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疱疹性口腔炎病毒G蛋白/胸苷激酶逆转录病毒载体转移人视网膜色素上皮细胞及其表达

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中华眼科杂志 2003年第4期39卷 201-205页

作者：王方王红卫卢大儒薛京伦张皙上海交通大学附属第一人民医院眼科上海200080 复旦大学遗传所

目的　应用新型逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶 (herpessimplexvirus thymidinekinase ,HSV TK)基因转移 ,探讨丙氧鸟苷 (ganciclovir,GCV)对HSV TK基因修饰人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelialcells,RPE)的杀伤抑制作用。方法　生产制备高滴度疱疹性口腔炎病毒G蛋白 (vesicularstomatitisvirus Gprotein ,VSV G) /胸苷激酶 (thymidinekinase ,TK)和VSV G/LacZ病毒 ,对NIH3T3细胞进行VSV G/TK滴度测定 ;VSV G/LacZ感染CRL2 30 2细胞后 ,以X gal染色估计感染率 ;对CRL2 30 2细胞、分离培养的RPE细胞及NIH3T3细胞感染不同病毒滴度的VSV G/TK ,结合GCV作用 ,观察 3种细胞生长抑制率。结果　VSV G/TK滴度为 1 2× 10 8克隆形成单位 /ml;VSV G/LacZ感染CRL2 30 2细胞的X gal染色蓝染细胞率为 5 8% ;当感染复数为 2 0 0时可最大的抑制细胞生长 ,抑制率为 4 5 %。结论　VSV G逆转录病毒可以介导LacZ、HSV TK基因在离体NIH3T3细胞和人RPE细胞中高效转移和表达。被HSV TK基因修饰的细胞对GCV作用敏感 ,其生长受到抑制。

关键词：疱疹性口腔炎病毒 G蛋白胸苷激酶逆转录病毒载体转移人视网膜色素上皮细胞基因表达

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基因转移研究进展

生物工程进展 1996年第2期16卷 5-10页

作者：卢大儒邱信芳薛京伦复旦大学遗传所

基因治疗已经广泛应用于遗传病，肿瘤等疾病治疗临床试验，基因转移方法是基因治疗研究的基础和关键，脂质体介导的基因转移是物理化学方法中的最佳选择；反转录病毒介导的基因转移系统较为成熟，临床运用最广泛；腺病毒，腺病毒相关病... 详细信息

基因治疗已经广泛应用于遗传病，肿瘤等疾病治疗临床试验，基因转移方法是基因治疗研究的基础和关键，脂质体介导的基因转移是物理化学方法中的最佳选择；反转录病毒介导的基因转移系统较为成熟，临床运用最广泛；腺病毒，腺病毒相关病毒基因转移系统也已进入临床试验，单纯疱疹病毒，痘苗病毒，细小病毒以及哺乳动物细胞人工染色体的基因转移系统也在研究之中。

关键词：基因转移基因治疗

携带人内皮一氧化氮合酶基因的AAV重组表达载体的构建(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第7期24卷 15-18+102页

作者：贺晨霞缪朝玉姚纪花陈浩明卢大儒苏定冯薛京伦复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海 200433 中国第二军医大学基础部药理学教研室

目的:构建一个新型的携带有人内皮一氧化氮合酶(eNOS)cDNA的质粒载体并研究其体外表达,以用于基因治疗。方法:eNOS cDNA插入到腺相关病毒质粒pSNAV-1的EcoR Ⅰ位点。该质粒的启动子为CMV启动子,并携带有腺相关病毒的末端重复序列。构建... 详细信息

目的:构建一个新型的携带有人内皮一氧化氮合酶(eNOS)cDNA的质粒载体并研究其体外表达,以用于基因治疗。方法:eNOS cDNA插入到腺相关病毒质粒pSNAV-1的EcoR Ⅰ位点。该质粒的启动子为CMV启动子,并携带有腺相关病毒的末端重复序列。构建好的质粒转染到两种哺乳动物细胞BHK和C2C12细胞中,通过PCR和RT-PCR分别检测eNOS cDNA和mRNA。结果:限制性内切酶分析证明,eNOS cDNA以正确的方向插入到pSNAV-1质粒中。PCR检测表明pSNAV-eNOS被转入BHK和C2C12细胞中。RT-PCR检测表明转染有pSNAV-eNOS的细胞可表达eNOS mRNA。结论:成功构建的pSNAV-eNOS可在体外培养的哺乳动物细胞中表达人eNOS mRNA。

关键词：一氧化氮一氧化氮合酶质粒基因治疗腺相关病毒

Ⅸ因子重组质粒的构建及其转化细胞移植在小鼠体内的表达

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科学通报 1992年第16期37卷 1513-1516页

作者：周洁民侯国英胡以平邱信芳薛京伦复旦大学遗传学研究所上海200433

血友病B是由于凝血因子Ⅸ缺乏所致的一种严重出血性遗传病,其临床治疗主要依靠输血或补充人Ⅸ因子浓缩制剂,但这种替代疗法不仅疗效短,费用昂贵,而且使患者面临着爱滋病毒及肝炎病毒感染的威胁。目前,利用基因转移技术进行遗传病基因治... 详细信息

血友病B是由于凝血因子Ⅸ缺乏所致的一种严重出血性遗传病,其临床治疗主要依靠输血或补充人Ⅸ因子浓缩制剂,但这种替代疗法不仅疗效短,费用昂贵,而且使患者面临着爱滋病毒及肝炎病毒感染的威胁。目前,利用基因转移技术进行遗传病基因治疗的研究已取得令人注目的进展。在先前的血友病B基因治疗的研究中。

关键词：基因凝血因子血友病

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利用光加热的多聚酶链式反应

中华医学遗传学杂志 1993年第1期10卷 37-38页

作者：刘阳李侃淳肖泉毅薛京伦复旦大学遗传所上海200043 复旦生物实验技术研究所

1985年,美国Cetus公司首创了多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。它是一种采用体外扩增从微量生物材料中快速获得大量特定的DNA片段的方法。

关键词：聚合酶链反应光加热

Sp100与HIV-1整合酶互作并抑制其介导的病毒整合(英文)

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生物化学与生物物理进展 2013年第3期40卷 240-248页

作者：林云李智慧王然李文娟王晶晶季朝能薛京伦陈金中复旦大学生命科学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

Sp100是核颗粒ND10的组成蛋白,在哺乳动物细胞中广泛存在.Sp100参与多种细胞生理病理过程,如转录调控、细胞内抗病毒免疫等.利用酵母双杂交系统,我们发现了Sp100的互作蛋白HIV-1整合酶,免疫共沉淀实验进一步证实了Sp100与HIV-1整合酶的... 详细信息

Sp100是核颗粒ND10的组成蛋白,在哺乳动物细胞中广泛存在.Sp100参与多种细胞生理病理过程,如转录调控、细胞内抗病毒免疫等.利用酵母双杂交系统,我们发现了Sp100的互作蛋白HIV-1整合酶,免疫共沉淀实验进一步证实了Sp100与HIV-1整合酶的互作,细胞内荧光共定位实验也证实了二者在细胞内部分共定位.此外,突变体实验表明,Sp100的C端300～480氨基酸和HIV-1的催化结构域是两个蛋白质的互作区域.利用siRNA降低细胞内Sp100的表达量,可以增加HIV-1整合酶介导的病毒的整合,反之,细胞内过表达Sp100则会降低HIV-1整合酶介导的病毒的整合.这是首次发现Sp100可以和HIV-1整合酶发生相互作用,并进而抑制病毒的整合.我们发现了Sp100作为HIV-1整合酶互作蛋白的新功能,并扩展了细胞防御病毒感染的相关研究.

关键词： Sp100 HIV-1整合酶慢病毒整合

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利用精原干细胞建立人凝血因子Ⅸ转基因小鼠

科学通报 2003年第17期48卷 1848-1850页

作者：王宁陈晓光姚纪花沈琦薛京伦复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

用玻璃针将Effectene^(TM)包裹的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达载体注入小鼠的曲精细管. 通过PCR和Southern印迹法对子代41只小鼠进行鉴定,有2只小鼠的基因组中整合有hFⅨ基因表达框架,整合率为4％(2/41).通过ELISA方法在其中1只小鼠的血浆中... 详细信息

用玻璃针将Effectene^(TM)包裹的人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达载体注入小鼠的曲精细管. 通过PCR和Southern印迹法对子代41只小鼠进行鉴定,有2只小鼠的基因组中整合有hFⅨ基因表达框架,整合率为4％(2/41).通过ELISA方法在其中1只小鼠的血浆中检测到hFⅨ的表达,表达量为4.6 ng/mL.实验证明,精原干细胞法是建立转基因动物的有效途径,为乳腺反应器的研究提供了另一个技术手段. 同时也为通过生殖细胞途径治疗血友病B提供了新的选择.

关键词：精原干细胞人凝血因子Ⅸ 转基因基因组基因表达乳腺反应器

转有人凝血因子IX cDNA的家兔成纤维细胞在家兔体内的高效表达和检测

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科学通报 1993年第8期38卷 752-755页

作者：王瑶艾星滨卢大儒邱信芳薛京伦复旦大学遗传学研究所上海200433

凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝血系统的重要成分之一.它的缺乏或功能缺陷可导致血友病B的发生。近年来,随着高效安全的基因转移技术迅速发展,血友病B的基因治疗已取得突破性进展,逐渐从实验室走向临床试验阶段,并已获得了令人可喜... 详细信息

凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝血系统的重要成分之一.它的缺乏或功能缺陷可导致血友病B的发生。近年来,随着高效安全的基因转移技术迅速发展,血友病B的基因治疗已取得突破性进展,逐渐从实验室走向临床试验阶段,并已获得了令人可喜的成果.在血友病B的基因治疗研究中,我们构建了人凝血因子Ⅸ

关键词：凝血因子IX 基因治疗血友病

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人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器的研制

复旦学报（自然科学版） 1998年第4期37卷 365-371页

作者：邱信芳张克忠卢大儒薛京伦复旦大学遗传学研究所

为了建立人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器，以MCK增强子，β－actin启动于控制hFIX小基因（minigene）表达顺序，反向插入G1Na框架，构建复制缺陷反转录病毒载体，并制备重组反转录病毒颗粒；以CMV启动子，hFIXcDNA和腺病毒框架构建腺病毒载... 详细信息

为了建立人凝血Ⅸ因子乳腺生物反应器，以MCK增强子，β－actin启动于控制hFIX小基因（minigene）表达顺序，反向插入G1Na框架，构建复制缺陷反转录病毒载体，并制备重组反转录病毒颗粒；以CMV启动子，hFIXcDNA和腺病毒框架构建腺病毒载体pAdCMVhFIX，与质粒pJM17共转染包装细胞制备合hFIX基因的重组腺病毒颗粒．两种病毒颗粒分别通过直接转染活体奶山羊乳腺组织，建立了hFIX蛋白的乳腺表达系统和快速检测系统．另外，利用小鼠MAR（matrixattachmentregion）元件，牛β－Casein基因，人凝血Ⅸ因子小基因和cDNA构建了乳腺组织特异性表达载体．以Stearylamine（SA）阳离子脂质体介导、尾静脉注射的方法转染哺乳期雌性小鼠的活体组织，建立Ⅸ因子表达的快速检测系统，并研究了β－casein基因，hFIX基因intron1对hFIX基因在乳腺组织中表达调控的作用．在此基础上将筛选得到的pMCIXm表达载体通过显微注射技术注人小鼠和奶山羊受精卵细胞，制备6只转基因小鼠和5只转基因奶山羊．其中在2只转基因小鼠和1头奶山羊乳汁中测得hFIX蛋白的表达并具有凝血活性．

关键词：人凝血因子Ⅸ 乳腺生物反应器转基因动物