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BMP2信号通路介导的肾动脉钙化对糖尿病肾病进展的影响

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BMP2信号通路介导的肾动脉钙化对糖尿病肾病进展的影响

作者：覃春美西南医科大学

学位级别：硕士

目的:血管钙化是糖尿病患者并发心血管疾病的主要表现之一,也是糖尿病患者死亡的重要危险因素。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)作为糖尿病的严重并发症之一,其发生发展和糖尿病血管损伤紧密相关。已有研究表明,糖尿病患者比非糖... 详细信息

目的:血管钙化是糖尿病患者并发心血管疾病的主要表现之一,也是糖尿病患者死亡的重要危险因素。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)作为糖尿病的严重并发症之一,其发生发展和糖尿病血管损伤紧密相关。已有研究表明,糖尿病患者比非糖尿病患者更易发生动脉血管钙化,而DN患者的钙化程度更为严重及普遍。目前对DN血管钙化的研究大多集中在外周动脉及冠状动脉,而对肾动脉血管的改变知之甚少。本研究通过观察糖尿病肾病基础上给予增强血管钙化的因素后,肾动脉钙化程度与肾功能进展的关系,同时观察糖尿病肾病大鼠肾动脉上BMP2及其下游因子Smad1,Runx2和Osterix的基因及蛋白变化情况,探讨糖尿病肾病时肾动脉钙化严重程度与糖尿病肾病进展的关系,及BMP2/Smad1/Runx2/0sterix信号通路激活在糖尿病肾病大鼠肾动脉钙化的作用。方法:将64只SD大鼠随机分为对照组(CON组,18只))、糖尿病肾病组(DN组,22只)、糖尿病肾病合并血管钙化组(DN+VDN组,24只),DN组及DN+VDN组高脂饲料喂养4周后,予以单次腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液35mg/kg诱导糖尿病,CON组注射同等体积的0.1mmol/L柠檬酸盐缓冲液。72小时后测血糖,连续三天血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病成模。2周后,24 h尿蛋白量大于30 mg,尿量>原尿量50%者为DN模型制备成功。DN成模第二天,DN+VDN组以维生素D3(300 000U/kg)肌肉注射,将尼古丁(25 mg/kg)完全溶解于花生油中给DN+VDN组大鼠灌胃,9 h后再灌胃一次,其余两组予等量花生油灌胃及生理盐水肌注。8、12和16周时收集各组大鼠尿液检测24小时尿白蛋白(24-h Upro);心脏采血检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、空腹血糖、胱抑素C(CysC)。大鼠肾脏组织病理检查:清洁取肾,石蜡包埋后行HE染色,观察肾小球和肾小管间质的基本病理改变情况。摘取双侧肾动脉用生理盐水冲洗后,Von Kossa染色观察大鼠肾动脉钙盐沉积,并用钙离子试剂盒检测肾动脉组织钙含量。免疫荧光双染检测各组大鼠肾动脉组织BMP2/α-SMA和Runx2/α-SMA蛋白表达变化。免疫组化检测大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2及Osterix蛋白的表达。实时荧光定量(RT-PCR)检测各组大鼠肾动脉组织BMP2和Runx2的基因表达。结果:1、大鼠一般情况①体重:与CON组比较,模型组体重明显减轻,但DN组及DN+VDN组各时间点体重无明显统计学差异。②血糖:CON组血糖在正常水平范围波动,DN组及DN+VDN组大鼠血糖值显著高于同时间点CON组,且两模型组间血糖无统计学差异。③血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr):与CON组相比,DN组及DN+VDN组大鼠BUN值于实验8周后明显升高,12周后DN组和DN+VDN组血Scr亦显著升高(P<0.05),而DN组与DN+VDN组间BUN、Scr值均无明显统计学差异。④胱抑素C(CysC):实验期间,DN组大鼠血清CysC水平明显高于同时间点CON组,低于DN+VDN组(P<0.05)。⑤24小时尿白蛋白(24-h Upro):8周后DN组及DN+VDN组大鼠24-h Upro较CON组开始上升,随时间的延长进行性加重,并于16周末DN+VDN组大鼠的24-h Upro较同期DN组明显升高(P<0.05)。2、大鼠肾动脉钙化的特征:①Von Kossa染色:CON组大鼠肾动脉组织各时间点均未见明显异常,DN组及DN+VDN组大鼠8周末时即可见血管内膜及中膜弹性纤维间大量黑色颗粒,且随着时间延长,沉积的黑色颗粒逐渐增多聚集成团。②钙含量测定:随时间的进展,三组大鼠钙含量均逐渐增加,且DN+VDN组大鼠肾动脉组织各时间点钙水平较DN组显著升高,CON组大鼠较同期DN组明显下降(P<0.05)。3、免疫荧光检测BMP2/α-SMA和Runx2/α-SMA的表达:CON组大鼠肾动脉组织中可见BMP2及Runx2均少量表达且各时间点无明显变化;与同期CON组大鼠相比,DN组和DN + VDN组大鼠肾动脉组织BMP2及Runx2表达的绿色荧光强度相对较强,而α-SMA表达的红色荧光相对较弱;与DN组相比,DN +VDN组大鼠肾动脉血管中可见BMP2及Runx2蛋白的表达较同期DN组增加,α-SMA的表达减少;此外,随时间的推移,DN和DN + VDN组大鼠α-SMA的荧光强度也随BMP2或Runx2蛋白表达的增强而减弱。4、BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号蛋白免疫组化表达:CON组肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2及Osterix在血管中膜均有散在微量表达。DN组大鼠肾动脉组织中可见BMP2、Smad1、Runx2和Osterix蛋白在实验8周末时表达即开始明显增加,阳性着色深

关键词：骨形态蛋白2 糖尿病肾病肾动脉血管钙化

骨形态发生蛋白2与血管钙化的相关性研究进展

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山东医药 2014年第26期54卷 97-99页

作者：覃春美泸州医学院附属医院四川泸州646000

骨形态发生蛋白（ BMP ）是一种多功能的生长因子，属于转化生长因子β（ TGF-β）超家族成员，至今已有超过40种BMP单体被结晶克隆。 BMP-2是目前研究最为广泛、也是公认的BMP亚型中成骨活性最强的细胞因子，可参与骨骼系统早期发育、... 详细信息

骨形态发生蛋白（ BMP ）是一种多功能的生长因子，属于转化生长因子β（ TGF-β）超家族成员，至今已有超过40种BMP单体被结晶克隆。 BMP-2是目前研究最为广泛、也是公认的BMP亚型中成骨活性最强的细胞因子，可参与骨骼系统早期发育、背腹侧组织构建、附件骨的形成以及牙胚、心、脑、肾的发生；可诱导未分化的骨髓间充质细胞定向分化成成软骨细胞和成骨细胞，参与骨和软骨的生长发育及其重建过程，也是惟一能够诱导异位成骨的细胞因子。血管壁上钙过量沉积称为血管钙化，最新研究表明，早期血管钙化的形成过程与骨和软骨的发育相似。现对BMP-2与血管钙化相关性的研究进展综述如下。

关键词：骨形态发生蛋白血管钙化骨发育

血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

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四川大学学报（医学版） 2016年第2期47卷 180-183页

作者：覃春美魏晓龚财判吴蔚桦刘建樊均明欧三桃泸州医学院附属医院肾病内科泸州646000

目的观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2(BMP2)/Smad1/Runt相关转录因子2(Runx2)信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维... 详细信息

目的观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2(BMP2)/Smad1/Runt相关转录因子2(Runx2)信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高(P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降(P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2mRNA(r=0.655,P<0.05)、Smad1mRNA(r=0.735,P<0.05)、Runx2mRNA(r=0.734,P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。

关键词：血管钙化骨形态蛋白2 信号通路大鼠

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妇产科采用多媒体实施健康教育的效果探究

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第7期 202-203页

作者：覃春美荔波县朝阳镇中心卫生院贵州黔南558402

本研究是关于妇产科采用多媒体实施健康教育管理状况的调査研究。本研究在对研究缘由、研究意义、国内外学者的文献进行总结的基础上设计了本次研究的方案,以医院为主体研究对象,本次设计共计发放307份,其中对6位妇产科医生进行了重点... 详细信息

本研究是关于妇产科采用多媒体实施健康教育管理状况的调査研究。本研究在对研究缘由、研究意义、国内外学者的文献进行总结的基础上设计了本次研究的方案,以医院为主体研究对象,本次设计共计发放307份,其中对6位妇产科医生进行了重点的调研,并把这6位医生的针对妇产科采用多媒体健康教育的研究上,在主体上划分为健康教育时间、支持时间、个人专业发展时间以及事务性工作时间的基础上,从健康教育价值感、健康教育规划能力、健康教育监控能力、健康教育评估能力这四个维度对妇产科采用多媒体实施健康教育的管理能力进行分析,具有实用价值和推广价值。

关键词：妇产科多媒体健康教育

2型糖尿病肾病大鼠肾动脉上BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路的激活

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中国动脉硬化杂志 2016年第10期24卷 983-988页

作者：覃春美龚财判魏晓吴蔚桦刘建欧三桃西南医科大学附属第一医院肾病内科四川省泸州市646000

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾动脉钙化及BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路的激活情况。方法 40只大鼠随机分为对照组和2型糖尿病肾病组(DN组,STZ加高脂高糖饮食诱导的2型DN大鼠模型),采用钙离子试剂盒检测8、12、16周时肾动脉... 详细信息

目的探讨2型糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾动脉钙化及BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路的激活情况。方法 40只大鼠随机分为对照组和2型糖尿病肾病组(DN组,STZ加高脂高糖饮食诱导的2型DN大鼠模型),采用钙离子试剂盒检测8、12、16周时肾动脉钙含量,Von Kossa染色观察肾动脉上钙盐沉积。免疫组化检测肾动脉的BMP2、Smad1、Runx2及Osterix蛋白表达,RT-PCR法检测肾动脉BMP2及Runx2 mRNA水平。结果DN组大鼠各时间点血糖、尿素氮、胱抑素C及24 h尿白蛋白水平均较对照组明显增高(P<0.05),自实验12周后,DN组大鼠的血肌酐值较对照组显著增高(P<0.05)。DN组大鼠肾动脉组织钙含量较同时间点对照组明显增加(P<0.05),Von Kossa染色见对照组大鼠各时间点均无明显钙盐沉积,而DN组大鼠肾动脉自第8周时即有黑色颗粒沉积,随着时间的延长沉积的黑色钙盐逐渐增多并聚集成团。与对照组相比,DN组大鼠肾动脉组织中BMP2及其下游因子的表达明显升高,同时BMP2、Runx2 mRNA水平亦增加。相关性分析表明,肾动脉钙含量与BMP2、Runx2 mRNA均呈显著正相关(r=0.641,r=0.683,均P<0.01)。结论 2型糖尿病肾病模型大鼠肾动脉早期即可出现血管钙化,且BMP2/Smad1/Runx2/Osterix信号通路激活在其中起重要调节作用。

关键词：糖尿病肾病肾动脉骨形态蛋白2 信号通路

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高磷血症与慢性肾脏病血管钙化研究进展

现代临床医学 2015年第1期41卷 13-15页

作者：覃春美欧三桃泸州医学院附属医院肾病内科四川泸州646000

慢性肾脏病患者普遍存在高磷血症,同时高磷血症是慢性肾脏病患者血管钙化发生和进展的主要因素,并与心血管疾病发病率和病死率的增加密切相关。本文对高磷血症与慢性肾脏病血管钙化研究进展进行综述。

关键词：慢性肾脏病高磷血症血管钙化

肾动脉钙化增加2型糖尿病肾病大鼠进行性肾功能损伤

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基础医学与临床 2017年第2期37卷 217-223页

作者：覃春美龚财判魏晓吴蔚桦刘建欧三桃西南医科大学附属第一医院肾病内科四川泸州646000

目的探讨肾动脉钙化对2型糖尿病肾病大鼠肾功能的影响。方法将大鼠随机分为对照组(CON组)、糖尿病肾病组(DN组)及DN合并肾动脉血管钙化组(DN+VC组)。DN组和DN+VC组大鼠在高脂高糖饮食基础上腹腔注射链脲菌素(STZ)制备2型糖尿病肾病(diab... 详细信息

目的探讨肾动脉钙化对2型糖尿病肾病大鼠肾功能的影响。方法将大鼠随机分为对照组(CON组)、糖尿病肾病组(DN组)及DN合并肾动脉血管钙化组(DN+VC组)。DN组和DN+VC组大鼠在高脂高糖饮食基础上腹腔注射链脲菌素(STZ)制备2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型,造模成功后DN+VC组肌注维生素D3及尼古丁灌胃,分别于实验第8、12和16周末处死大鼠,用Von Kossa染色观察大鼠肾动脉钙盐沉积,Ca2+试剂盒检测肾动脉钙含量,免疫荧光双染观察肾动脉α-SMA/BMP2表达,荧光定量PCR检测肾动脉BMP2 mRNA水平等判断肾动脉钙化程度。检测大鼠血清尿素氮、肌酐、胱抑素C及24 h尿蛋白水平,HE染色观察肾组织病理改变。结果 DN组及DN+VC组肾动脉的钙盐沉积及钙含量、BMP2蛋白及基因表达均较同时间点CON组明显增加,DN+VC组较DN组增加更明显(P<0.05)。DN组和DN+VC组大鼠血清尿素氮、肌酐、胱抑素C及24 h尿蛋白随时间进展逐渐升高,且明显高于同时间点CON组(P<0.05)。与DN组相比,DN+VC组大鼠仅胱抑素C水平明显升高(P<0.05),24 h尿蛋白量在第16周时明显增加(P<0.05)。DN组大鼠肾组织病理损伤呈进行性加重,DN+VC组大鼠的病理改变较DN组明显加重。肾动脉钙含量与血清尿素氮、肌酐、胱抑素C、24 h尿蛋白以及BMP2 mRNA呈正相关(P<0.01)。结论肾动脉钙化的发生及严重程度可能参与和促进糖尿病肾病的进展。

关键词：肾动脉血管钙化糖尿病肾病骨形态蛋白2

骨形态生成蛋白2信号通路介导的肾动脉钙化对糖尿病肾病进展的影响

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中华肾脏病杂志 2016年第3期32卷 173-179页

作者：覃春美吴蔚桦刘建樊均明龚财判魏晓欧三桃西南医科大学附属医院肾病内科四川省泸州市646000

目的探讨肾动脉钙化对糖尿病肾病（DN）进展的影响及骨形态生成蛋白2（BMP2）信号通路激活在DN大鼠肾动脉钙化中的作用。方法60只SD雄性大鼠随机分为对照组（CON组）、DN组、DN合并血管钙化组（DN＋VDN组），DN组及DN＋VDN组大鼠分别给... 详细信息

目的探讨肾动脉钙化对糖尿病肾病（DN）进展的影响及骨形态生成蛋白2（BMP2）信号通路激活在DN大鼠肾动脉钙化中的作用。方法60只SD雄性大鼠随机分为对照组（CON组）、DN组、DN合并血管钙化组（DN＋VDN组），DN组及DN＋VDN组大鼠分别给予高脂高糖饮食加链脲菌素（STZ）腹腔注射建立糖尿病大鼠模型，成模后DN＋VDN组给予维生素D3肌注及尼古丁灌胃，分别于成模后8、12、16周处死大鼠，留取血、尿标本检测肾功能、血糖以及24h尿蛋白水平。Von Kossa染色观察大鼠肾动脉钙盐沉积情况，钙离子试剂盒检测肾动脉组织钙含量。HE染色观察肾脏病理改变，免疫组化检测肾动脉上BMP2／Smadl／Runx2／Osterix信号蛋白表达，实时定量PCR测定BMP2和Runx2的mRNA表达。结果DN组及DN＋VDN组大鼠肾动脉的钙含量及钙盐沉积较同期CON组显著增加，且DN＋VDN组较DN组增加更明显（P〈0．05）。DN组及DN＋VDN组大鼠肾功能指标随时间的推移逐渐升高，且明显高于同时间CON组（P〈0．05）。与DN组相比，DN＋VDN组大鼠各时间点胱抑素C水平均增高（P〈0．05），24h尿蛋白量于16周后差异有统计学意义（P〈0．05）。DN组及DN＋VDN组大鼠肾组织病理损伤较CON组呈进行性加重，且DN＋VDN组大鼠的病理改变更明显。此外，DN及DN＋VDN组组大鼠BMP2／Smadl／Runx2／Osterix信号蛋白及BMP2、Runx2mRNA水平均较同时间点CON组升高（P〈0．05），且DN＋VDN组增高更明显（P〈0．05）。相关性分析表明，肾动脉钙含量与血清尿素氮、肌酐、胱抑素C、24h尿蛋白量以及BMP2、Runx2mRNA均呈正相关（r=0．835、0．705、0．829、0．897、0．641、0．683，均P〈0．01）。结论肾动脉钙化的发生及严重程度可能参与和促进了DN的进展，而其中BMP2信号通路激活在DN肾动脉钙化中起重要的调节作用。

关键词：糖尿病肾病肾动脉骨形态生成蛋白2 血管钙化

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌早期IFN-λ表达增加

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基础医学与临床 2019年第3期39卷 402-403页

作者：李刚覃春美张燕尹雷汪代杰泸州市人民医院肿瘤科四川泸州646000 泸州市人民医院肾病内科四川泸州646000

肝癌是严重危害人类健康的常见肿瘤之一,揭示肝癌的发病机制刻不容缓。干扰素-λ(interferon- lambda,IFN-λ)是发现最早、研究最多,首次被克隆并用于肿瘤和病毒性疾病治疗的细胞因子[1]。多种肿瘤都有IFN-λ及其下游因子JAK和STAT的表... 详细信息

肝癌是严重危害人类健康的常见肿瘤之一,揭示肝癌的发病机制刻不容缓。干扰素-λ(interferon- lambda,IFN-λ)是发现最早、研究最多,首次被克隆并用于肿瘤和病毒性疾病治疗的细胞因子[1]。多种肿瘤都有IFN-λ及其下游因子JAK和STAT的表达或活化,表明IFN-λ的激活与肿瘤的发生发展密切相关。但在肝癌形成过程中,IFN-λ的表达及其作用机制研究甚少。本研究采用二乙基亚硝胺(diethynitrosamine,DEN)诱导的肝癌大鼠模型,观察肝脏IFN-λ的动态变化,及其在肝癌发病过程中的作用和机制,为临床防治肝癌提供新的治疗靶点。

关键词：二乙基亚硝胺大鼠肝癌早期诱发 lambda 细胞因子治疗靶点病毒性疾病