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携带耐药基因的肠杆菌科细菌对左氧氟沙星防耐药突变浓度的影响研究

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中国抗生素杂志 2021年第10期46卷 945-951页

作者：马攀陈勇川冯伟袁慊贾运涛重庆医科大学药学院重庆400016 陆军军医大学第一附属医院药学部重庆400038 重庆医科大学附属儿童医院药学部/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿科学重庆市重点实验室/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心重庆400014

目的通过测定左氧氟沙星对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)和防耐药突变浓度(MPC),研究携带耐药基因的肠杆菌科细菌对左氧氟沙星MPC的影响。方法采用琼脂二倍稀释法测定左氧氟沙星对76株大肠埃希菌和60株肺炎克雷伯菌的MIC... 详细信息

目的通过测定左氧氟沙星对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)和防耐药突变浓度(MPC),研究携带耐药基因的肠杆菌科细菌对左氧氟沙星MPC的影响。方法采用琼脂二倍稀释法测定左氧氟沙星对76株大肠埃希菌和60株肺炎克雷伯菌的MIC、MPC并计算各自的MIC_(90)、MPC_(90)、SI(MPC/MIC)等值。采用PCR扩增超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和qnr耐药基因,并统计分析产与非产ESBLs和带与不带qnr各组间MIC、MPC的差异。结果左氧氟沙星对大肠埃希菌产ESBLs组和非产ESBLs组的MIC_(90)分别为4和1μg/mL,MPC_(90)分别为10.24和3.2μg/mL。对肺炎克雷伯菌产ESBLs组和非产ESBLs组的MIC_(90)分别是1和0.0625μg/mL,MPC_(90)分别为5.12和1.6μg/mL。左氧氟沙星对大肠埃希菌带qnr基因组和不带qnr基因组的MIC_(90)分别为0.5和1μg/mL,MPC_(90)分别为12.8和4.096μg/mL。对肺炎克雷伯菌带qnr基因组和不带qnr基因组的MIC_(90)均是0.5μg/mL,MPC_(90)分别为6.4和2.56μg/mL。产与非产ESBLs组和带与不带qnr基因组的MIC无统计学差异,但产ESBLs组的MPC明显高于非产组(P<0.001),耐药基因qnr的存在亦显著提高了临床菌株的MPC值(P<0.05)。结论本研究证明临床上产ESBLs和带qnr基因的肠杆菌会增加MPC从而导致细菌耐药。测定致病菌的MPC,尽量延长治疗期间血药浓度高于MPC的时间,则最大程度上抑制了耐药突变株的富集扩增。针对MIC在左氧氟沙星敏感折点以下的产ESBLs和/或带qnr基因的肠杆菌,应结合PK/PD特点和MSW理论优化给药方案从而达到兼顾临床疗效和耐药预防的目的。

关键词：左氧氟沙星大肠埃希菌肺炎克雷伯菌防耐药突变浓度超广谱β-内酰胺酶

莫西沙星纳米药物对耐药铜绿假单胞菌的抑菌活性及其机制

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药学学报 2020年第10期55卷 2460-2465页

作者：王瑜王前梅冯伟袁慊姚璞孙凤军夏培元陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院药学部重庆400038

采用纳米沉淀自组装法制备莫西沙星(MXF)纳米粒,对比研究MXF和载药纳米粒对铜绿假单胞菌的抑菌效果及抗菌机制。考察MXF纳米粒的粒径和电位等理化性质、体外释药特性,以及对正常支气管上皮细胞HBE细胞活性的影响,通过最低抑菌浓度(MIC)... 详细信息

采用纳米沉淀自组装法制备莫西沙星(MXF)纳米粒,对比研究MXF和载药纳米粒对铜绿假单胞菌的抑菌效果及抗菌机制。考察MXF纳米粒的粒径和电位等理化性质、体外释药特性,以及对正常支气管上皮细胞HBE细胞活性的影响,通过最低抑菌浓度(MIC)值测定实验、生物膜形成抑制实验及透射电镜考察其体外抗菌活性并初步探索其抗菌机制。结果表明,该纳米粒的粒径为332.5±2.7 nm,多分散指数(PDI)为0.125±0.053,电位为-24.3±1.7 mV,粒径大小分布均匀,载药量为(6.02±1.27)%,包封率为(16.69±1.17)%,为类球形结构。在磷酸盐缓冲液中,该纳米粒中MXF能够有效快速释放,24 h内释放约70%,72 h内释放量可达87%。同时,与MXF游离药物相比,其MIC值为8μg·mL-1,是MXF溶液的1/2,可显著抑制细菌生物膜的形成,具有较强的抗菌活性,且能靶向至细菌表面发挥药效,提高抗菌效果。本研究中制备的MXF纳米粒的粒径大小分布均匀,具有良好的体外释药性能和抗菌效果,为细菌性肺部感染的治疗及新型抗菌纳米制剂的研发提供了新的研究思路和策略。

关键词：莫西沙星纳米粒铜绿假单胞菌抗菌效果抗菌机制

木犀草素降低大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞感染的作用机制研究

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中国医院药学杂志 2020年第7期40卷 781-785页

作者：黄志勇孙凤军袁慊王瑜熊丽蓉冯伟南部战区海军第一医院脊柱关节科广东湛江524005 陆军军医大学(第三军医大学)西南医院药剂科重庆400038

目的:探讨亚抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,亚-MIC)木犀草素降低临床分离大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞HBE感染的作用机制,为临床抗感染的治疗提供新的思路。方法:采用微量肉汤稀释法检测木犀草素对大肠埃希菌临床株E367... 详细信息

目的:探讨亚抑菌浓度(sub-minimal inhibitory concentration,亚-MIC)木犀草素降低临床分离大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞HBE感染的作用机制,为临床抗感染的治疗提供新的思路。方法:采用微量肉汤稀释法检测木犀草素对大肠埃希菌临床株E367的MIC值,采用多功能酶标仪测定亚-MIC木犀草素对细菌生长的影响,采用CCK-8法测定亚-MIC木犀草素处理大肠埃希菌对HBE细胞毒性的影响,采用ELISA试剂盒测定细胞炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用Western Blot测定p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平。结果:1/4 MIC-1/32 MIC木犀草素对大肠埃希菌的生长没有影响,且能剂量依赖性地降低大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞的毒性。大肠埃希菌感染细胞后其炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α水平和p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平均显著增高。与细菌处理组相比,木犀草素和大肠埃希菌共同处理细胞后其IL-6、TNF-α水平及p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达水平显著降低,而细胞因子IL-8水平几乎不变。结论:木犀草素可能通过免疫调节抑制大肠埃希菌对呼吸道上皮细胞的感染作用。

关键词：木犀草素大肠埃希菌呼吸道上皮细胞亚抑菌浓度细胞毒性

小鼠铜绿假单胞菌气管插管滴注法肺部感染模型的建立及评价

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第三军医大学学报 2019年第10期41卷 918-922页

作者：王瑜张定林冯伟程林袁慊李晓宇孙凤军陆军军医大学(第三军医大学):第一附属医院药学部重庆1400038 陆军军医大学(第三军医大学):基础部化学教研室重庆1400038 解放军980医院邯郸分院药剂科河北邯郸056000

目的建立小鼠铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)肺部感染模型,并对该模型进行初步评价。方法采用一种快速无创的小鼠气管插管滴注法,将小鼠在透射灯照射下经口咽气管插管,滴注1×10~8 CFU/mL的铜绿假单胞菌悬液50μL,待接种感染... 详细信息

目的建立小鼠铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)肺部感染模型,并对该模型进行初步评价。方法采用一种快速无创的小鼠气管插管滴注法,将小鼠在透射灯照射下经口咽气管插管,滴注1×10~8 CFU/mL的铜绿假单胞菌悬液50μL,待接种感染7 d后处死,进行肺部菌落计数和病理学评价。结果经气管接种感染后,与对照组小鼠比较,感染组小鼠生理状态不佳,肺组织匀浆检出PA,血液中白细胞和中性粒细胞数目显著增多(P<0.05),且出现肺部病理学改变,显示有炎症反应;对照组小鼠肺组织匀浆则未见PA生长,且血液中白细胞和中性粒细胞数目正常,未出现炎症反应。结论采用小鼠气管插管滴注法,通过呼吸道感染途径可成功建立小鼠肺部PA感染模型,该模型具有稳定性好,易定量的优点。

关键词：铜绿假单胞菌肺部感染气管插管感染模型

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

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中国抗生素杂志 2020年第5期45卷 477-481页

作者：冯伟欧阳净程林袁慊王瑜孙凤军陆军军医大学(第三军医大学)西南医院药剂科重庆400038 重庆市公共卫生医疗救治中心药剂科重庆400036

目的探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibit... 详细信息

目的探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功,电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性,TaqMan RT-PCR检测可快速准确地为临床治疗提供依据。

关键词： NDM-1 质粒碳青霉烯酶 TaqMan RT-PCR 耐药

自体支气管基底层细胞治疗慢性阻塞性肺疾病的小样本探索性研究

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重庆医学 2019年第23期48卷 4012-4016页

作者：程林袁慊王瑜冯伟孙凤军戴晓天陆军军医大学第一附属医院药学部重庆400038 陆军军医大学第一附属医院呼吸科重庆400038

目的探讨自体支气管基底层细胞治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的疗效和安全性。方法2017年10月至2018年10月,共入组4例COPD患者,从COPD患者的3~5级支气管中获取微量组织分离提取SOX9+支气管基底层细胞,体外扩增后进行自体移植。于细胞移... 详细信息

目的探讨自体支气管基底层细胞治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的疗效和安全性。方法2017年10月至2018年10月,共入组4例COPD患者,从COPD患者的3~5级支气管中获取微量组织分离提取SOX9+支气管基底层细胞,体外扩增后进行自体移植。于细胞移植前和移植后4、12、24、48周,评估患者的肺功能相关指标,包括第1秒用力呼气容积(FEV1)占预计值百分比、用力肺活量(FVC)占预计值百分比、FEV1/FVC、肺总量(TLC)占预计值百分比、残气量(RV)占预计值百分比、RV/TLC、一氧化碳弥散量(DLCO)及DLCO与肺泡通气量(VA)比值(DLCO/VA),6min步行距离及圣乔治呼吸问卷(SGRQ)评分。于基底层细胞移植前和移植后1、3、6个月,监测患者的血常规相关指标、肝肾功能指标和心肌酶谱指标。结果与移植前比较,基底层细胞移植后4、12、24、48周,患者6min步行距离均较移植前有所增加,SGRQ评分较移植前有所降低(P0.05)。细胞移植前和移植后1、3、6个月,患者血常规指标、肝肾功能指标和心肌酶谱指标均在正常值范围内。结论自体支气管基底层细胞移植治疗COPD患者的初步结果是有效和安全的,尚需进一步大样本临床研究。

关键词：基膜支气管肺疾病,慢性阻塞性细胞移植治疗结果