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细菌外囊泡在疾病发生发展中的作用机制及应用前景

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协和医学杂志 2023年第5期14卷 915-924页

作者：罗晓霞覃思华王晖迪周宏伟何彦南方医科大学珠江医院检验医学部微生态医学中心广州510000 南方医科大学器官衰竭国家重点实验室广州510000 广东省医学检验临床医学研究中心广州510000

细菌外囊泡(bacterial extracellular vesicles, BEVs)是细菌衍生的细胞外囊泡。作为细菌间或细菌-宿主间相互作用的关键新媒介,BEVs是一把“双刃剑”:一方面在宿主多种病理过程,包括肠道炎性疾病、中枢神经系统相关疾病、肝脏疾病、代... 详细信息

细菌外囊泡(bacterial extracellular vesicles, BEVs)是细菌衍生的细胞外囊泡。作为细菌间或细菌-宿主间相互作用的关键新媒介,BEVs是一把“双刃剑”:一方面在宿主多种病理过程,包括肠道炎性疾病、中枢神经系统相关疾病、肝脏疾病、代谢性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤中发挥“致病”作用;另一方面作为潜在生物标志物、疫苗、抗肿瘤制剂等发挥“治病”作用,为疾病的诊治打开了新思路。但关于BEVs的研究目前尚处于起步阶段,在囊泡分离技术、疾病诊断特异性、囊泡储运优化等方面仍面临挑战,未来需设计严谨的临床研究以证实其诊断和治疗价值。

关键词：细菌外囊泡疾病生物标志物疫苗益生菌抗肿瘤制剂

非小细胞肺癌细胞及血清exosomes差异蛋白质组学初步研究

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非小细胞肺癌细胞及血清exosomes差异蛋白质组学初步研究

作者：覃思华南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景与目的肺癌是全世界发病率死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌总数85%,严重影响人类的生存质量。目前大多数NSCLC诊断时已进展至中晚期,失去最佳治疗时机,故NSCLC的早期诊断意义... 详细信息

研究背景与目的肺癌是全世界发病率死亡率最高的恶性肿瘤之一,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌总数85%,严重影响人类的生存质量。目前大多数NSCLC诊断时已进展至中晚期,失去最佳治疗时机,故NSCLC的早期诊断意义重大。外泌体(exosomes)是一类由脂质双分子层包裹的纳米小囊泡,携带着大量亲本细胞分泌的生物信息分子,如蛋白、核酸、脂类等。Exosomes可通过体液将其内包裹的核酸、蛋白质等生物大分子远距离转运至靶细胞,通过内吞或配体结合等方式使生物信息分子进入靶细胞,发挥相应功能,调控机体多种生理过程。外泌体中蛋白质是参与疾病发生发展的重要部分。外泌体还携带了特异的疾病信息,介导疾病的发生发展,具有生物标志物的潜力。故本文旨在通过建立一套血清及细胞来源exosomes分离纯化鉴定方法,然后进行NSCLC早晚期患者、健康人志愿者、NSCLC细胞系A549与正常人支气管上皮细胞系16HBE来源exosomes差异蛋白组学初步分析,尝试筛选NSCLC早期诊断候选标志物。方法首先利用差速超速离心法分离细胞和血清来源exosomes,并对血清exosomes加以蔗糖垫纯化。随后用TEM、Nanosight、western blot鉴定分离出的exosomes,分析其分离效果并用Nanosight 比较NSCLC与健康人血清exosomes浓度及粒径分布。收集NSCLC早期患者8例、晚期患者8例、健康志愿者12例分为三组混合血清,NSCLC细胞系A549、正常人支气管上皮细胞系16HBE细胞上清,分离纯化血清及细胞上清exosomes,提取exosomes蛋白并酶解成肽段,进行高效液相色谱分离后运用Q-Exactive质谱仪进行label free LC-MS/MS,运用LFQ非标定量分析查库定量NSCLC与健康人差异蛋白,最后通过生物信息学对差异蛋白进行初步分析预测。结果1.血清及细胞上清exosomes分离与鉴定Nanosight鉴定提取产物颗粒直径主要分布于30-150nm之间,TEM可观察到大小均匀、形态一致100nm左右的杯状或圆形脂质双层膜的囊性结构,均符合exosomes形态描述。Western Blot方法能检测到提取的颗粒蛋白溶液有exosomes特异的标志分子(CD63、TSG101)表达,exosomes阴性标志分子calnexin不表达。2.血清及细胞上清exosomes质谱分析所有样品LC-MS/MS技术重复三次。质谱定性到的蛋白质共计3172个,按照筛选标准Ratio>2或<0.5,P value<0.05作为显著性差异阈值,筛选每组差异蛋白质(包括蛋白差异表达、蛋白唯一表达)数量为:早期NSCLC患者与健康人血清exosomes比较共有142种差异蛋白,与健康人相比,早期NSCLC患者血清exosomes显著性上调蛋白25种,下调蛋白33种。与健康人相比,晚期NSCLC患者血清exosomes显著性上调蛋白23种,下调蛋白27种,共有162种差异蛋白。NSCLC早期与晚期患者血清exosomes 比较,差异蛋白有160种,与早期NSCLC患者相比,晚期NSCLC患者血清exosomes显著性上调蛋白25种,下调26种。早期NSCLC、晚期NSCLC患者与健康人血清exosomes三组比较,总共有297种蛋白有显著性差异(P<0.05)。NSCLC细胞系A549与正常支气管上皮永生化细胞系16HBE exosomes 比较,与16HBE细胞系相比,A549细胞exosomes显著性上调蛋白有65种,下调蛋白有62种。3.血清及细胞来源exosomes差异蛋白组学分析以蛋白表达差异倍数从高到低排序,可发现筛选到FGA、FGB、FN1、angiopoietin 1等蛋白在各组间均有显著性差异。与健康人相比,早期、晚期NSCLC患者血清exosomes这些蛋白差异倍数都很高,甚至高达几十倍。通过生物信息学对差异蛋白预测,其中MHC2、MHC1、VCAN、CNTN1、ICAM1等差异蛋白富集在细胞粘附分子(Cell adhesion molecules,CAMs)通路,与肿瘤转移密切相关。细胞上清exosomes间差异蛋白富集主要涉及肿瘤代谢相关的生物学进程及肿瘤细胞转移机制相关的通路。结论1.采用差速超速离心法可成功提取血清和细胞上清exosomes,并适用于后期蛋白组学质谱分析。*** 比较NSCLC患者与健康人血清exosomes颗粒浓度、粒径大小及分布均有显著性差异(p<0.001),NSCLC血清exosomes颗粒浓度低于健康人,exosomes粒径大于健康人,分布也更不均一。3.利用高通量质谱技术分析比较早、晚期NSCLC患者与健康人

关键词：外泌体(exosomes) 蛋白质血清细胞上清

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香甜的糯米糕

创新作文(初中版) 2010年第2期 12-13页

作者：覃思华广东深圳市东湖中学风帆文学社

吃米糕应该是很久以前的事情了吧?那种洁白的糯米糕,那种只点缀了少许砂糖的香甜的米糕……真令人难忘。第一次吃这种东西是什么时候呢?学前班?不,好像更早。这些事情早在记忆中模糊了,唯一清楚的只有与爷爷的米糕故事……

关键词：渣儿砂糖妈妈

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基于液压透析法的尿液细胞外囊泡分离

中华检验医学杂志 2017年第6期40卷 460-462页

作者：徐咏覃思华安泰学唐月汀黄依瑶郑磊南方医科大学南方医院检验科广东省重大疾病临床快速诊断生物传感工程技术研究中心广州510515 武汉大学中南医院检验科

细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）是用于细胞间信息传递的膜性囊泡，EVs的内容物如核酸、蛋白质、脂质等可反映机体的生理病理状态，研究表明EVs中的微小RNA（microRNA，miRNA）在多种疾病中发挥重要作用，并被认为有作为疾... 详细信息

细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）是用于细胞间信息传递的膜性囊泡，EVs的内容物如核酸、蛋白质、脂质等可反映机体的生理病理状态，研究表明EVs中的微小RNA（microRNA，miRNA）在多种疾病中发挥重要作用，并被认为有作为疾病标志物的巨大潜力.

关键词：细胞外囊泡透析法细胞间信息传递疾病标志物分离尿液液压

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外泌体蛋白质组学研究进展

临床检验杂志 2016年第12期34卷 927-930页

作者：覃思华郑磊南方医科大学南方医院检验科广州510515

外泌体(exosome)是一类由体内多种活细胞分泌的纳米级的双层膜结构小囊泡,可携带包含亲代细胞信息的核酸、蛋白质和脂质等。大多数外泌体有特殊的功能,可能与细胞信号转导功能相关。现已发现外泌体参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监... 详细信息

外泌体(exosome)是一类由体内多种活细胞分泌的纳米级的双层膜结构小囊泡,可携带包含亲代细胞信息的核酸、蛋白质和脂质等。大多数外泌体有特殊的功能,可能与细胞信号转导功能相关。现已发现外泌体参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监视等多个环节。外泌体中蛋白质是参与疾病发生、发展的重要部分。该文总结外泌体蛋白质组学的研究思路及方法,综述目前外泌体蛋白质的临床作用,并对外泌体蛋白质组学研究面临的挑战和前景进行分析与评述。

关键词：外泌体蛋白质组学疾病

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血清中外泌体及外泌体RNA提取方法的比较

中华检验医学杂志 2016年第6期39卷 427-432页

作者：黄依瑶唐月汀覃思华徐咏安泰学郑磊南方医科大学南方医院检验科广东省重大疾病临床快速诊断生物传感工程技术研究中心广州510515

目的评价超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、... 详细信息

目的评价超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体，通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布，评估外泌体提取效率；采用超高速离心法＋Trizol LS法、ExoQuick＋SeraMir、TEI＋TER与ExoRNeasy试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA（exo—RNA），利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布，实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。结果外泌体提取方法中，比较外泌体浓度和其蛋白浓度，ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法；超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白，而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中，不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达，未影响miRNA相对表达趋势；ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高，各miRNA表达水平较高；TEI＋TER法未见明显RNA条带，样本中各miRNA表达水平稳定；超高速离心法＋TrizolLS法与ExoQuick＋SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带，此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究，而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。

关键词：外泌体微RNAs 超速离心法

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白车身柔性焊装线上车型识别功能的实现

中文科技期刊数据库（引文版）工程技术 2021年第2期 308-310页

作者：龚彪吴碧武覃思华柳州柳新汽车冲压件有限公司广西柳州545000

白车身焊装线要实现柔性生产,实现车型识别功能是其中一个难题。解决该难题主要依靠车型代码规划及车型识别技术的应用。RFID读写技术的应用是其使用的基础, 该技术已经广泛运用于智能制造、仓储物流、医疗、智能交通等领域,具有干扰性... 详细信息

白车身焊装线要实现柔性生产,实现车型识别功能是其中一个难题。解决该难题主要依靠车型代码规划及车型识别技术的应用。RFID读写技术的应用是其使用的基础, 该技术已经广泛运用于智能制造、仓储物流、医疗、智能交通等领域,具有干扰性超强、数据容量十分庞大、可以动态操作、使用寿命长、防冲突和安全性高等特点。本文详细介绍了一项白车身焊装线车型识别及车型代码规划的成功实际应用案例。

关键词：车型规划识别编程

制度路径融合激活农村生态环境治理集体行动的机制——基于嵌套制度体系分析框架

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中国农村经济 2024年 161-184页

作者：苏毅清覃思杰舒全峰广西大学公共管理学院清华大学智能社会治理研究院

政府主导、自由市场与农户自组织三种制度路径在农村生态环境治理中存在相生相克的关系，这可能导致农村生态环境治理集体行动难以被激活。本文基于嵌套制度体系分析框架剖析了广西壮族自治区玉林市福绵区生猪养殖粪污治理的案例，揭示... 详细信息

政府主导、自由市场与农户自组织三种制度路径在农村生态环境治理中存在相生相克的关系，这可能导致农村生态环境治理集体行动难以被激活。本文基于嵌套制度体系分析框架剖析了广西壮族自治区玉林市福绵区生猪养殖粪污治理的案例，揭示了农村生态环境治理集体行动的具体激活机制。研究发现：政府主导、自由市场与农户自组织三种制度路径的融合，需要以制度路径与治理情境的匹配为前提条件，由此实现以不同制度层级规则互动为本质的制度路径融合。不同制度层级规则的互动使嵌套制度体系获得结构上的稳定性与应对冲击的韧性，进而改善影响集体行动的关键要件，并最终实现集体行动的激活。基于农村生态环境治理集体行动的激活机制，本文进一步提出，农村生态环境治理集体行动的激活机制是由“制下市场”这一制度模块单元所驱动的。因此，无论具体的农村生态环境治理情境如何，实践中只有成功构建“制下市场”制度模块单元，农村生态环境治理的集体行动才有望得到激活。

关键词：农村生态环境治理嵌套制度体系农户自组织集体行动

环境话语的多模态趋近化策略建构与传播效果研究 ——以英国媒体对世界气候大会新闻报道为例

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环境话语的多模态趋近化策略建构与传播效果研究 ——以英国媒体...

作者：练思华浙江传媒学院

学位级别：硕士

本文对英国媒体在第27届和第28届世界气候大会新闻报道自建语料库,运用Ant Conc工具、SPSS软件以及内容分析方法,从空间、时间和价值三个维度出发,探讨媒体的态度立场以及所采用的多模态趋近化话语策略和对受众传播效果。同时结合眼动实... 详细信息

本文对英国媒体在第27届和第28届世界气候大会新闻报道自建语料库,运用Ant Conc工具、SPSS软件以及内容分析方法,从空间、时间和价值三个维度出发,探讨媒体的态度立场以及所采用的多模态趋近化话语策略和对受众传播效果。同时结合眼动实验,对这些话语策略的效果进行了验证,评估传播内容的实际效果。研究发现,英国媒体在表达立场态度时,主要聚焦于气候、不可再生能源燃料和气体排放等问题,在陈述观点时经常引用第三方的论点,更多地采用名词性词汇和委婉的情态动词,以减轻对事实的责任承担。在文本层面,英国媒体在构建空间趋近化时,习惯使用专有名词来区分内外身份阵营,运用抽象名词来操纵事件的影响效果。在时间趋近化方面,他们倾向于使用情态动词和过去式,以委婉的方式表达观点,从而操控受众对传播内容的时空感知。在价值趋近化方面,则通过大量使用形容词和抽象名词来进行情感传播和身份认同的建构。在图像层面,英国媒体在空间趋近化上通过合理安排主体元素的位置和方位,凸显话语中心传播的主体性,并擅长运用对比、大小等图片修辞手段来削弱与对立阵营的客体地位。在时间趋近化方面,利用光线明暗、象征性等修辞手法塑造ODC阵营对IDC阵营的对立和侵略性形象,以控制受众对新闻事件的时空感知。在价值趋近化维度上,通过精心控制景别以调整距离感,运用不同角度营造特定氛围并树立权威地位。眼动实验的结果表明,英国媒体在空间维度上通过词汇和构式的运用成功地强化了主体性传播的效果。然而,在时间维度上,对于受众的时空感知进行控制时,英语母语者的反应并不显著,反而对中国英语学习者产生了一定的影响。同时,媒体在传递价值情感和塑造权威方面的效果也并不明显。基于这些发现,本文提出从内容、渠道、受众和技术四个方面来突出传播主体性,构建高质量的全媒体矩阵,解构话语的高姿态,并强化多模态互文性,以提高传播效果。这些建议旨在为媒体提供更全面、深入和有效的传播策略。

关键词：趋近化理论环境话语多模态话语分析国际传播