均有特异抗体条带出现。B0 5噬菌体抗体与Cs-MAg和Cs-Ag在约 2 5kD处出现特异性反应条带 ,而与其它 4种吸虫抗原无反应条带的出现。C10除与Cs-MAg和华支睾吸虫全虫抗原 (Cs -Ag)在约 38kD处出现反应条带外 ,还与Sj-Ag在该处有弱阳性反应 ;而与其它 3种吸虫抗原无反应条带出现。E38与Cs-MAg和Cs-Ag在约 16kD处出现特异性反应条带 ,而与其它 4种吸虫抗原无反应条带出现。结论　 3株阳性克隆均可表达抗华支睾吸虫循环抗原 (CAg)噬菌体抗体 ,其中B0 5和E38具有特异结合Cs-CAg活性。

关键词：华支睾吸虫循环抗原噬菌体抗体 Western-blot

弓形虫actin蛋白多克隆抗体的制备及纯化

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中国病原生物学杂志 2013年第7期8卷 608-610页

作者：郑斌尹志奎詹希美新乡医学院寄生虫学教研室河南新乡453000 新乡医学院药理学教研室河南新乡453000 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510089

目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化;取200μg纯化蛋白加... 详细信息

目的制备弓形虫肌动蛋白(actin)的多克隆抗体并纯化。方法以弓形虫cDNA链为模板PCR扩增1 131bp actin基因,亚克隆至pET30a载体后转化入大肠埃希菌BL21中,用1mmol/L IPTG诱导表达actin-His6蛋白,采用亲和层析法纯化;取200μg纯化蛋白加等量佐剂混合,免疫SD大鼠4次,收集抗血清,用亲和纯化柱纯化。结果 PCR扩增出actin基因并成功构建actin/pET30a/BL21表达系统,获得actin-His6蛋白,制备的大鼠源性actin-His6蛋白多克隆抗体纯化后为单一蛋白抗体。结论制备并纯化了抗弓形虫actin的多克隆抗体,为弓形虫入侵机制的研究奠定了基础。

关键词：弓形虫肌动蛋白多克隆抗体

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广东省阳春市广州管圆线虫流行病学调查

中国人兽共患病学报 2009年第1期25卷 87-88,91页

作者：张赟黄迪丁雪陈代雄詹希美广州医学院病原生物学教研室广州510182 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510080

广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫病的病原体,成虫寄生于鼠肺动脉内,幼虫偶可寄生人体内引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎.

关键词：广州管圆线虫病流行病学调查广东省人兽共患寄生虫病阳春市粒细胞增多性发病人数暴发流行

广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆及生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2013年第10期8卷 907-911页

作者：李素丽詹希美谢建生南方医科大学附属深圳市妇幼保健院中心实验室广东深圳518048 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510089

目的对广州管同线虫雌性成虫肌蛋白-1（Ac-fmp1）基因的开放渎码框进行克隆，分析序列结构、功能特征及编码蛋白的理化性质，并构建体外表达载体。方法采用逆转录聚合酶链反应和，TA克隆方法克隆Ac—fmp—l基因的开放读码框全长；运用N... 详细信息

目的对广州管同线虫雌性成虫肌蛋白-1（Ac-fmp1）基因的开放渎码框进行克隆，分析序列结构、功能特征及编码蛋白的理化性质，并构建体外表达载体。方法采用逆转录聚合酶链反应和，TA克隆方法克隆Ac—fmp—l基因的开放读码框全长；运用NCBI网站和ExPaSy等七物信息学在线工具分析Ac—fmp-1基因编码序列及其编码氨基酸的理化性质、结构及功能；采用基因克隆技术定向克隆至原核表达载体pET一30ac（＋），构建Acfmp一1基因重组表达质粒。结果扩增和克隆了广州管网线虫Acfmp1基因开放读码框序列，此序列大小为1251bp，勺GenBank数据库中AcImp-1基因的编码序列同源性为99．6％，编码417个氨基酸。ProtParam预测陔基因编码蛋白在溶液中不稳定、保守性差，未发现跨膜区域。PHD法二级结构预测该蛋白质分子为a螺旋型，于氨基酸残基346～404位点处含有一个锌指结构，SignalP软件预测该蛋白分子无信号肽序列，具有较强的亲水性。该基因编码蛋白的氨基酸序列中，含有16个潜在的B细胞抗原表位。构建的原核表达载体pET—Acfmp1成功定向插入了Acfmp-1基因。结论成功扩增和克隆了广州管圆线虫Ac—fmp-1基因，编码蛋白可能是广州管圆线虫的重要抗原成分，可作为广州管网线虫病的疫苗候选分子和药物靶标。构建了用于体外表达的原核表达载体，为进行Acfmp-1功能研究奠定了基础。

关键词：广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1 克隆生物信息学原核表达

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Ⅲ类内含子及其对基因表达的影响

生物技术 2005年第4期15卷 77-79页

作者：郑斌詹希美中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510080

内含子是指断裂基因中的非编码区序列。根据内含子的核苷酸序列和RNA潜在折叠方式不同,可分成四种类型:I类内含子、Ⅱ类内含子、Ⅲ类内含子和Ⅳ类内含子。Ⅲ类内含子为真核细胞前mRNA中的内含子。它可以启动某些基因的表达,影响基因的... 详细信息

内含子是指断裂基因中的非编码区序列。根据内含子的核苷酸序列和RNA潜在折叠方式不同,可分成四种类型:I类内含子、Ⅱ类内含子、Ⅲ类内含子和Ⅳ类内含子。Ⅲ类内含子为真核细胞前mRNA中的内含子。它可以启动某些基因的表达,影响基因的表达量;增加mRNA分子的稳定性;并通过选择性剪接调控基因的表达。Ⅲ类内含子可以提高转基因动物基因的表达效率。因此,基因工程中,为了提高表达效率,是选用基因组基因还是cDNA基因,应视具体基因而定。

关键词：内含子 mRNA 基因表达选择性剪接转基因动物

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并殖吸虫成虫形态结构特征排序

动物学报 1990年第1期36卷 7-11页

作者：詹希美徐秉锟中山医科大学奇生虫学教研室

对9种并殖吸虫成虫形态特征进行主成分分析及聚类分析,结果表明:在并殖吸虫成虫的6项主要特征中,体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的9个种中,怡乐村并殖吸虫、斯氏狸殖吸虫、巨睾狸殖吸虫、三平正并殖吸虫、异盘并殖吸虫... 详细信息

对9种并殖吸虫成虫形态特征进行主成分分析及聚类分析,结果表明:在并殖吸虫成虫的6项主要特征中,体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的9个种中,怡乐村并殖吸虫、斯氏狸殖吸虫、巨睾狸殖吸虫、三平正并殖吸虫、异盘并殖吸虫、陈氏并殖吸虫与卫氏并殖吸虫7个种具有种的独立地位,而泡囊狸殖吸虫和扁囊并殖吸虫未能分别从斯氏狸殖吸虫和卫氏并殖吸虫中分开。

关键词：并殖吸虫成虫形态学聚类分析

抗日本血吸虫噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第5期21卷 261-263页

作者：陈代雄俞慕华雷智刚郑斌何蔼张瑞琳詹希美广州医学院寄生虫学教研室广州510182 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广州510089

目的　研制抗日本血吸虫循环抗原Sj MAg的单链抗体。　方法　用日本血吸虫成虫代谢抗原Sj MAg包板 ,对已构建的抗日本血吸虫噬菌体抗体库进行 3轮富集 ,然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆 ,最后借助ELISA、SDS PAGE和West... 详细信息

目的　研制抗日本血吸虫循环抗原Sj MAg的单链抗体。　方法　用日本血吸虫成虫代谢抗原Sj MAg包板 ,对已构建的抗日本血吸虫噬菌体抗体库进行 3轮富集 ,然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆 ,最后借助ELISA、SDS PAGE和Western印迹等方法 ,根据阳性克隆表达产物与其它 4种吸虫抗原反应的情况 ,进行特异性鉴定。　结果　从随机挑取的 72个克隆中筛选到阳性克隆 6个 ,经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗日本血吸虫阳性克隆 2个。　结论　用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有效地筛选到抗日本血吸虫循环抗原的阳性克隆 ,获得的抗体克隆可用于抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的制备。

关键词：抗日本血吸虫噬菌体抗体库筛选阳性克隆鉴定 ELISA法