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谷氨酸脱羧酶若干研究进展

生理科学进展 1998年第1期29卷 77-80页

作者：袁仕善周智广湖南医科大学代谢内分泌研究所

谷氨酸脱羧酶是γ氨基丁酸的合成酶，主要存在于脑和胰岛中。因体内存在多种形式的谷氨酸脱羧酶，现无获得各种均一的谷氨酸脱羧酶的统一方法。谷氨酸脱羧酶的克隆和表达，既弄清了谷氨酸脱羧酶的基因结构与定位，又为谷氨酸脱羧酶的... 详细信息

谷氨酸脱羧酶是γ氨基丁酸的合成酶，主要存在于脑和胰岛中。因体内存在多种形式的谷氨酸脱羧酶，现无获得各种均一的谷氨酸脱羧酶的统一方法。谷氨酸脱羧酶的克隆和表达，既弄清了谷氨酸脱羧酶的基因结构与定位，又为谷氨酸脱羧酶的大规模应用奠定了基础。目前认为谷氨酸脱羧酶是Ⅰ型糖尿病的始动靶抗原，体内注入谷氨酸脱羧酶可预防或延缓ＮＯＤ（ｎｏｎｏｂｅｓｅｄｉａｂｅｔｉｃ）小鼠Ⅰ型糖尿病的发生。

关键词：谷氨酸脱羧酶纯化克隆理化性质

过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第4期21卷 238-241页

作者：黄跃龙易新元曾宪芳张冉袁仕善中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078

目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法应用过碘酸钠(sodium Perodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异... 详细信息

目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法应用过碘酸钠(sodium Perodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2％,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4％,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0％,明显优于SEA-ELISA(42.1％)。结论过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。

关键词：过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原 ELISA 诊断血吸虫病

日本血吸虫新基因Sj-MA的克隆、表达及保护性免疫(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第11期35卷 981-985页

作者：陈欲晓,易新元,曾宪芳,袁仕善,张顺科,MCRYENOLDS Larry 中南大学湘雅医学院免疫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室 Molecular Parasitology Group New England Biolabs Inc. Beverly MA01915 长沙410078 长沙410078 长沙410078 长沙410078 长沙410078

为发现新基因 ,寻找日本血吸虫病新疫苗候选分子 ,采用Sj雄虫免疫血清筛选Sj成虫cDNA文库。经测序发现新基因Sj MA含有一个完整的阅读框 ,推测其由 2 4 9个氨基酸组成 ,编码分子量为 2 8.8kD的可溶性蛋白质 ,并带有多个能被磷酸化激活... 详细信息

为发现新基因 ,寻找日本血吸虫病新疫苗候选分子 ,采用Sj雄虫免疫血清筛选Sj成虫cDNA文库。经测序发现新基因Sj MA含有一个完整的阅读框 ,推测其由 2 4 9个氨基酸组成 ,编码分子量为 2 8.8kD的可溶性蛋白质 ,并带有多个能被磷酸化激活的位点 ,提示其可能为一重要的信息传递分子。将Sj MA的cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 5X ,获得Sj MA原核表达的重组体rSj MA/GST ,并在E .coli中高效表达为谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合蛋白 ,分子量为 5 4 .8kD ,Western印迹显示融合蛋白质能被抗雄虫和抗GST血清识别。融合蛋白质免疫小鼠可诱导 34.2 9%的减虫率 ,与对照组有显著性差异 (P <0 .0 0 1 )。表明新基因Sj MA表达的蛋白质能诱导小鼠的抗日本血吸虫的保护性免疫 ,提示其作为日本血吸虫疫苗候选分子的潜在价值

关键词：免疫筛选日本血吸虫雄虫表达

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒的构建与表达

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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 89-90页

作者：林绮萍吴少庭翁亚彪秦莉黄达娜袁仕善华南农业大学兽医学院广州510642 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 华南农业大学兽医学院广州510642 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系武汉430030 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020 圳市疾病预防控制中心广东深圳518020

　　构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在HEK-293细胞中的表达情况.采用PCR方法自弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入HEK-... 详细信息

　　构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA4的真核表达质粒,并研究其在HEK-293细胞中的表达情况.采用PCR方法自弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-GRA4重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入HEK-293细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物.从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段,成功构建重组表达质粒pVAC-GRA4;转染GRA4的HEK-293细胞,RT-PCR检测可见一条约987bp的目的条带,表达产物经Western-blot鉴定,其分子量约为41kD,能被pET-GRA4重组蛋白免疫血清所识别.构建的真核表达质粒pVAC-GRA4能在HEK-293细胞中表达,为弓形虫疫苗的进一步研究打下基础.……

关键词：弓形虫基因片段真核表达重组质粒真核表达质粒细胞构建重组表达质粒致密颗粒蛋白真核表达载体基因组脂质体介导转染重组蛋白免疫血清扩增鉴定检测定向克隆分子量疫苗

日本血吸虫雄虫免疫血清对成虫cDNA文库的筛选及克隆分析

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中国人兽共患病杂志 2003年第1期19卷 51-52页

作者：陈欲晓易新元曾宪芳袁仕善 Larry McReynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫病教研室长沙410078 Molecular Parasitology Group NewEngland Biolabs

目的　筛选和分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为血吸虫疫苗研究提供新的候选分子。方法　以日本血吸虫雄性成虫抗原免疫兔血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR鉴定及测序分析。通过互联... 详细信息

目的　筛选和分析日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为血吸虫疫苗研究提供新的候选分子。方法　以日本血吸虫雄性成虫抗原免疫兔血清为探针 ,筛选Sj成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR鉴定及测序分析。通过互联网对测序获得的核苷酸序列进行同源性分析 ,并预测新基因编码蛋白的结构与功能。结果　筛选获 11个阳性克隆 ,其插入SjcDNA片段大小在 0 7～ 2 3kb之间。对部分阳性克隆进行测序分析 ,获两个Sj新基因 ,即Sj-MA及Sj -Cp8(登录号分别为AF5 1980 8和AF5 2 4 896 ) ,分别编码 2 4 9和 71个氨基酸的核内蛋白和胞浆蛋白。Sj-MA蛋白含有 9个蛋白激酶C磷酸化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个酪氨酸激酶磷酸化位点和 1个N -肉豆蔻酸化位点。Sj-Cp8蛋白含一个跨膜区、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个N -肉豆蔻酸化位点。结论　筛选Sj成虫cDNA文库所获得两个新基因 ,其编码的蛋白可能为存在于胞浆和胞核内的日本血吸虫的重要信息传递分子 ,有望成为新的血吸虫病疫苗候选分子。

关键词：日本血吸虫免疫兔血清 cDNA文库免疫筛选基因序列分析

日本血吸虫铁蛋白基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究

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中国免疫学杂志 2004年第10期20卷 696-699页

作者：王敏易新元曾宪芳袁仕善李先平中南大学湘雅二医院检验科长沙410011 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078

目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋... 详细信息

目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS PAGE和Westernblot鉴定表达纯化产物 ;用Dot ELISA分别检测了血吸虫病人及正常人的血清。结果 :重组的日本血吸虫铁蛋白以GMC(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ) 日本血吸虫铁蛋白融合蛋白的形式在细菌中得到高效表达 ,分子量为 4 0kD ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。用重组铁蛋白检测 30例日本血吸虫病人血清和 30例正常人血清 ,阳性率和假阳性率分别为 93 3%和 3 3%。结论 :成功地表达纯化日本血吸虫重组铁蛋白 ,且该蛋白具有一定的免疫诊断价值。

关键词：日本血吸虫铁蛋白基因克隆表达免疫诊断