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受褐飞虱取食的水稻幼苗的抑制消减cDNA文库的构建及筛选

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广西植物 2005年第3期25卷 237-240,i006页

作者：何青袁红雨武汉大学生命科学学院植物发育生物学教育部重点实验室湖北武汉430072

采用抑制消减杂交方法,以褐飞虱取食32h的水稻幼苗及未受褐飞虱取食的水稻幼苗为作为对比材料构建了消减cDNA文库,以分离水稻幼苗中褐飞虱应答基因。随机从消减cDNA文库中挑选16个白色菌落提取质粒,进行PCR扩增,发现插入片段的长度位于... 详细信息

采用抑制消减杂交方法,以褐飞虱取食32h的水稻幼苗及未受褐飞虱取食的水稻幼苗为作为对比材料构建了消减cDNA文库,以分离水稻幼苗中褐飞虱应答基因。随机从消减cDNA文库中挑选16个白色菌落提取质粒,进行PCR扩增,发现插入片段的长度位于100～900bp之间。以在受褐飞虱取食的水稻幼苗中特异表达的基因(BpHi008A)为探针,通过斑点印迹分析发现在抑制消减后的cDNA池中,目的基因得到有效富集。利用反向总RNA斑点印迹分析和Northern杂交验证,从消减cDNA文库中筛选到了25个基因受褐飞虱取食的诱导。其中有17个克隆与编码已知功能蛋白的基因有显著的同源性,它们分别参与蛋白质的折叠与降解、蛋白质与蛋白质的相互作用及信号传递、脂类代谢、胁迫反应、物质运输和细胞生长等。总体上,参与胁迫反应和衰老的基因在褐飞虱取食后表达增强。

关键词：抑制消减杂交褐飞虱水稻

自由基和温度对大麦根尖细胞姊妹染色单体交换的影响

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Acta Botanica Sinica 1993年第1期35卷 20-26页

作者：袁红雨张自立信阳师范学院生物系 464000 南开大学生物系天津300071

研究了抗坏血酸、丝裂霉素C、阿霉素和马来酰肼等药物在大麦(Hordeum vulgare L.)中诱导姊妹染色单体交换(sister chromatid exchange,SCE)频率增高的原因,发现它们在诱导SCE形成的过程中自由基起了重要作用。还研究了温度对细胞平均世... 详细信息

研究了抗坏血酸、丝裂霉素C、阿霉素和马来酰肼等药物在大麦(Hordeum vulgare L.)中诱导姊妹染色单体交换(sister chromatid exchange,SCE)频率增高的原因,发现它们在诱导SCE形成的过程中自由基起了重要作用。还研究了温度对细胞平均世代时间(averagegeneration time,AGT)和SCE的影响。结果表明在20—26℃范围内,随着温度的上升,SCE频率呈线性下降;AGT和SCE频率之间存在着显著的正相关。

关键词：大麦 SCE 游离基温度

利用抑制消减杂交分离受褐飞虱取食下调的水稻基因

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植物生理与分子生物学学报 2004年第3期30卷 305-310页

作者：袁红雨祝莉莉唐明何光存武汉大学生命科学学院植物发育生物学教育部重点实验室武汉430072

为了分离受褐飞虱取食抑制的水稻基因,采用抑制消减杂交的方法,以正常生长的水稻幼苗为目标群体,以褐飞虱胁迫32 h的水稻幼苗作为对照群体,构建了含200个重组质粒的SSH cDNA文库。随机挑选50个重组质粒进行反向Northern差异筛选后,再经N... 详细信息

为了分离受褐飞虱取食抑制的水稻基因,采用抑制消减杂交的方法,以正常生长的水稻幼苗为目标群体,以褐飞虱胁迫32 h的水稻幼苗作为对照群体,构建了含200个重组质粒的SSH cDNA文库。随机挑选50个重组质粒进行反向Northern差异筛选后,再经Northern杂交验证,得到2个受褐飞虱取食抑制的基因:一个是Lhca,编码水稻光系统Ⅰ天线蛋白;另一个基因(BpHd002)与肌苷-5’-单磷酸脱氢酶基因有同源性。以BpHd002为探针筛选水稻幼苗cDNA文库分离出该基因的全长cDNA(BpHd002A)。其长度为1 285bp,含有一由519 bp组成的完整的阅读框,编码的蛋白质具有两个CBS结构域。

关键词：抑制消减杂交褐飞虱水稻肌苷-5’-单磷酸脱氢酶 BpHd002A

甘蓝-白芥单体异附加系自交后代的GISH分析

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信阳师范学院学报（自然科学版） 2007年第2期20卷 183-186,203页

作者：谢素霞袁红雨魏文辉信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000

将甘蓝-白芥单体异附加系自交,获得了其自交后代.利用基因组原位杂交(genomicin situhy-bridization,GISH),结合双色荧光原位杂交(dual-colour fluorescencein situhybridization,dcFISH)技术,从这些自交后代中鉴定出了纯合的甘蓝-白芥二体异附加系植株.GISH分析结果表明,甘蓝-白芥二体异附加系有丝分裂中期具有18条甘蓝染色体及2条白芥染色体,减数分裂中期I表现为9个C染色体二价体及1个S染色体二价体,减数分裂后期I会出现落后的1对S染色体,有时落后的1对S染色体形成染色体桥.

关键词：甘蓝白芥单体异附加系二体异附加系基因组原位杂交

一个新的茶树黄酮醇合酶基因的克隆和表达分析

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植物生理学通讯 2009年第11期45卷 1093-1097页

作者：谢素霞张媛郭凯琳王磊袁红雨信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000

Cs-COR113(GenBank登录号:FE942098)为一受冷诱导的茶树黄酮醇合酶基因的cDNA片段,采用RACE技术克隆了这一基因的全长cDNA,命名为CsFLS(GenBank登录号:FJ577509)。CsFLS cDNA序列全长为1303bp,5'-UTR和3'-UTR分别长91bp和175bp,包含一个编码336个氨基酸的完整开放阅读框。序列分析显示,CsFLS与烟草、矮牵牛、欧芹、拟南芥的黄酮醇合酶的同源性分别为74%、75%、75%和63%,含有2-酮戊二酸依赖性双加氧酶家族2个保守的基序,以及与黄酮醇合酶正确折叠有关的2个保守的甘氨酸残基。CsFLS的表达受低温诱导,但不受ABA诱导。

关键词：茶树黄酮醇合酶基因表达

褐飞虱取食水稻幼苗cDNA文库的构建及筛选

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信阳师范学院学报（自然科学版） 2005年第1期18卷 48-51页

作者：袁红雨祝莉莉何光存信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000 武汉大学生命科学学院湖北武汉430072

以褐飞虱取食 3 2 h的水稻幼苗为材料构建了 c DNA文库 ,初始文库含 3 .2× 1 0 6 个克隆 ,重组率为 86%,取 1 .0× 1 0 6个克隆子扩增一次 ,收集到 80 m L滴度为 1 .2× 1 0 9pfu/ m L的扩增文库 .随机挑取 2 0个克隆以 T7和 M1 3 reve... 详细信息

以褐飞虱取食 3 2 h的水稻幼苗为材料构建了 c DNA文库 ,初始文库含 3 .2× 1 0 6 个克隆 ,重组率为 86%,取 1 .0× 1 0 6个克隆子扩增一次 ,收集到 80 m L滴度为 1 .2× 1 0 9pfu/ m L的扩增文库 .随机挑取 2 0个克隆以 T7和 M1 3 reverse为引物进行 PCR扩增 ,以鉴定插入片段的大小 ,结果发现多数片段的长度在 1～ 4.0Kb左右 ,少数片段在 4Kb以上 ,个别片段在 6Kb左右 .以在受褐飞虱取食的水稻幼苗中特异表达的 ESTBp Hi0 0 8为探针 ,筛选 c DNA文库 ,得到该基因的 c

关键词：全长cDNA文库水稻褐飞虱

一个受褐飞虱取食诱导的水稻GST类似蛋白基因的克隆

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生物工程学报 2005年第4期21卷 646-648页

作者：袁红雨祝莉莉唐明何光存武汉大学生命科学学院武汉大学植物发育生物学教育部重点实验室信阳师范学院生物系信阳464000

BpHi006AcDNA长度为1943bp,具有一个795bp组成的完整的读码框,其表达受褐飞虱取食的诱导。BpHi006A蛋白含有谷胱苷肽S-转移酶(glutathioneS-transferase)的N-末端结构域和C-末端结构域,为谷胱苷肽S-转移酶超家族的成员。BpHi006A蛋白与... 详细信息

BpHi006AcDNA长度为1943bp,具有一个795bp组成的完整的读码框,其表达受褐飞虱取食的诱导。BpHi006A蛋白含有谷胱苷肽S-转移酶(glutathioneS-transferase)的N-末端结构域和C-末端结构域,为谷胱苷肽S-转移酶超家族的成员。BpHi006A蛋白与拟南芥四氯氢醌还原性脱卤素酶相关蛋白有61%的一致性,序列分析表明这两种蛋白质构成一类新的植物GST。

关键词： BpHi006A 褐飞虱水稻

基因组探针非试剂盒标记系统中DNaseI用量优化

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信阳师范学院学报（自然科学版） 2006年第3期19卷 294-296页

作者：谢素霞王力军袁红雨魏文辉信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000 中国农业科学院油料作物研究所湖北武汉430062

用10U的DNA Polymerase Ⅰ，一个跨度达百万倍的DNase Ⅰ量，在15℃分别标记了1μg甘蓝型油菜中油821的基因组DNA，发现DNase Ⅰ用量为0．1U时，10min后就可获得较好的探针标记效果．DNase Ⅰ用量为0．01U时，标记2h就显示较深的颜色．... 详细信息

用10U的DNA Polymerase Ⅰ，一个跨度达百万倍的DNase Ⅰ量，在15℃分别标记了1μg甘蓝型油菜中油821的基因组DNA，发现DNase Ⅰ用量为0．1U时，10min后就可获得较好的探针标记效果．DNase Ⅰ用量为0．01U时，标记2h就显示较深的颜色．随着DNase Ⅰ用量的降低，标记时间需要相应地延长．其用量超过1U时，无法获得较好的探针标记效果．综合考虑DNase Ⅰ用量及标记时间，DNase Ⅰ用量为0．01U、标记时间为3～7h获得的标记效果最佳．

关键词：油菜基因组DNA 探针标记 DNase Ⅰ量

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茶树HCT基因的克隆及表达

东北林业大学学报 2013年第6期41卷 19-22,37页

作者：谢素霞程琳曾威张伟袁颖袁红雨信阳师范学院信阳市464000

Cs-EV12(GenBank登录号:GH618817)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树香豆酰辅酶A:莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶的cDNA片段,应用RACE技术克隆了该基因的全长cDNA,命名为CsHCT(GenBank登录号:JQ619537)。CsHCT cDNA序列全长1 653 bp,包含一... 详细信息

Cs-EV12(GenBank登录号:GH618817)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树香豆酰辅酶A:莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶的cDNA片段,应用RACE技术克隆了该基因的全长cDNA,命名为CsHCT(GenBank登录号:JQ619537)。CsHCT cDNA序列全长1 653 bp,包含一个编码447个氨基酸的完整开放阅读框。序列分析显示CsH-CT与毛果杨、烟草、拟南芥的HCT在氨基酸序列上一致性分别为54%、41%和40%,含有植物BAHD酰基转移酶家族活性中心的保守基序,以及与HCT正确折叠有关的DFGWG基序。HCT的表达受假眼小绿叶蝉取食、低温、紫外线和茉莉酮酸甲酯的诱导。

关键词：茶树 HCT 基因表达