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免疫刺激DNA序列与过敏原联用对哮喘小鼠模型气道过敏性炎症的作用

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中华结核和呼吸杂志 2002年第9期25卷 542-545页

作者：金美玲蔡映云袁正宏郑玲洁任涛复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032 复旦大学医学院分子病毒学实验室

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ... 详细信息

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ) 6只和生理盐水 (NS)组 (D组 ) 6只。A、B、C组用OVA致敏及激发。A组和B组根据注射次数再分A1、B11次注射组 (1次腹腔注射ISS DNA 10 0μg或ISS DNA 10 0 μg +OVA 10 μg)和A2 、B2 2次注射组 (2次腹腔注射ISS DNA或ISS DNA +OVA)。各组在第 1次激发后 6周中 ,每周采血 1次测特异性IgE ,最后处死小鼠测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,肺组织病理检查 ,检测脾细胞分泌γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　BALF中嗜酸细胞 (EOS)数A1组为 (2 39± 0 81)× 10 4/ml;A2 组为 (2 .6 2± 0 .77)× 10 4/ml;B1组为 (1.80± 0 .12 )× 10 4/ml;B2 组为 (1.84± 0 .6 7)× 10 4/ml,与C组 [(12 .4 3± 2 .13)× 10 4/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脾细胞分泌的IFN γA1组为 (5 10± 10 2 )pg/ml;A2 组为 (492± 98)pg/ml;B1组为 (5 32± 12 0 )pg/ml;B2组为 (46 9± 132 )pg/ml,与C组 [(194± 80 )pg/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。血清IgE前

关键词：哮喘免疫刺激DNA序列气道过敏性炎症

基因芯片分析干扰素对乙型肝炎病毒转染细胞基因表达的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1053-1060页

作者：熊炜王迅刘晓颖项黎郑玲洁刘江霞袁正宏复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室上海200032

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV... 详细信息

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)的持续性感染是影响人类健康的重大问题 ,而α 干扰素 (IFN α)和γ 干扰素(IFN γ)分别具有抗HBV的作用。为了研究HBV持续存在对IFN效应基因表达的影响 ,将HepG2细胞和来源于HepG2细胞并整合有HBV基因组的HepG2 .2 .15细胞经IFN α或IFN γ处理 6h后 ,用含 14 112个靶基因的人cDNA基因芯片检测了各组基因表达谱的差异。结果证实 ,许多与细胞周期、增殖、凋亡相关的基因及部分EST和功能未知基因受IFN调节 ;IFN诱导后 ,一些与激酶和信号转导、转录调节、抗原递呈和处理相关的基因在两株细胞间表达存在差异 ,提示HBV影响IFN诱导的细胞基因的表达。进一步挑选部分显著差异表达的基因 ,研究其对HBV复制的影响 ,结果发现在两个细胞株中IFN诱导后基因表达差异的双遍在蛋白 (Diubiquitin)和髓样细胞分化蛋白 (MyD88)均可显著降低HBV抗原表达 ,并证实MyD88能抑制HBV复制。这有助于揭示IFN抗病毒效应及HBV持续性感染机制 ,为分子水平寻找新型抗HBV药物的靶点打下基础。

关键词：基因芯片乙型肝炎病毒干扰素细胞基因表达谱

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朊病毒及其相关疾病

国外医学（微生物学分册） 1996年第5期19卷 7-8,27页

作者：袁正宏上海医科大学卫生部医学分子病毒学重点实验室

疯牛病是一种目前在国际上受到特别关注的流行病。业已证实,该病为牛食用含有羊痒疫致病因子的脏器所致。尚未确定其病原体,推测与朊病毒有关。迄今尚无疯牛病传染至人引起克雅病的确切证据。采取适当卫生措施可预防疯牛病的发生。

关键词：朊病毒疯牛病

慢性HCV感染者中分离的不同长度3′UTR-PolyU/UC段对IRES介导的翻译及NS5B合成RNA影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第5期24卷 388-392页

作者：王华叶荣兰水云袁正宏复旦大学上海医学院医学分子病毒学重点实验室上海200032

目的　研究丙型肝炎病毒 3′非编码区 (3′UTR)及不同长度PolyU UC段对内在核糖体进入位点 (IRES)介导翻译的影响以及对NS5B聚合酶合成RNA的影响。方法　通过构建含有HCVIRES、荧光素酶 (fireflyluciferase)报道基因和内含不同长度PolyU... 详细信息

目的　研究丙型肝炎病毒 3′非编码区 (3′UTR)及不同长度PolyU UC段对内在核糖体进入位点 (IRES)介导翻译的影响以及对NS5B聚合酶合成RNA的影响。方法　通过构建含有HCVIRES、荧光素酶 (fireflyluciferase)报道基因和内含不同长度PolyU UC区的 3′UTR序列的系列重组质粒 ,采用体外翻译和细胞转染等方法检测报道基因表达的水平。结果　体外翻译实验和细胞转染实验显示 3′UTR对IRES介导的翻译具有增强作用 ,在体外翻译体系中这种增强作用与PolyU UC区的长度相关 ,而在细胞中则与PolyU UC区的长度无明显相关性 ;3′UTR对共转染的重组NS5B质粒的复制活性具有抑制作用 ,这种抑制作用也与PolyU UC区长度不成正比。结论　HCV 3′UTR与蛋白翻译及RNA合成有关 ,在细胞中并不与PolyU UC区的长度相关。

关键词：慢性HCV感染 3'UTR-PolyU/UC段 IRES介导翻译 RNA NSSB聚合酶丙型肝炎病毒

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CpGDNA预防小鼠哮喘模型的形成

复旦学报（医学版） 2002年第5期29卷 376-378页

作者：金美玲蔡映云袁正宏郑玲洁张伟复旦大学附属中山医院肺科上海200032 复旦大学医学院分子病毒实验室上海200032

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵... 详细信息

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 ,然后生理盐水激发 2次。CpG组在致敏前腹腔注射CpGDNA 10 0 μg/ 10 0 μL ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后 2 4h测外周血OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a,并处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　CpG组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞明显低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;CpG组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度明显高于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组外周血OVA特异性IgE和IgG1均低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组IgG2a较OVA组为高 ,P <0 .0 5。

关键词：含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件变应性哮喘免疫调节

干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈

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临床肝胆病杂志 2019年第6期35卷 1181-1187页

作者：陈捷亮袁正宏复旦大学上海医学院基础医学院教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室

目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈... 详细信息

目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈的关键核心。鉴于cccDNA很难被彻底清除,近年来以cccDNA持续沉默为基础的慢性乙型肝炎功能性治愈已成为临床和基础研究的主要目标。从现有治疗手段对cccDNA的影响切入,介绍当前对cccDNA含量和活性受控因素的认知,探讨cccDNA池难以清除的关键特性环节,在此基础上展望功能性治愈慢性乙型肝炎目标下研究cccDNA的重点。

关键词：乙型肝炎病毒抗病毒药共价闭合环状DNA

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丙型肝炎病毒全长cDNA模板的构建及鉴定

中华实验和临床病毒学杂志 2004年第2期18卷 122-126页

作者：毛红霞胡芸文吴瑛兰水云袁正宏复旦大学上海医学院

目的　构建具有功能的丙型肝炎病毒 (HCV)全长cDNA克隆。方法　应用长模板RT PCR法扩增 1份上海地区HCV感染者血清的RNA(基因型为 1b) ,分段扩增、融合拼接成 9 2kb的基因片段 ,克隆入含有HCV基因两端非编码区序列的载体作为模板。为检... 详细信息

目的　构建具有功能的丙型肝炎病毒 (HCV)全长cDNA克隆。方法　应用长模板RT PCR法扩增 1份上海地区HCV感染者血清的RNA(基因型为 1b) ,分段扩增、融合拼接成 9 2kb的基因片段 ,克隆入含有HCV基因两端非编码区序列的载体作为模板。为检测此过程是否发生对特定变异株的选择 ,分析 4个独立克隆的HVR1序列。对原核细胞中表达的HCV核心蛋白、NS3蛋白酶及解旋酶 ,以蛋白印迹实验确证其免疫反应性。并构建NS3 4A SEAP表达系统检验NS3的蛋白酶活性。结果　获得丙型肝炎病毒全长cDNA模板。不同克隆间HVR1序列存在较大差异 ,提示长模板RT PCR所制备HCVcDNA具有HCV基因准种 (quasispecies)的特性。该模板编码基因在原核细胞内得到高效表达 ,并具有良好的免疫反应性。在NS3 4A SEAP表达系统内 ,NS3可切割、释放其下游的SEAP ,具有蛋白酶活性。结论　本工作为构建全长功能性HCVcDNA模板及感染性克隆奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒全长cDNA 模板鉴定克隆逆转录聚合酶链反应

腺病毒5、7型衣壳嵌合体:纤突置换改变了对受体的嗜性但不影响中和性免疫表位

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国外医学(微生物学分册) 1996年第6期19卷 39-40页

作者：袁正宏

腺病毒可通过其衣壳蛋白与宿主细胞受体的相互作用有效地进入细胞。近年来人们通过深入研究腺病毒进入细胞的机制及感染机体后诱生的免疫应答得知,衣壳蛋白的纤突介导腺病毒与靶细胞的结合,不同血清型的腺病毒与不同细胞的受体结合;机... 详细信息

腺病毒可通过其衣壳蛋白与宿主细胞受体的相互作用有效地进入细胞。近年来人们通过深入研究腺病毒进入细胞的机制及感染机体后诱生的免疫应答得知,衣壳蛋白的纤突介导腺病毒与靶细胞的结合,不同血清型的腺病毒与不同细胞的受体结合;机体感染腺病毒后可产生针对衣壳蛋白各组分,如六邻体、五邻体及纤突的抗体。目前已肯定抗六邻体抗体在中和病毒感染、限制腺病毒载体反复使用中的作用,但对抗纤突抗体的作

关键词：腺病毒载体衣壳蛋白诱生免疫应答嵌合体 NCAT 纤突膜粒受体衣壳

慢性丙型肝炎患者丙型肝炎病毒NS5A区序列与干扰素疗效的关系

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第2期16卷 114-118页

作者：胡芸文吴瑛袁正宏闻玉梅唐美芳蒋伟伦复旦大学医学院分子病毒学实验室上海200032 上海市传染病医院

目的　探讨上海地区丙型肝炎病毒 (HCV) 1b亚型慢性感染者的血清HCV非结构基因5A(NS5A)与干扰素 (IFN)疗效的关系。方法　收集上海地区 2 4例HCV1b慢性感染者在干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本 ,定量检测治疗前血清HCVRNA ,用逆转... 详细信息

目的　探讨上海地区丙型肝炎病毒 (HCV) 1b亚型慢性感染者的血清HCV非结构基因5A(NS5A)与干扰素 (IFN)疗效的关系。方法　收集上海地区 2 4例HCV1b慢性感染者在干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本 ,定量检测治疗前血清HCVRNA ,用逆转录聚合酶链反应方法扩增NS5A的干扰素敏感决定区 (ISDR)基因并进行测序和分析。另扩增干扰素应答类型不同的 3例患者治疗前后共 5株HCV病毒的NS5A全长序列 ,测序后作种系发生树分析及蛋白二级结构预测。结果　治疗前血清HCVRNA的定量结果显示 ,持续应答组的病毒滴度 (平均滴度 4 50× 1 0 4copies ml)明显低于复发组和无应答组 (平均滴度 1 82× 1 0 7copies ml)。 2 4例慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV的ISDR氨基酸序列与抗干扰素的HCV J株比较 ,1 3例为野生型 ,1 1例为中间型 ,无突变型。 6例完全应答者 3例感染的是野生型株 ,另 3例感染的是中间型病毒株。 5株HCV病毒的NS5A全长序列种系发生树显示 ,3种不同应答类型株在种系发生上分属 3个组别 ,无应答株与抗干扰素的HCV J株关系相近被归为 1组。蛋白质二级结构预测显示 ,上述病毒株NS5A蛋白在二级结构方面基本相似 ,仅在 2 2 55～ 2 2 89范围内有明显不同 ,这一区域与PKR结合域部分重叠。结论　HCVNS5A基因?

关键词：丙型肝炎病毒基因结构病毒干扰素α 氨基酸序列