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TOLL样受体在胎盘与胎膜及妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织中的表达研究

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TOLL样受体在胎盘与胎膜及妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织中的表...

作者：袁文常西北大学

学位级别：硕士

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病，在妊娠期，严重影响母胎的健康和生命安全。胎盘是胚胎发育过程中的先天性免疫器官，在抵御外来病原菌入侵中起重要作用;Toll样受体(Toll like receptor TLRs)是近年来发现的一类先天性免疫系... 详细信息

梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病，在妊娠期，严重影响母胎的健康和生命安全。胎盘是胚胎发育过程中的先天性免疫器官，在抵御外来病原菌入侵中起重要作用;Toll样受体(Toll like receptor TLRs)是近年来发现的一类先天性免疫系统中的病原体模式识别受体家族，TLRs能够激活先天性免疫，并参与特异性免疫应答的启动，在抵御病原体感染中起重要作用。目前TLRs在胎盘与胎膜的先天性免疫过程中的作用尚不清楚;并且TLRs在妊娠合并梅毒感染胎盘的免疫过程中的作用如何及梅毒感染对TLRs表达的影响尚无人研究。本文的研究目的为：1)．应用半定量RT-PCR技术在mRNA水平、应用Werstern Blot及免疫组化技术在蛋白质水平上分析TLR2、4基因在人胎盘与胎膜上的表达分布以及表达模式2)．应用半定量RT-PCR技术在mRNA水平及免疫组化技术在蛋白质水平上分析TLR2、4基因在不同孕期胎盘中的动态表达研究;3)．应用半定量RT-PCR技术在mRNA水平及免疫组化技术研究妊娠合并梅毒感染胎盘中梅毒螺旋体对TLR2、4的表达影响实验第一部分：TLRs在胎盘与胎膜中的表达及其在胎盘与胎膜发育过程中的动态表达[方法]取妊娠6-12周(人流)，12-28(中期水囊引产);及足月分娩之胎盘与胎膜样本各5例;应用半定量RT-PCR技术对人胎盘与胎膜组织以及不同孕周胎盘组织上TLR2、4基因的mRNA表达的检测;应用Werstern Blot及免疫组化技术对人胎盘与胎膜组织上TLR2、4基因的蛋白表达的检测。[结果]TLR2和TLR4基因mRNA及蛋白质均在妊娠早中晚期人胎盘与胎膜中表达;免疫组化结果显示TLR2和TLR4在人胎膜中的羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞强表达，在人胎盘合体滋养细胞也有表达;并且在不同孕期，TLR2和TLR4基因的表达具有波动性，在妊娠中期，TLR2和TLR4的表达都显著降低。实验第二部分：TLRs在妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜中的表达分布[方法]取妊娠合并梅毒感染及正常足月分娩之胎盘与胎膜样本各5例;应用半定量RT-PCR技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR2、4基因的mRNA表达的检测;应用免疫组化技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR2、4基因的蛋白表达的检测。[结果]TLR2基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平显著高于正常晚期妊娠胎盘与胎膜。TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平也显著高于正常晚期妊娠胎盘与胎膜。[结论]本文定位了TLR2和TLR4基因在正产晚期人胎盘与胎膜中的表达分布;并且在不同孕期，TLR2和TLR4基因的表达具有波动性。首次发现TLR2和TLR4基因在妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜中高表达。实验结果暗示TLR2和TLR4在妊娠合并梅毒感染胎盘的免疫过程中的可能起重要作用。

关键词： Toll样受体基因表达胎盘胎膜梅毒

基于精细化管理模式下对医学实验室安全管理的探究

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中华临床实验室管理电子杂志 2022年第2期10卷 76-79,106页

作者：陈法江郑楚萍袁文常广州医科大学研究生院广东广州511436 广州医科大学药学院广东广州511436 广州医科大学金域检验学院广东广州510182

医学高等院校实验室是培养医学生创新能力的主要场所,其建设和管理水平是高校科研实力、学科建设实力和人才培养能力的综合体现.将精细化管理模式引用到医学实验室安全管理中,为学生提供一个安全保障的实验环境,才能更有利于实验的顺利... 详细信息

医学高等院校实验室是培养医学生创新能力的主要场所,其建设和管理水平是高校科研实力、学科建设实力和人才培养能力的综合体现.将精细化管理模式引用到医学实验室安全管理中,为学生提供一个安全保障的实验环境,才能更有利于实验的顺利开展和高校对人才的培养.本文主要对医学实验室安全管理存在的主要问题进行剖析,并基于精细化管理模式下通过对强化安全教育管理、保障人员配备、引进现代化管理办法等方面创新实验室安全管理进行阐述,为医学高等院校实验室现代化建设提供基本保障.

关键词：精细化管理模式实验室安全管理

白藜芦醇影响金黄色葡萄球菌生物被膜形成的分子机制

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国际医药卫生导报 2023年第14期29卷 1950-1954页

作者：唐晓华彭琦袁文常广州医科大学金域检验学院广州510180 广州医科大学附属第三医院检验科广州510145

目的研究亚抑菌浓度白藜芦醇对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响及分子机制。方法研究时间为2023年1月至4月。通过微量肉汤稀释法测定白藜芦醇对SYN菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结晶紫法检测生物被膜的形成能力。苯酚浓硫酸法检测亚抑菌... 详细信息

目的研究亚抑菌浓度白藜芦醇对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响及分子机制。方法研究时间为2023年1月至4月。通过微量肉汤稀释法测定白藜芦醇对SYN菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结晶紫法检测生物被膜的形成能力。苯酚浓硫酸法检测亚抑菌浓度白藜芦醇对生物被膜胞外多糖产生的影响。苯酚氯仿抽提法检测亚抑菌浓度白藜芦醇对细胞外DNA(eDNA)释放的影响。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测白藜芦醇对SYN菌株生物被膜形成的调控机制。实验结果采用GraphPad Prism 8.0软件作图及进行统计分析。结果白藜芦醇对SYN菌株的MIC为1024 mg/L。结晶紫染色显示,白藜芦醇可显著增强金黄色葡萄球菌生物被膜的形成,并随药物浓度的升高而增强。亚抑菌浓度白藜芦醇促进金黄色葡萄球菌eDNA的释放,增强生物被膜的形成。实时荧光定量PCR结果显示,白藜芦醇可以下调金黄色葡萄球菌eDNA释放相关基因saeR、saeS、lrgA、nuc的表达。结论亚抑菌浓度白藜芦醇可通过抑制二元调控系统SaeRS降低耐热核酸酶的表达以及降低LrgA的水平,从而增加eDNA的释放,强烈促进金黄色葡萄球菌生物被膜的产生。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜白藜芦醇

一株万古霉素中介耐药溶血葡萄球菌全基因组测序

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中华医院感染学杂志 2022年第14期32卷 2094-2098页

作者：杨壁瑕钟天林舒楠唐晓华吴斌袁文常广州医科大学金域检验学院广东广州510182 广州医科大学附属第三医院检验科广东广州510150 广州市第一人民医院检验科广东广州510180

目的对分离自血液样本的一株万古霉素中介耐药溶血葡萄球菌进行全基因组测序分析,探讨细菌对万古霉素中介耐药的可能机制。方法通过第三代测序技术对一株万古霉素中介耐药溶血葡萄球菌临床分离株SH-1进行全基因组测序分析,进一步运用Bl... 详细信息

目的对分离自血液样本的一株万古霉素中介耐药溶血葡萄球菌进行全基因组测序分析,探讨细菌对万古霉素中介耐药的可能机制。方法通过第三代测序技术对一株万古霉素中介耐药溶血葡萄球菌临床分离株SH-1进行全基因组测序分析,进一步运用Blast对耐药基因和万古霉素耐药相关基因进行分析。VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析SH-1的药物敏感性,E-test法检测SH-1对万古霉素的敏感性。结果溶血葡萄球菌SH-1对青霉素、苯唑西林、替考拉宁等抗菌药物耐药,对万古霉素中介耐药。E-test检测结果显示SH-1对万古霉素最低抑菌浓度(MIC)值为8μg/ml。SH-1全基因组大小为2622719 bp,GC含量有32.85%,含有2556个编码序列,63个tRNA编码基因,以及16个rRNA基因编码的操纵子。SH-1属于ST97型耐甲氧西林溶血葡萄球菌,SH-1中有18个基因发生了突变,其中万古霉素耐药相关二元调控系统WalK(N70K)、WalK(R280Q)发生了点突变。结论通过全基因组测序初步分析了一株溶血葡萄球菌SH-1菌株基因组特征,研究了SH-1基因突变情况,二元调控系统WalK(N70K)、WalK(R280Q)发生了点突变可能是引起SH-1对万古霉素中介耐药的重要原因。

关键词：溶血葡萄球菌耐药基因万古霉素全基因组测序二元调控系统 WalK

Toll样受体4在胎盘和胎膜组织中的表达及其意义

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中华妇产科杂志 2007年第12期42卷 852-853页

作者：刘慧姝袁文常郝荣增广州医学院第三附属医院产科 510150

先天性免疫（innate immunity）是正常胎盘植入以及抵御微生物感染胎盘所必需的，胎盘作为一个特殊的免疫器官在介导母一胎免疫耐受及对外来抗原的入侵的保护性免疫反应方面起着重要的作用。近年的研究表明，Toll样受体（Toll like rece... 详细信息

先天性免疫（innate immunity）是正常胎盘植入以及抵御微生物感染胎盘所必需的，胎盘作为一个特殊的免疫器官在介导母一胎免疫耐受及对外来抗原的入侵的保护性免疫反应方面起着重要的作用。近年的研究表明，Toll样受体（Toll like receptors，TLR）是天然免疫中重要的模式识别受体（pattern recognition receptor），在机体的先天性免疫和获得性免疫中发挥重要作用。TLR4是人类发现的第1个TLR，机体受到病原体感染时，通过TLR4可迅速启动先天性免疫并进一步启动获得性免疫。为更好地了解TLR4在妊娠期的先天性免疫中的可能作用，本研究对正常足月妊娠妇女的胎盘和胎膜组织进行TLR4表达及分布的研究。

关键词： Toll样受体4 胎盘植入胎膜组织先天性免疫保护性免疫反应 TLR4 获得性免疫模式识别受体

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金黄色葡萄球菌基因敲除质粒的构建及应用

中国组织工程研究 2015年第5期19卷 799-804页

作者：卫玮李晓玲袁文常解放军兰州军区乌鲁木齐总医院临床检验诊断中心新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830000

背景:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已经成为全球院内感染的首要致病菌,建立快速简单的基因敲除方法是研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力、耐药性的重要技术。目的:构建适用于金黄色葡萄球菌基因敲除的质粒,用于金葡菌耐药性及毒力的研究。... 详细信息

背景:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已经成为全球院内感染的首要致病菌,建立快速简单的基因敲除方法是研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力、耐药性的重要技术。目的:构建适用于金黄色葡萄球菌基因敲除的质粒,用于金葡菌耐药性及毒力的研究。方法:以p UC19为构建的基本骨架,通过overlap PCR的技术手段,把p CL52.1中p LE194Ts温敏复制子及质粒p HY300PLK中四环素抗性基因片段,通过高保证扩增后,连接入p UC19的Eco RⅠ位点,保留p UC19中所有的多克隆位点,构建大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒,并对金黄色葡萄球菌N315 dap B基因进行敲除,通过多重PCR对基因敲除菌株进行鉴定。结果与结论:成功构建了大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒p YZ1和p YZ8,并用于金葡菌基因的敲除,通过酶切及overlap技术构建了同源重组质粒p YZ-Δdap B,电转入RN4220进行修饰后,再电转入N315,通过温度筛选,获得了dap B基因突变菌株,成功的敲除了dap B基因。提示p YZ1和p YZ8能够成功用于金黄色葡萄球菌耐药菌株基因的敲除,为进一步研究临床金黄色葡萄球菌分离株耐药性及毒力提供了工具。

关键词：实验动物组织工程金黄色葡萄球菌甲氧西林毒力耐药性质粒基因敲除同源重组国家自然科学基金

新疆乌鲁木齐地区皮肤软组织感染社区获得性金黄色葡萄球菌分子分型与耐药性分析

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临床皮肤科杂志 2018年第9期47卷 551-554页

作者：申丽姜南袁文常郑州大学第五附属医院整形美容科河南郑州450052 中国人民解放军乌鲁木齐总医院检验科新疆乌鲁木齐830000

目的:研究新疆乌鲁木齐成年人皮肤软组织感染(skin and soft tissue infections, SSTIs)社区获得性金黄色葡萄球菌(community-acquired staphylococcus aureus,CA-SA,简称金葡菌)的分子流行特征。方法:收集2012年12月—2016年5月分离自成人SSTIs的非重复CA-SA 126株。聚合酶链反应(PCR)鉴定耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)。多位点序列分型(MLST)、金葡菌A蛋白(SPA)和葡萄球菌mec基因盒(SCCmec)分型等方法对菌株进行分型,VITEK-2全自动微生物分析仪进行药敏试验,对其耐药谱情况及临床特点进行分析。结果:126株CA-SA中检出6株MRSA,120株甲氧西林敏感型金葡菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus, MSSA)。主要流行的CA-MRSA为ST59-SCCmecⅣ克隆。主要流行的CA-MSSA有ST22、ST398、ST121、ST5、ST188及ST7共6种克隆,尤其是ST22具有较高的检出率(40%)。药敏试验显示6株MRSA均为多重耐药(multidrug-resistant, MDR)菌株,120株MSSA中有52株为MDR菌株。结论:引起乌鲁木齐地区成人SSTIs的CA-SA主要为MSSA,流行的MRSA以ST59-SCCmecⅣ克隆为主。而MSSA以ST22和ST398等6种克隆为主,MSSA菌株呈现多重耐药趋势。

关键词：皮肤软组织感染社区获得性金黄色葡萄球菌分子分型多重耐药

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桃儿七内生菌及产鬼臼类物质菌株的筛选

西北大学学报（自然科学版） 2008年第3期38卷 431-434页

作者：张琨黄建新曹莉袁文常西北大学生命科学学院陕西西安710069

目的寻找扩大获得鬼臼类物质资源的新途径。方法采用常规无菌方法从桃儿七植株中分离纯化内生菌;利用细菌和真菌的常规鉴定方法对所分离的菌进行鉴定;用薄层层析(TLC)法检测发酵产物。结果分离得到6株细菌,20株真菌,其中4株真菌(Tc,Td,T... 详细信息

目的寻找扩大获得鬼臼类物质资源的新途径。方法采用常规无菌方法从桃儿七植株中分离纯化内生菌;利用细菌和真菌的常规鉴定方法对所分离的菌进行鉴定;用薄层层析(TLC)法检测发酵产物。结果分离得到6株细菌,20株真菌,其中4株真菌(Tc,Td,Te,Mi)可产鬼臼毒素类物质,2株真菌(Mh,Id)可产鬼臼毒素单糖甙。结论桃儿七部分内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力。

关键词：桃儿七内生菌薄层层析鬼臼类物质

HPLC法测定黄芩中2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇的含量

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中国药房 2009年第36期20卷 2840-2841页

作者：伏建峰郑新川王宁史清海冉继华袁文常郑江兰州军区乌鲁木齐总医院全军临床检验诊断中心乌鲁木齐市830000 第三军医大学西南医院综合实验研究中心重庆市400038

目的:建立以高效液相色谱法测定黄芩药材中2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇(THF)含量的方法。方法:色谱柱为ODS C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.1%醋酸-甲醇(80∶20),柱温为35℃,流速为1.0mL·min-1,检测波长为287nm。结果:THF进样量在... 详细信息

目的:建立以高效液相色谱法测定黄芩药材中2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇(THF)含量的方法。方法:色谱柱为ODS C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.1%醋酸-甲醇(80∶20),柱温为35℃,流速为1.0mL·min-1,检测波长为287nm。结果:THF进样量在2～10μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率为99.56%,RSD=1.82%(n=6)。结论:本方法线性、稳定性、重现性及回收率均较为理想,适于黄芩药材的质量控制。

关键词：黄芩 2',5,6',7-四羟基二氢黄酮醇高效液相色谱法含量测定