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柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70(EtHSP70)的重组表达及免疫保护效果

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畜牧与兽医 2008年第10期40卷 31-36页

作者：陈珊覃宗华于三科余劲术吴彩艳吕敏娜蔡建平西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医卫生公共实验室广东广州510640

本研究初步评价了柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70(EtHSP70)的免疫保护效果。以RT-PCR方法克隆获得***广东株的Ethsp70基因序列,插入表达载体pMAL-c2X后转化入大肠杆菌Rosetta株,经IPTG诱导,可高效表达分子量为112 ku的可溶性融合蛋白,表达... 详细信息

本研究初步评价了柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70(EtHSP70)的免疫保护效果。以RT-PCR方法克隆获得***广东株的Ethsp70基因序列,插入表达载体pMAL-c2X后转化入大肠杆菌Rosetta株,经IPTG诱导,可高效表达分子量为112 ku的可溶性融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的27%。将Ethsp70基因插入真核载体pcDNA6,构建真核表达质粒pcDNA-Ethsp70。用纯化的重组融合蛋白(rEtHSP70)和pcDNA6-Ethsp70质粒分别以100μg/只剂量肌注免疫雏鸡,攻虫后以盲肠病变计分、相对盲肠卵囊产量(ROP)、相对增重率和抗球虫指数(ACI)为评价指标,结果表明2个免疫组相对盲肠卵囊产量分别为39.4%、45.2%,抗球虫指数由89分别提高至免疫组的164和150。提示EtHSP70可能是一种有潜在应用价值的保护性抗原。

关键词：柔嫩艾美耳球虫热休克蛋白70 基因克隆免疫

鸡艾美耳球虫抗原基因在减毒沙门氏菌的共表达及免疫效果研究

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鸡艾美耳球虫抗原基因在减毒沙门氏菌的共表达及免疫效果研究

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：覃宗华蔡建平谢明权叶秀华王佩瑶陈闻广东省农科院兽医研究所

本研究以孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆获得了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株子孢子微线蛋白-2基因(EnMIC2)和堆型艾美耳球虫(***)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA。再以PCR方法扩增获得该二基因的开放读框(O... 详细信息

本研究以孢子化卵囊的总RNA为模板,用RT-PCR方法克隆获得了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株子孢子微线蛋白-2基因(EnMIC2)和堆型艾美耳球虫(***)广东株子孢子表面抗原基因cSZ1的cDNA。再以PCR方法扩增获得该二基因的开放读框(ORF)后,克隆至减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium),构建了EnMIC2、cSZ1及二基因共表达的重组减毒***,经IPTG诱导获得了重组抗原的高效表达,SDS-PAGE分析表明,表达产物分别占菌体总蛋白的8.6%、9.2%和8.3%。将重组减毒***经口免疫雏鸡后,能诱导产生抗鸡球虫重组抗原的特异性IgG和IgA。免疫后3周试验鸡以同源***和***攻击,可同时获得部分保护,表现为卵囊产量明显减少。

关键词：毒害艾美耳球虫堆型艾美耳球虫微线蛋白-2 cSZ1 减毒鼠伤寒沙门氏菌共表达免疫保护

不同表达条件对Eimeria tenella丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响

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畜牧兽医学报 2010年第9期41卷 1158-1165页

作者：孙铭飞覃宗华谢明权袁建丰吕敏娜余劲术吴彩艳蔡建平广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广州510640

为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的***Ⅱ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物扩增完整... 详细信息

为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达Eimeria tenella丙二酸单酰辅酶A:ACP转移酶活性的影响,以生物信息学技术预测的***Ⅱ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶(Et-MCAT)编码序列为基础,分别设计引物扩增完整ORF,采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的不同策略,选择pMAL-c2x、pET-32a(+)和pProExHTa3种不同表达载体分别构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)后,在不同条件下诱导表达,利用酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性,以评价不同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示,惟切除信号肽和转导肽后的功能蛋白编码区能表达,Rosseta(DE3)/pMAL-c2x-mcat体系的可溶性表达量高于Rosseta(DE3)/pET-32a(+)-mcat,但二者表达产物的酶活性相似,且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但Rosseta(DE3)/pProExHTa-mcat体系仅能表达不溶性蛋白,且复性后无酶活性,改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达EtMCAT的活性及其表达形式有显著影响,其中融合标签和表达温度可能是主要的影响因素,包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。

关键词：柔嫩艾美耳球虫丙二酰单酰辅酶A:ACP转移酶表达载体酶活性

基于氨吸附-红外光谱及程序升温脱附法分析蒙脱石及其热产物的固体酸性

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中国矿物岩石地球化学学会第13届学术年会

作者：刘冬袁鹏刘红梅覃宗华谭道永何宏平朱建喜中国科学院广州地球化学研究所中国科学院研究生院

蒙脱石是一种2:1型层状硅酸盐矿物,其结构中存在一定的Br(?)nsted(B)和Lewis(L)酸位,这些酸位的存在,不仅对某些地质过程(如蒙脱石伊利石化和有机质的催化生烃)具有重要意义,而且与蒙脱石在催化剂/催化载体等领域的应用具有直接关系。... 详细信息

蒙脱石是一种2:1型层状硅酸盐矿物,其结构中存在一定的Br(?)nsted(B)和Lewis(L)酸位,这些酸位的存在,不仅对某些地质过程(如蒙脱石伊利石化和有机质的催化生烃)具有重要意义,而且与蒙脱石在催化剂/催化载体等领域的应用具有直接关系。蒙脱石酸性的主要可能来源包括:层间阳离子极化水、硅羟基(Si-OH)、四面体中类质同像替代位(Si-O-Al)所吸附的HO(及脱水后形成的Si-OH-Al)和未饱和的Al(Al-、Al-HO)等。然而,不同研究所得蒙脱石的酸性特征,如酸位数量、强度及受热变化特征等结果相差较大。其

关键词：蒙脱石固体酸性氨吸附-红外光谱程序升温脱附法

柔嫩艾美球虫杨凌株表面抗原SAG10基因的克隆与原核表达

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中国兽医科学 2007年第9期37卷 751-755页

作者：麦博覃宗华于三科余劲术吕敏娜吴彩艳林青蔡建平西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

从柔嫩艾美球虫第二代裂殖子总RNA中扩增EtSAG10基因,与pGEM-T Easy载体连接后转化大肠杆菌(***)DH5α,筛选阳性克隆,扩增不含N端信号肽的编码序列,分别插入表达载体pET-32a(+)和pMAL-c2X,转化至***,以IPTG诱导表达。结果表明,pET-32a(+... 详细信息

从柔嫩艾美球虫第二代裂殖子总RNA中扩增EtSAG10基因,与pGEM-T Easy载体连接后转化大肠杆菌(***)DH5α,筛选阳性克隆,扩增不含N端信号肽的编码序列,分别插入表达载体pET-32a(+)和pMAL-c2X,转化至***,以IPTG诱导表达。结果表明,pET-32a(+)-EtSAG10在***中的表达产物约占菌体总蛋白的43%,融合蛋白分子质量约为47 ku,以包涵体形式存在;而pMAL-c2X-EtSAG10在***中表达的重组蛋白为可溶性,表达产物约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白分子质量约为69 ku。以表达的可溶性EtSAG10重组蛋白100μg/只肌肉注射免疫雏鸡,攻虫后以盲肠病变计分、盲肠卵囊数(OPG)、相对增重率和抗球虫指数(ACI)评价,免疫组相对盲肠卵囊产量为47.7%,抗球虫指数由86.79提高至152.13。提示,重组表达的EtSAG10可诱导雏鸡产生一定的抗球虫免疫保护。

关键词：柔嫩艾美球虫表面抗原10 基因克隆表达免疫

鸡艾美耳球虫抗原基因在减毒沙门氏菌的共表达及免疫效果研究

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鸡艾美耳球虫抗原基因在减毒沙门氏菌的共表达及免疫效果研究

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：覃宗华蔡建平谢明权叶秀华王佩瑶陈闻广东省农科院兽医研究所

本研究以孢子化卵囊的总RNA 为模板,用RT-PCR 方法克隆获得了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株子孢子微线蛋白-2基因(EnMIC2)和堆型艾美耳球虫(***)广东株子孢子表面抗原基因cSZI 的cDNA.再以PCR 方法扩增获得该二基因的开放读框... 详细信息

本研究以孢子化卵囊的总RNA 为模板,用RT-PCR 方法克隆获得了毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株子孢子微线蛋白-2基因(EnMIC2)和堆型艾美耳球虫(***)广东株子孢子表面抗原基因cSZI 的cDNA.再以PCR 方法扩增获得该二基因的开放读框(ORF)后,克隆至减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium),构建了EnMIC2、cSZ1 及二基因共表达的重组减毒***,经IPTG 诱导获得了重组抗原的高效表达,SDS-PAGE 分析表明,表达产物分别占茵体总蛋白的8.6%、9.20%和8.3%.将重组减毒*** 经口免疫雏鸡后,能诱导产生抗鸡球虫重组抗原的特异性IgG 和IgA.免疫后3周试验鸡以同源*** 和Eacervulina 攻击,可同时获得部分保护,表现为卵囊产量明显减少。

关键词：毒害艾美耳球虫堆型艾美耳球虫微线蛋白-2 cSZ1 减毒鼠伤寒沙门氏菌共表达免疫保护

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鸡白细胞介素-17基因的克隆和序列分析

中国兽医科技 2005年第8期35卷 643-647页

作者：覃宗华蔡建平叶秀华王佩瑶陈闻吕敏娜温列娜谢明权广东省农业科学院兽医研究所广东省畜禽疫病防治重点实验室广东广州510640

根据GenBank中收录的鸡白细胞介素-17(ChIL-17)基因的cDNA序列设计了1对特异性引物,以经ConA刺激3h的鸡脾淋巴细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法成功克隆了ChIL-17的cDNA.该cDNA全长725bp,其中第2～508位是该基因的阅读框(ORF),共编码169个... 详细信息

根据GenBank中收录的鸡白细胞介素-17(ChIL-17)基因的cDNA序列设计了1对特异性引物,以经ConA刺激3h的鸡脾淋巴细胞总RNA为模板,用RT-PCR方法成功克隆了ChIL-17的cDNA.该cDNA全长725bp,其中第2～508位是该基因的阅读框(ORF),共编码169个氨基酸.与已报道的序列相比较,二者核苷酸序列的同源性为99.6%(722/725),共有3个碱基发生变异,其中有2个变异位于阅读框之内.DNAssit软件分析表明,二者推导的氨基酸序列同源性为100%.同时,以鸡脾淋巴细胞DNA为模板,用PCR方法首次扩增获得了ChIL-17的基因组DNA序列,经序列分析,其序列全长1934bp,由2个内含子和3个外显子组成,3个外显子分别位于第2～27、569～815和1484～1720bp处.

关键词：白细胞介素-17 鸡克隆序列分析

鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

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鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：蔡建平谢明权卞国志翁亚彪覃宗华叶秀华广东省农业科学院兽医研究所华南农业大学兽医学院

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimerianecatrix 孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2～7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以12x10/鸡的同源孢... 详细信息

给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimerianecatrix 孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2～7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以12x10/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变记分减少率(RLs)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果.结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2～7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%～42.9%提高到73.2%～90.5%,病变记分减少率达50%～74.90%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%～60.2%,表明以一定剂量的*** 孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力:比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×10个子孢子/胚的效果最好.

关键词：鸡毒害艾美耳球虫鸡胚免疫

不同后处理条件对St?ber二氧化硅样品表面基团的影响规律

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中国粉体技术 2018年第5期24卷 66-71页

作者：李姗姗万泉覃宗华傅宇虹谷渊涛贵州师范大学化学与材料科学学院贵州贵阳550001 中国科学院地球化学研究所矿床地球化学国家重点实验室贵州贵阳550081 中国科学院大学地球科学学院北京100049

选择经典的St?ber二氧化硅为代表性样品,采用热红联用技术(TG-DSC-FTIR)分析不同溶剂洗涤(水和乙醇)、不同温度干燥的St?ber二氧化硅样品,探讨表面羟基、乙氧基随后处理条件的变化规律。结果表明:水洗能水解表面的乙氧基而形成羟基,乙... 详细信息

选择经典的St?ber二氧化硅为代表性样品,采用热红联用技术(TG-DSC-FTIR)分析不同溶剂洗涤(水和乙醇)、不同温度干燥的St?ber二氧化硅样品,探讨表面羟基、乙氧基随后处理条件的变化规律。结果表明:水洗能水解表面的乙氧基而形成羟基,乙醇洗涤通过酯化作用使表面羟基转化为乙氧基;NH_3对St?ber二氧化硅孔内外乙醇与羟基的酯化过程具有显著的催化作用,NH_3存在时在50℃较低温度下干燥也能促进乙氧基的形成。

关键词： Stober二氧化硅后处理酯化