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基于β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶基因工程菌的构建与D-塔格糖的生物合成

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基于β-半乳糖苷酶和L-阿拉伯糖异构酶基因工程菌的构建与D-塔格...

作者：袁娇江苏大学

学位级别：硕士

D-塔格糖(D-tagatose)是一种天然存在的低热量甜味剂,具有改善肠道菌群、降低血糖、预防结肠癌和抗龋齿等功效,被广泛的应用于食品和医药领域。目前D-塔格糖的产量较低,难以满足日益增长的需求。化学法生产D-塔格糖具有污染大、成本高... 详细信息

D-塔格糖(D-tagatose)是一种天然存在的低热量甜味剂,具有改善肠道菌群、降低血糖、预防结肠癌和抗龋齿等功效,被广泛的应用于食品和医药领域。目前D-塔格糖的产量较低,难以满足日益增长的需求。化学法生产D-塔格糖具有污染大、成本高和纯化复杂等缺点,因而绿色环保的生物法生产D-塔格糖成了当前研究的热门领域。生物法的原理是利用L-阿拉伯糖异构酶(L-arabinose isomerase,L-AI)异构化D-半乳糖生成D-塔格糖,D-半乳糖又可以通过β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-GAL)水解乳清中的乳糖获得。乳清是一种廉价的乳制品工业副产物,其中乳糖的含量约为70%-80%。尽管当前已经有利用酶法转化乳清生产D-塔格糖的研究报道,但受限于酶学性质的不适和相对高昂的纯酶制备成本等因素,难以实现商业化。因此本研究致力于开发新来源的L-AI和β-GAL,构建相应工程菌并研究其酶学性质,最后制备工程菌静息细胞,来实现乳清粉到D-塔格糖的高效转化。主要的研究内容和结果有以下几个方面:(1)从Lactobacillus reuteri ATCC 53608中克隆得到β-GAL(LRGAL)的编码基因lac LM,大小为2830 bp,构建重组菌E.coli BL21/p ANY1-lac LM,通过IPTG诱导成功表达LRGAL,SDS-PAGE显示有两条大小分别为73 k Da和35k Da蛋白条带,比活力为25.63 U/mg。LRGAL的最适温度为50℃,最适p H为6.5,最适金属离子为Ca和Mn,以2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(o NPG)为底物时,LRGAL的V、K和K/K分别为2.19 m M,21.68 U/mg和9.3 m Mmin。制备重组菌静息细胞,利用单因素变量法探索其水解乳糖的最优条件:最适温度50℃,最适p H为6.5,最适细胞浓度40 g/L,最适反应时间为40 h,且无明显的底物抑制或产物抑制。(2)从Lactobacillus parabuchneri CICC 6004中克隆得到L-AI(LPAI)的编码基因ara A,大小为1425 bp,构建重组菌E.coli BL21/p ANY1-ara A,通过IPTG诱导成功表达LPAI,SDS-PAGE显示其蛋白条带大小为55 k Da,比活力为15.52U/mg。LPAI的最适温度为45℃,最适p H为6.7,最适金属离子为3 m M的Ca,以L-阿拉伯糖和D-半乳糖为底物时,LPAI的K、V和K/K分别为4.3 m M,63.1 U/mg,5.9 m Mmin和5.4 m M,35.5 U/mg,2.8 m Mmin。制备重组菌静息细胞,利用单因素优化法探索其转化D-半乳糖生产D-塔格糖的最优条件:最适温度45℃,最适p H为6.7,最适细胞浓度30 g/L,最适底物浓度为140 g/L,最适反应时间为50 h。(3)分别制备E.coli BL21/p ANY1-lac LM和E.coli BL21/p ANY1-ara A静息细胞,通过单因素优化法研究得到利用乳清粉生产D-塔格糖的最适条件:最适温度45℃,最适p H为6.5,最适E.coli BL21/p ANY1-lac LM和E.coli BL21/p ANY1-ara A细胞质量比为1,最适细胞浓度和为50 g/L,最适底物浓度120 g/L,最适反应时间50 h。利用以上条件进行第一阶段反应,得到的D-塔格糖产量为25.3g/L,乳糖到D-塔格糖的转化率为21.1%。以第一阶段的产物作为底物在相同条件下继续第二阶段的反应,结果显示D-塔格糖浓度从25.3 g/L增加到37.8 g/L,转化率提高到31.5%。

关键词：乳清 D-塔格糖 β-半乳糖苷酶 L-阿拉伯糖异构酶静息细胞转化

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PPP模式的税收政策与管理

税务研究 2016年第9期 3-9页

作者：马蔡琛袁娇南开大学经济学院

税收政策对于PPP这一新兴业态的发展具有重要影响,税收优惠政策已成为各国吸引民间资本参与PPP项目的重要激励措施。就国际经验而言,税收优惠政策更多体现在企业所得税减免、投资抵免、加速折旧等直接税层面,较少涉及增值税、印花税等... 详细信息

税收政策对于PPP这一新兴业态的发展具有重要影响,税收优惠政策已成为各国吸引民间资本参与PPP项目的重要激励措施。就国际经验而言,税收优惠政策更多体现在企业所得税减免、投资抵免、加速折旧等直接税层面,较少涉及增值税、印花税等间接税。我国以流转税为主体的现行税制,如何适应"后工业革命"时代PPP事业发展的需要;在PPP项目生命周期的漫长性与中国税制安排的变动性之间,如何妥善处理相关风险分担;地方自助税收支持政策与央地税权划分的矛盾,如何加以妥善解决。这些都是PPP相关税收政策完善中需要应对的挑战。

关键词： PPP模式税收政策税收优惠重复征税

基于北斗三号卫星导航系统的无人机导航通信终端关键技术研究

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基于北斗三号卫星导航系统的无人机导航通信终端关键技术研究

第十三届中国卫星导航年会

作者：石善斌李惠琴袁娇北京跟踪与通信技术研究所天津航天中为数据系统科技有限公司

随着无人机在测绘、遥感、电力巡检及灾害监控等领域的大规模应用,传统的基于地面无线电台的信息回传及监控手段面临着覆盖范围不足的,无法实现超视距外无人机监管。针对上述问题,本文提出了一种基于北斗三号卫星导航系统的一体化导航... 详细信息

随着无人机在测绘、遥感、电力巡检及灾害监控等领域的大规模应用,传统的基于地面无线电台的信息回传及监控手段面临着覆盖范围不足的,无法实现超视距外无人机监管。针对上述问题,本文提出了一种基于北斗三号卫星导航系统的一体化导航通信终端用于无人机远程监控与安保,并针对一体化导航通信终端设计过程中发射链路与接收链路间的干扰抑制、高动态场景下多普勒补偿及多天线分集接收等关键技术进行了研究论证,为一体化导航通信终端的研制提供支撑。

关键词：一体化导航通信多普勒补偿多天线分集接收

来源： cnki会议评论

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中期预算改革的国际经验与中国现实

经济纵横 2016年第4期 114-120页

作者：马蔡琛袁娇南开大学经济学院天津300071

中期预算体现了当代预算管理改革的潮流。综合各国施行中期预算的经验与教训,我国应循序渐进地推进中期预算改革。实行"自上而下"为主、"自下而上"为辅的集中型预算模式;扩大中期支出的覆盖范围,适当延长预算编制时间;加强中期财政规划... 详细信息

中期预算体现了当代预算管理改革的潮流。综合各国施行中期预算的经验与教训,我国应循序渐进地推进中期预算改革。实行"自上而下"为主、"自下而上"为辅的集中型预算模式;扩大中期支出的覆盖范围,适当延长预算编制时间;加强中期财政规划与经济社会发展规划的衔接,提高中期收支预测的准确性;推进各利益相关主体的协调配合。

关键词：中期预算中期财政规划政府预算改革跨年度预算平衡机制

性别文化对少数民族传统体育的建构与重塑——以湖北土家族“撒尔嗬”为例

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广西民族大学学报（哲学社会科学版） 2020年第6期42卷 74-82页

作者：袁娇熊欢中央民族大学民族学与社会学学院北京100081 华南师范大学体育科学学院广东广州510006

立足于女性主义,通过实地调研和文献资料,分析了"撒尔嗬"发展历程中性别文化对其的历史建构与现代重塑。研究发现,性别文化随社会的发展变化而变化,相应的,"撒尔嗬"也随性别文化的发展变化而变化,在传统的性别文化建构下,"撒尔嗬"出现... 详细信息

立足于女性主义,通过实地调研和文献资料,分析了"撒尔嗬"发展历程中性别文化对其的历史建构与现代重塑。研究发现,性别文化随社会的发展变化而变化,相应的,"撒尔嗬"也随性别文化的发展变化而变化,在传统的性别文化建构下,"撒尔嗬"出现性别隔离,女性作为局外人被排除在外。现在在平等的性别文化建设下,"撒尔嗬"中的性别隔离被打破,女性可以获得和男性平等的参与权利,"撒尔嗬"得以重塑,重塑后的发展不仅是对少数民族传统身体活动传承的另一种思考,更是对女性有着重要的意义。

关键词：性别文化土家族传统体育撒尔嗬

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中国税制改革四十年回溯与发展趋向

经济纵横 2018年第6期 60-70页

作者：王敏袁娇云南财经大学财政与公共管理学院云南昆明650221

改革开放以来,我国税制改革的演化历程可划分为税制改革的酝酿、兴起、深化和新征程四个阶段,在政府主导下由内外需求倒逼税制改革,在"渐进式"改革过程中实现税制革新,在制度模仿中形成突破性的改革路径。经过四十年的变迁,我国税收制... 详细信息

改革开放以来,我国税制改革的演化历程可划分为税制改革的酝酿、兴起、深化和新征程四个阶段,在政府主导下由内外需求倒逼税制改革,在"渐进式"改革过程中实现税制革新,在制度模仿中形成突破性的改革路径。经过四十年的变迁,我国税收制度已适应中国特色社会主义市场经济体制的需要,并逐渐向匹配国家治理现代化的方向转变。未来建立完善的现代税收制度,还应进一步强化税务管控,完善税收结构,强化税收法治。

关键词：改革开放四十年税制改革现代税制税收治理

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“孵出”乡村振兴新希望 006

“孵出”乡村振兴新希望

区域税收与税源的非对称性:影响机制与现实路径选择

曲靖日报

作者：张政伟王曙袁娇

寒冬腊月，在富源县后所镇的农业产业孵化园内，一串串新鲜的葡萄挂满枝头，工作人员正在给葡萄剔叶、剪枝，眼看葡萄即将成熟，葡萄园负责人脸上露出开心的笑容。“后所的气候好，交通便利，我们在这里种植优质‘玉隆玫瑰’葡萄，这个... 详细信息

寒冬腊月，在富源县后所镇的农业产业孵化园内，一串串新鲜的葡萄挂满枝头，工作人员正在给葡萄剔叶、剪枝，眼看葡萄即将成熟，葡萄园负责人脸上露出开心的笑容。“后所的气候好，交通便利，我们在这里种植优质‘玉隆玫瑰’葡萄，这个品种在这里可以实现一年两次挂果，并?

关键词：土地流转产业孵化后所镇入园企业葡萄园

来源： cnki报纸评论

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税务研究 2017年第5期 59-63页

作者：王敏袁娇云南财经大学财政与经济学院南开大学经济学院

在营改增全面铺开的背景下,我国区域税收与税源非对称现象日渐突出。对此,本文从以下几个纬度加以谋划:实行个性化财政分配方式,纵向转移支付与横向转移支付同时并举;建立地方政府间横向税收补偿机制,调整现行税收分享办法;构建跨区域... 详细信息

在营改增全面铺开的背景下,我国区域税收与税源非对称现象日渐突出。对此,本文从以下几个纬度加以谋划:实行个性化财政分配方式,纵向转移支付与横向转移支付同时并举;建立地方政府间横向税收补偿机制,调整现行税收分享办法;构建跨区域税源监控网络,谨慎权衡取舍区域税收优惠政策,引导经济主体形成合理预期;发展资源性产业经济,将资源优势转化为税收优势和经济优势,对跨区域"产业链"整合要慎重。

关键词：税收税源非对称性营改增税收竞争税收转移

产前和产时高危因素分层评分对新生儿复苏呼吸支持的预测价值

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中国妇幼保健 2023年第15期38卷 2759-2763页

作者：袁娇张晶顾洁银川市妇幼保健院宁夏银川750001

目的分析产前和产时高危因素分层评分对新生儿复苏呼吸支持的预测价值。方法选取2021年1月—2022年3月在银川市妇幼保健院产科病房分娩的2 035例新生儿为研究对象,按照是否需要呼吸支持,分为呼吸支持组(186例)和对照组(1 849例),收集... 详细信息

目的分析产前和产时高危因素分层评分对新生儿复苏呼吸支持的预测价值。方法选取2021年1月—2022年3月在银川市妇幼保健院产科病房分娩的2 035例新生儿为研究对象,按照是否需要呼吸支持,分为呼吸支持组(186例)和对照组(1 849例),收集产前和产时高危因素,分析高危因素分层评分预测新生儿呼吸支持的灵敏度与特异度。结果足月选择性剖宫产,足月试产失败的紧急剖宫产,脐带脱垂、前置胎盘或胎盘早剥,胎儿心率异常,<34周正常分娩,<37周选择性或紧急剖宫产,胎儿有使用胎吸或产钳的指征是新生儿产时高危因素(均P<0.05)。<35周多胎妊娠是新生儿产前高危因素(χ^(2)=4.882,P<0.05)。呼吸支持组新生儿产前和产时高危因素分层评分为(3.61±1.54)分,对照组新生儿产前和产时高危因素分层评分为(1.97±1.12)分,差异有统计学意义(t=-18.150,P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示:产前和产时高危因素分层评分可以作为预测新生儿是否需要呼吸支持的指标[曲线下面积(AUC)=0.814,P<0.05,95%CI:0.783~0.845]。根据约登指数判断高危因素分层评分的临界值为3分,灵敏度为79.01%,特异度为76.53%。结论产前和产时高危因素分层评分可以作为预测新生儿复苏是否需要呼吸支持的指标。

关键词：高危因素新生儿复苏高危因素分层评分