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猪δ冠状病毒N蛋白的可溶性表达与生物学活性分析

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中国动物传染病学报 2023年

作者：庞俊增袁嘉康李林岳秦保亮李任峰赵晓会王自良河南科技学院动物科技学院河南省高校动物疫病防控创新团队新乡市动物疫病预防控制中心新乡医学院三全学院

本研究采用RT-PCR扩增猪δ冠状病毒（PDCoV）的核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N）基因，构建原核表达质粒pET-32a-N，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，通过Ni-NTA亲和层析对表达蛋白进行纯化，将纯化后的重组蛋白免... 详细信息

本研究采用RT-PCR扩增猪δ冠状病毒（PDCoV）的核衣壳蛋白（Nucleocapsid，N）基因，构建原核表达质粒pET-32a-N，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，通过Ni-NTA亲和层析对表达蛋白进行纯化，将纯化后的重组蛋白免疫小鼠，以PDCoV病毒包被酶标板，采用ELISA方法检测小鼠血清抗体，评价重组蛋白的免疫原性。结果显示，PDCoV重组N蛋白（～58 kDa）在0.2 mmol/L IPTG、20℃条件下诱导12 h表达效果最好，且以可溶性形式存在；表达蛋白经Ni柱纯化后能与抗PDCoV阳性血清发生特异性免疫印迹反应，且能够诱导小鼠产生抗PDCoV特异性抗体，具有良好的免疫原性和反应原性。本研究为下一步建立PDCoV检测方法和开展PDCoV N蛋白功能研究奠定了基础。

关键词：猪δ冠状病毒 N蛋白可溶性表达生物学活性

基于环介导等温扩增的微流控芯片检测技术研究进展

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中国生物工程杂志 2023年第10期43卷 52-61页

作者：李林岳袁嘉康李任峰庞俊增秦保亮周艳琳王自良河南科技学院动物科技学院河南省高校动物疫病防控创新团队新乡453003 新乡市动物疫病预防控制中心新乡453003 新乡医学院三全学院新乡453003

基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的微流控芯片是一种新型核酸检测方法。该方法能够将核酸提取、等温扩增和反应结果集成在厘米级的芯片上,具有灵敏度高、特异性强、不易污染等特点,并且可以实现“样品... 详细信息

基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的微流控芯片是一种新型核酸检测方法。该方法能够将核酸提取、等温扩增和反应结果集成在厘米级的芯片上,具有灵敏度高、特异性强、不易污染等特点,并且可以实现“样品-答案”的快速检测,已成为当前检测领域的研究热点。综述LAMP的反应原理、微流控芯片的种类、LAMP微流控芯片在病原微生物和肿瘤检测中的应用,并分析LAMP微流控芯片目前存在的问题及未来发展前景,以进一步拓展对新型检测技术的认识,加快其在现场快速检测中的推广和应用。

关键词：环介导等温扩增微流控芯片病原检测

猪流行性腹泻病毒RPA-LFD检测方法的建立

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中国兽医学报 2023年第6期43卷 1127-1132页

作者：袁嘉康李林岳庞俊增范国英姜金庆王自良李任峰河南科技学院动物科技学院河南新乡453003

将重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与侧流层析试纸(lateral flow dipstick,LFD)技术相结合,根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)M基因保守序列设计特异性引物,上、下游引物的5′端分别进行6-羧基荧光素(FAM)和生物素(biotin)标记,通过优化RPA反应温度和时间条件,建立基于RPA-LFD的PEDV快速检测方法,并对该方法的灵敏性、特异性和临床应用进行评价。结果显示,该方法在40.8℃恒温反应21 min即可完成对PEDV核酸的扩增,RPA-LFD的最低检测限为1.27×10^(2)拷贝/μL,且与猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应;22份临床样本检测结果显示RPA-LFD与RT-PCR检测结果完全一致。结果表明,本试验建立的PEDV RPA-LFD检测方法具有操作方便、检测速度快、灵敏度高、特异性强等优点,为PEDV的现场快速检测和流行病学调查提供了新的技术手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒重组酶聚合酶等温扩增侧流层析试纸 M基因

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纸基微流控芯片研究进展

中国兽医学报 2024年第6期44卷 1342-1348页

作者：袁嘉康曹文艳周艳琳游永鹤李任峰王自良河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 新乡医学院三全学院河南新乡453003

纸基微流控芯片又称纸芯片,它是以纸作为芯片基材建立的一种分析检测技术。与其他微流控芯片相比,纸芯片具有原料易得、制作成本低、使用后易处理以及操作简便等优点,更适用于现场快速检测。本文系统总结了纸芯片的制作方法及其在动物... 详细信息

纸基微流控芯片又称纸芯片,它是以纸作为芯片基材建立的一种分析检测技术。与其他微流控芯片相比,纸芯片具有原料易得、制作成本低、使用后易处理以及操作简便等优点,更适用于现场快速检测。本文系统总结了纸芯片的制作方法及其在动物病原检测方面的研究进展,并分析了当前纸芯片技术存在的问题,展望了未来研究方向,为纸芯片技术的改进和推动其普及应用提供参考。

关键词：纸基微流控芯片制作技术病原检测

胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展

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饲料工业 2024年第5期45卷 134-140页

作者：闫海兴袁子钦袁嘉康李梦迪张超伟侯洁覃婷王自良河南科技学院动物科技学院河南新乡453003

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗... 详细信息

胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。

关键词：胶体金免疫层析试纸条生物毒素快速检测灵敏准确

猪流行性腹泻病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2023年第8期45卷 814-821,828页

作者：李林岳李任峰袁嘉康秦保亮庞俊增蔡琳琳赵晓会范国英王自良河南科技学院动物科技学院河南省高校动物疫病防控创新团队河南新乡453003 新乡市动物疫病预防控制中心河南新乡453003 新乡医学院三全学院河南新乡453003

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳... 详细信息

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳结果筛选最佳引物组。以筛选的外引物PE2 F3/B3经PCR从PEDV cDNA中扩增ORF1a/b基因,构建重组质粒pPE-ORF1-2并分别经PCR和测序鉴定。结果显示,2号引物组(内引物PE2 FIP/PE2 BIP,外引物PE2 F3/PE2 B3)为最佳引物。PCR和测序鉴定结果表明重组质粒正确构建,经计算其浓度为1.56×1011拷贝/μL,将其稀释1000倍后作为质粒标准品。为建立检测PEDV的RT-LAMP方法,本研究对该方法的反应时间、反应温度、Mg2+浓度、内、外引物及dNTP浓度进行了优化,结果显示,RT-LAMP反应体系为:60℃反应50 min,Mg2+浓度80 mmol/L,内外引物终浓度分别为32μmol/L和5μmol/L,dNTP浓度10 mmol/L;通过在上述体系中加入甲酚红指示剂,初步建立了可视化RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能检出PEDV,与猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应,且阳性管体系颜色由紫红色变为黄色,阴性反应管体系颜色保持紫红色,特异性较强;将重组质粒标准品pPE-ORF1-210倍倍比稀释(1.65×100拷贝/μL~1.65×108拷贝/μL)后作为模板,采用本研究建立的可视化RT-LAMP方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对pPE-ORF1-2检测限为10拷贝/μL,比以重组质粒pPE-M-GB为模板,以引物PEGBF/PEGBR的PEDV国标RT-PCR方法的敏感性高1个数量级,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法对不同浓度质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,重复性较好。对53份临床样品检测结果显示,RT-LAMP和RT-PCR对PEDV的检出率分别为32.1%(17/53)和28.3%(15/53)。二者的总符合率为96.2%(51/53)。本研究建立的PEDV RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便、结果可视化等优点,为PEDV的现场快速检测提供了新的技术支持。

关键词：猪流行性腹泻病毒 RT-LAMP 快速检测可视化

深刻把握新质生产力的整体机理：一个探索性的分析理路

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求实 2025年第01期 16-31+109-110页

作者：郑志康山东大学马克思主义学院

新质生产力的当代出场，源自“源”与“流”一脉相承的理论支撑、“内”与“外”良性互动的实践奠基、“时”与“势”有机结合的现实催化，是理论逻辑、实践逻辑和现实逻辑共同交织的结果。作为守正创新历史唯物主义的最新理论成果，新... 详细信息

新质生产力的当代出场，源自“源”与“流”一脉相承的理论支撑、“内”与“外”良性互动的实践奠基、“时”与“势”有机结合的现实催化，是理论逻辑、实践逻辑和现实逻辑共同交织的结果。作为守正创新历史唯物主义的最新理论成果，新质生产力的核心点在“新”，关键点在“质”，落脚点在“生产力”，突破点在“因地制宜”，着力点在“全面深化改革”。新质生产力的提出不仅开辟了马克思主义生产力理论发展的“新境界”，为习近平经济思想增添了“新内容”，构成中国特色政治经济学话语体系的“新标识”，而且，提供了新时代进一步解放和发展生产力的“新方案”、推动经济高质量发展的“新指南”和应对世界经济发展困局的“新智慧”。

关键词：新质生产力马克思主义生产力理论中国共产党习近平经济思想历史唯物主义全面深化改革

政府创新补贴与数字企业创新——基于企业生命周期视角

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企业经济 2025年 110-119页

作者：蔡乌赶邓志康福州大学经济与管理学院

探讨政府创新补贴能否激励数字企业创新是数字经济发展背景下的重要命题。本文基于企业生命周期视角构建数字企业演化博弈模型，并进一步实证检验政府创新补贴与市场竞争对数字企业创新的影响。研究表明：政府创新补贴可以显著激励数字... 详细信息

探讨政府创新补贴能否激励数字企业创新是数字经济发展背景下的重要命题。本文基于企业生命周期视角构建数字企业演化博弈模型，并进一步实证检验政府创新补贴与市场竞争对数字企业创新的影响。研究表明：政府创新补贴可以显著激励数字企业创新；政府创新补贴激励效果存在生命周期异质性且对成长期数字企业的效果更不稳定；市场竞争会削弱政府创新补贴的激励效果且对成长期数字企业的作用更加明显；政府创新补贴可以激励成熟期数字企业进行实质创新，但对成长期数字企业的激励作用并不明显。因此，政府应持续加大对数字企业的创新补贴，实行“因企制宜”的差异化补贴制度，并依据数字企业竞争行为动态调整补贴资源，多方位监督政府创新补贴成效。

关键词：政府创新补贴数字企业创新演化博弈企业生命周期

构建未来职业教育体系：OECD国家的推进逻辑、现实困境和改革经验

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职业技术教育 2025年第1期 72-79页

作者：陆维康浙江大学公共管理学院、中国科教战略研究院

劳动力市场的深刻变化，导致职业教育改革势在必行。OECD国家在构建未来职业教育体系过程中遵循三大推进逻辑：适应数字化和绿色化社会；提高响应市场的敏捷度；增强职业教育的包容性。在这样的逻辑指导下，OECD国家职业教育着重解决如... 详细信息

劳动力市场的深刻变化，导致职业教育改革势在必行。OECD国家在构建未来职业教育体系过程中遵循三大推进逻辑：适应数字化和绿色化社会；提高响应市场的敏捷度；增强职业教育的包容性。在这样的逻辑指导下，OECD国家职业教育着重解决如何促进社会参与、如何拓宽参与人员、如何强化过渡功能以及如何使用数字技术这四大难题。各国纷纷采取改革措施，构建面向未来的职业教育体系：政府引领，促进职业教育与社会合作；精准设计，建立灵活便捷的教育项目；上下联通，强化不同类型教育衔接；提供保障，鼓励创新使用数字化技术。

关键词：未来职业教育体系数字化绿色转型