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反义c-myc重组腺病毒的构建及其抗骨肉瘤细胞的作用

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癌症 2005年第3期24卷 292-297页

作者：解先宽杨迪生叶招明陶惠民浙江大学医学院附属第二医院骨科浙江杭州310009

背景与目的:c-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明c-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对不同p53基因型的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失... 详细信息

背景与目的:c-myc原癌基因在细胞的增殖调节中发挥重要作用,研究表明c-myc在骨肉瘤中常常扩增和过表达,而且具有促进细胞转化和诱导转移的特性。本文构建表达反义c-myc的重组腺病毒,并探讨其对不同p53基因型的骨肉瘤细胞系MG-63(P53缺失型)、U2OS(p53野生型)的影响。方法:应用基因重组技术构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-As-c-myc),并在体外转染MG-63、U2OS细胞,采用蛋白免疫印迹(Westernblot)、吖啶橙染色、RT-PCR、流式细胞仪(FCM)等方法检测或观察其对细胞c-mycmRNA表达、瘤细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响。结果:成功构建Ad-As-c-myc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG-63、U2OS细胞后可明显抑制细胞的体外增殖,而且对携带野生型p53的U2OS更敏感。Ad-As-c-myc转染48h后可降低c-mycmRNA表达。吖啶橙染色及FCM检测证实,转染Ad-As-c-myc可诱导骨肉瘤细胞凋亡,细胞周期分析显示转染Ad-As-c-myc的MG-63细胞出现G2/M期阻滞,而U2OS细胞出现G1期阻滞。结论:腺病毒介导反义的c-myc能以p53依赖或非依赖性途径诱导骨肉瘤细胞凋亡,并抑制骨肉瘤细胞的增殖。

关键词：骨肉瘤 c-myc基因腺病毒基因治疗凋亡

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无贫血胸椎旁髓外造血组织瘤样增生一例报告

中华骨科杂志 2009年第12期29卷 1155-1156页

作者：解先宽陶惠民付燕飙刘兵杨迪生浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

患者女,70岁,发现胸椎旁肿块半个月入院.患者半个月前因颈部酸痛向左上肢放射,门诊摄胸部CT示T8.9,椎旁占位性病变.

关键词：贫血胸椎旁造血组织占位性病变患者肿块胸部酸痛上肢门诊颈部放射

腺病毒介导反义c-myc增强骨肉瘤细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

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中华外科杂志 2005年第12期43卷 799-802页

作者：杨迪生解先宽叶招明陶惠民浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的构建表达反义cmyc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义cmyc转染的人骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用基因重组技术,将约720bp的人cmyccDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义cmyc的重组腺... 详细信息

目的构建表达反义cmyc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义cmyc转染的人骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用基因重组技术,将约720bp的人cmyccDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义cmyc的重组腺病毒(AdAscmyc),并在体外转染骨肉瘤MG63细胞,采用瑞士染色、吖啶橙染色、蛋白免疫印迹(WesternBlot)、细胞体外增殖抑制试验(MTT)、流式细胞仪(FCM)等观察细胞形态、检测cmyc蛋白表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析AdAscmyc体外转染的骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性。结果成功构建AdAscmyc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG63细胞48h后,可降低cmyc蛋白表达,并与浓度为2.0、5.0μg/ml的顺铂作用2h后,可抑制MG63细胞的体外增殖,抑制率分为33.4%、54.2%,与对照腺病毒(AdLacZ)转染组相比差异有统计学意义(P<0.05),FCM检测证实AdAscmyc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且顺铂治疗后凋亡比例增加,细胞周期分析显示AdAscmyc转染的骨肉瘤细胞出现G2/M期阻滞。结论腺病毒介导反义cmyc能诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡并增加MG63细胞对顺铂化疗敏感性。

关键词：化疗敏感性骨肉瘤细胞介导反义 myc 顺铂实验研究 MG-63细胞重组腺病毒 G2/M期阻滞基因重组技术体外转染蛋白免疫印迹增殖抑制试验体外增殖抑制细胞周期分析构建表达蛋白表达腺病毒载体 Asc 吖啶橙染色流式细胞仪

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骨科患者多药耐药菌感染病原菌分析

中华医院感染学杂志 2015年第5期25卷 1037-1038,1041页

作者：康志敏陈玉芳解先宽中国医科大学绍兴医院骨二科浙江绍兴312030 浙江大学医学院附属第二医院骨科浙江杭州310009

目的分析骨科患者治疗过程中多药耐药菌感染的病原菌分布,寻求预防控制骨科患者治疗过程中多药耐药菌感染的措施。方法回顾性分析2012年6月-2013年2月40例骨科多药耐药菌感染患者的临床资料,对多药耐药菌感染患者给予综合性治疗措施,采... 详细信息

目的分析骨科患者治疗过程中多药耐药菌感染的病原菌分布,寻求预防控制骨科患者治疗过程中多药耐药菌感染的措施。方法回顾性分析2012年6月-2013年2月40例骨科多药耐药菌感染患者的临床资料,对多药耐药菌感染患者给予综合性治疗措施,采用SPSS 15.0软件进行统计处理及分析。结果发生感染的患者主要为住院时间长、免疫力低下的妇女和老年患者;主要感染部位为上呼吸道、尿道、血液和伤口,其中上呼吸道感染14例占35.0%、尿道感染6例占15.0%、血液感染9例占22.5%、手术切口感染11例占27.5%;引起感染的多药耐药菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、多药耐药鲍氏不动杆菌、多药耐药铜绿假单胞菌、超广谱β-内酰胺酶菌和耐万古霉素肠球菌,分别占20.0%、22.5%、25.0%、15.0%、17.5%;经综合性治疗后,36例患者感染得到有效控制,总有效率90.0%。结论骨科治疗过程中发生多药耐药菌感染的主要原因有患者身体素质较差、免疫力低下、抗菌药物的不合理使用、医院内的交叉感染等,为此科室应重视多药耐药菌感染的管理、建立健全管理制度、对多药耐药菌感染患者实施有效管理和隔离措施,预防和控制多药耐药菌感染。

关键词：骨科多药耐药菌感染临床护理

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膝关节周围骨折、脱位伴血管损伤的诊疗分析

中华外科杂志 2009年第23期47卷 1794-1797页

作者：解先宽李杭郑强潘志军杨迪生浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的探讨早期诊治膝关节周围骨折损伤的效果及影响因素。方法回顾性分析2002年3月至2007年11月31例膝关节周围骨折、脱位伴血管损伤患者的临床资料。其中男性24例，女性7例，年龄21～62岁，平均41岁。结合临床体征，运用彩色超声、CTA... 详细信息

目的探讨早期诊治膝关节周围骨折损伤的效果及影响因素。方法回顾性分析2002年3月至2007年11月31例膝关节周围骨折、脱位伴血管损伤患者的临床资料。其中男性24例，女性7例，年龄21～62岁，平均41岁。结合临床体征，运用彩色超声、CTA、手术探查等明确血管损伤，分别采用外固定支架、钢板、螺钉固定骨折脱位，并根据具体情况对损伤血管进行取栓、修补、自体静脉或人造血管移植重建血循环，分析保肢指数（predictive salvage index，PSI评分）、早期诊断、治疗方法对预后的作用。结果本组病例1例死亡，截肢6例，手术成功修复31例股动脉、胭动脉、胫前及胫后动脉，24例肢体存活患者分别随访1～4年，平均24．2个月。6例骨不连或感染骨缺损经二期植骨、骨转运骨折愈合，7例膝关节脱位患者进行二期韧带修复重建，功能优良率为71．4％。结论PSI评分≤10分的膝关节周围骨折、脱位伴血管损伤患者应积极实施治疗，早期明确诊断、手术重建血循环是治疗成功的关键因素。

关键词：骨折膝关节脱位血管损伤

腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究

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中国病理生理杂志 2007年第11期23卷 2173-2178页

作者：解先宽杨迪生叶招明陶惠民浙江大学医学院附属第二医院骨科浙江杭州310009

目的:构建重组反义c-myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。方法:应用基因重组技术,将约750bp的人c-myccDNA反向克隆到腺病毒载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),与咖啡因、顺铂单独或联合体外作... 详细信息

目的:构建重组反义c-myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。方法:应用基因重组技术,将约750bp的人c-myccDNA反向克隆到腺病毒载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),与咖啡因、顺铂单独或联合体外作用于人骨肉瘤MG-63细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)、MTT、流式细胞仪(FCM)、透射电镜等检测c-Myc蛋白、bcl-2、bax、E2F-1等基因表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析Ad-Asc-Myc、咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。结果:成功构建Ad-Asc-myc,滴度可达2×1012pfu/L,体外转染MG-63细胞48h后,可降低c-Myc蛋白表达,并抑制其体外增殖;Ad-Asc-myc、2.0mol/L咖啡因分别与浓度为2.0、5.0mg/L顺铂共同作用后,可增加顺铂对MG-63细胞的体外增殖抑制率;Ad-Asc-myc联合2.0mol/L咖啡因能明显加强顺铂的体外抗肿瘤作用,凋亡相关基因bcl-2基因表达下降,bax表达上升,而E2F-1表达无明显变化;FCM检测显示Ad-Asc-myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡,并增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用;单独咖啡因不能诱导瘤细胞凋亡,但能增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用;Ad-Asc-myc联合2.0mol/L咖啡因能明显加强顺铂诱导瘤细胞凋亡作用。细胞周期分析显示顺铂作用后瘤细胞出现S期阻滞,而咖啡因则能逆转这种阻滞;Ad-Asc-myc转染的骨肉瘤细胞出现G2/M期阻滞。结论:腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因能明显增强顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞的诱导凋亡及化疗作用。

关键词：骨肉瘤基因 c-myc 咖啡因腺病毒

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

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中国病理生理杂志 2005年第7期21卷 1326-1330页

作者：解先宽杨迪生叶招明陶惠民浙江大学医学院第二附属医院骨科浙江杭州310009

目的:通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达,并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。方法:以腺病毒为载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞,降低MG-63细胞c-... 详细信息

目的:通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达,并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。方法:以腺病毒为载体,构建表达反义c-myc的重组腺病毒(Ad-Asc-myc),并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞,降低MG-63细胞c-myc的表达,与不同浓度的顺铂作用后,采用MTT、蛋白免疫印迹(Westernblot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪(FCM)、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。结果:构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48h后,可明显降低c-Myc蛋白表达,并与浓度为2.0mg/L的顺铂作用2h后,对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%;转染的细胞Bcl-2表达降低,Bax表达增加,而E2F-1的表达无变化;FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡,并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。结论:降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。

关键词：基因,c-myc 骨肉瘤顺铂细胞凋亡

Survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC_1/DDP凋亡的实验研究

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现代妇产科进展 2004年第2期13卷 107-109页

作者：阮菲解先宽刘少阳浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006 浙江大学医学院附属第二医院武汉大学附属中南医院

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行... 详细信息

目的 :探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡的作用。方法 :将脂质体介导的survivin反义寡核苷酸 (survivin ASONs)作用于COC1/DDP细胞 ,采用一步法RT PCR检测survivin、bcl 2mRNA的表达 ,并进行细胞核DNA梯形电泳 ,检测caspase 3活性 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果 :经survivin ASONs作用后COC1/DDP细胞中survivin等抗凋亡基因的表达下降 ,细胞核DNA电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ,caspase 3活性增加且呈时间依赖性 ,细胞凋亡率达33.18% ,细胞周期G2 /M及S期明显下降而多阻滞于G0 /G1期 ,与对照组差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论 :survivin ASONs反义寡核苷酸能诱导人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞凋亡。

关键词：卵巢肿瘤寡核苷酸类反义抗药性肿瘤细胞凋亡

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恶性骨肿瘤靶向性治疗研究进展

国外医学（骨科学分册） 2004年第3期25卷 141-143页

作者：解先宽杨迪生浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

本文从病毒增殖溶瘤、肿瘤血管靶向、基因治疗载体靶向导入和靶向性基因表达等方面,对近年来恶性骨肿瘤靶向性治疗的研究进展作一综述。

关键词：恶性骨肿瘤靶向性治疗基因治疗病毒肿瘤生长