检索结果-南通市图书馆

杜氏盐藻GAPDH cDNA的克隆鉴定及其启动子功能表达载体的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通报 2011年第7期27卷 106-110页

作者：贾岩龙牛杰贾俊英邱乐乐薛乐勋新乡医学院药学院药理学教研室新乡453003 郑州大学医学院细胞生物学研究室郑州450052 新乡医学院基础医学院形态学实验室新乡453003 新乡医学院三附院眼科新乡453003

根据藻类甘油醛3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)氨基酸高度保守序列设计简并引物,采用5′,3′-RACE和巢式PCR的方法,得到了杜氏盐藻(Dunaliella salina)GAPDH cDNA全长序列。序列同源性比较和进化树等生物信息学分析结果表明,根据获得的盐藻GAPDH的核酸序列推导的氨基酸序列与其他已知物种的GAPDH有较高的同源性。定向克隆于原核表达载体的盐藻GAPDHcDNA在大肠杆菌中以融合蛋白的形式得到了高效表达,并成功构建了由盐藻GAPDH基因启动子驱动的cat(氯霉素乙酰转移酶)基因表达载体pUCGCat,为进一步研究杜氏盐藻GAPDH基因和启动子功能奠定了试验基础。

关键词：杜氏盐藻甘油醛3-磷酸脱氢酶 cDNA 启动子

HeLa细胞系中核转录因子-κB与Bcl-2的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

郑州大学学报（医学版） 2009年第1期44卷 74-77页

作者：田卫红田芳许培荣刘红涛薛乐勋安阳市肿瘤医院妇科安阳455000 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001 郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的:分析宫颈鳞癌HeLa229细胞中核转录因子(NF-κB)的激活状态及其与抗凋亡基因Bcl-2表达的相关性。方法:采用免疫细胞化学法和Western Blot法检测宫颈鳞癌HeLa229细胞中NF-κB亚单位p50和p65及其下游调控基因Bcl-2的蛋白表达,RT-PCR... 详细信息

目的:分析宫颈鳞癌HeLa229细胞中核转录因子(NF-κB)的激活状态及其与抗凋亡基因Bcl-2表达的相关性。方法:采用免疫细胞化学法和Western Blot法检测宫颈鳞癌HeLa229细胞中NF-κB亚单位p50和p65及其下游调控基因Bcl-2的蛋白表达,RT-PCR法检测宫颈鳞癌HeLa229细胞中p50和p65 mRNA的表达。EMSA法检测HeLa229细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果:宫颈鳞癌HeLa229细胞质中NF-κB的亚单位p50和p65均有表达,p50/p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。RT-PCR结果表明,p50和p65的mRNA在细胞质中也存在表达,并且在HeLa229细胞中也检测到Bcl-2蛋白的表达。结论:在宫颈鳞癌HeLa229细胞中存在有NF-κB及其下游基因Bcl-2的表达,提示激活的NF-κB信号通路可能在宫颈鳞癌发生发展及抗凋亡中起重要作用。

关键词： HeLa229细胞株核转录因子-κB Bcl-2

莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻中转录活性的检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

郑州大学学报（医学版） 2004年第1期39卷 35-38页

作者：潘卫东吕玉民张贵星牛向丽侯桂琴薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的 :验证莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的转录活性。方法 :以绿色荧光蛋白 (En hancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)为报告基因 ,将报告基因插入莱茵衣藻叶绿体atpA启动子与rbcL终止子之间 ,构建载体pSP71 -atpA -EGF... 详细信息

目的 :验证莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的转录活性。方法 :以绿色荧光蛋白 (En hancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)为报告基因 ,将报告基因插入莱茵衣藻叶绿体atpA启动子与rbcL终止子之间 ,构建载体pSP71 -atpA -EGFP ,用基因枪法转入杜氏盐藻叶绿体中 ,通过荧光显微镜观察EGFP基因在atpA启动子控制下的表达 ,以验证atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中的生物活性。结果 :荧光显微镜下观察到EGFP在杜氏盐藻叶绿体中得到了表达。结论 :莱茵衣藻叶绿体atpA启动子在杜氏盐藻叶绿体中有转录起始活性。

关键词：盐藻莱茵衣藻叶绿体 atpA 启动子

杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

郑州大学学报（医学版） 2010年第6期45卷 910-914页

作者：张磊崔柳青李杰刘红涛薛乐勋郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001

目的:纯化杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)重组蛋白,制备多克隆抗体。方法:PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a(+),得到重组载体pET28a-GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆... 详细信息

目的:纯化杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)重组蛋白,制备多克隆抗体。方法:PCR扩增得到两端分别添加NdeⅠ和EcoRⅠ酶切位点的GPI基因,双酶切后插入原核表达载体pET28a(+),得到重组载体pET28a-GPI,经鉴定正确后,用该重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后用镍离子柱纯化目的蛋白并免疫新西兰白兔,间接ELISA和Westernblot法检测抗体的效价和特异性。结果:杜氏盐藻GPI基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,占总蛋白的41.6%。以高纯度的目标蛋白作为抗原免疫新西兰白兔,得到抗GPI的抗血清。间接ELISA检测抗血清效价达到1:512000,Westernblot检测证实抗血清能与目的蛋白特异性结合。结论:成功纯化了杜氏盐藻GPI重组蛋白并制备了特异性的GPI多克隆抗体。

关键词：葡萄糖-6-磷酸异构酶原核表达抗体制备杜氏盐藻

杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段的克隆及序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

广西植物 2006年第5期26卷 474-478页

作者：侯桂琴刘红涛潘卫东薛乐勋姜东亚郑州大学细胞生物学研究室郑州大学第一附属医院河南郑州450052 洛阳市新安县第一高级中学

根据莱因衣藻、卵形肾藻、普通小球藻等10种藻类的atpA全基因氨基酸高度保守序列,设计简并引物,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增出约400bp的片段,将该片段连接到T-vector上进行序列测定。结果表明,核苷酸长度为405bp,编码135个氨基酸... 详细信息

根据莱因衣藻、卵形肾藻、普通小球藻等10种藻类的atpA全基因氨基酸高度保守序列,设计简并引物,利用PCR方法从盐藻叶绿体DNA中扩增出约400bp的片段,将该片段连接到T-vector上进行序列测定。结果表明,核苷酸长度为405bp,编码135个氨基酸。推导的氨基酸序列与莱因衣藻的同源性为92%,普通小球藻88%,Mesostigmaviride87%,卵形肾藻86%,Cyanidioschyzonmerolae85%。以所克隆的DNA片段为探针,与盐藻叶绿体基因组进行SouthernBlot杂交结果有明显的杂交信号。据此可推断本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻叶绿体atpA基因片段。该基因序列已被GenBank收录,接受号为AY435096。

关键词：杜氏盐藻叶绿体 atpA 简并引物

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2006年第11期26卷 1-7页

作者：李杰贾岩龙闫红霞潘卫东薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州大学第一附属医院郑州450052

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐... 详细信息

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析。方法:利用BamHI、EcoRI、HindIII、PstI、SalI、Xbal6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库。采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析。为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达。结果:从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列。GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性。结论:所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有“开关”活性的可控性启动子。

关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因 5’上游序列功能

杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

郑州大学学报（医学版） 2011年第6期46卷 835-838页

作者：侯永杰李杰李庆华王建人薛乐勋郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450001 河南中医学院生理教研室郑州450008

目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴... 详细信息

目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法转化到酵母菌株Y187中,并通过表型筛选检测诱饵蛋白有无毒性和自激活作用。结果:成功获得了stt3a可溶端的基因片段,其表达的蛋白对酵母菌株Y187无毒害,报告基因-半乳糖苷酶活性没有被诱导。结论:酵母双杂交GAL4系统可以被用来研究杜氏盐藻中与stt3a相互作用的蛋白。

关键词：杜氏盐藻 stt3a 酵母双杂交鞭毛再生

杜氏盐藻psaB基因cDNA的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2005年第4期21卷 642-645页

作者：刘红涛臧卫东鲁照明王宁侯桂琴李慎柯薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

根据真核生物莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)、Chlamydomonasmoewusii、Chlorellavulgaris以及Mesostigmaviride的psaB基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliellasalina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到的一段长为1·8kb左右的cDNA片段。PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较,表明所克隆的1815bp序列为杜氏盐藻psaBcDNA片段,GenBank收录号为AY820754。根据已经得到的psaB序列推导成氨基酸序列与一些已知物种的psaB基因相比较,同源性分别为Chlamydomonasreinhardtii92%,Chlamydomonasmoewusii91%,Chlorellavulgaris86%,Mesostigmaviride85%,***85%,Nephroselmisolivacea84%。据此可推断本实验中所克隆的序列为杜氏盐藻psaBcDNA序列。

关键词：杜氏盐藻 A2亚基 psaB cDNA 简并引物

中药复方抗癌汤联合化疗治疗晚期口腔癌疗效观察

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肿瘤防治研究 2002年第4期29卷 337-338页

作者：宋琰华宋树田薛乐勋河南省直属机关第一医院郑州450003 郑州市二七人民医院郑州大学医学院医学实验中心

目的　观察中药复方抗癌汤联合化疗晚期口腔鳞状细胞癌的疗效。方法　将 12例晚期口腔癌患者随机分为治疗组 7例 ,对照组 5例 ,治疗 2个月后 ,观察病灶大小、生存率及毒副反应 ,并观察治疗后食欲、食量及体重的变化。结果　治疗组和对... 详细信息

目的　观察中药复方抗癌汤联合化疗晚期口腔鳞状细胞癌的疗效。方法　将 12例晚期口腔癌患者随机分为治疗组 7例 ,对照组 5例 ,治疗 2个月后 ,观察病灶大小、生存率及毒副反应 ,并观察治疗后食欲、食量及体重的变化。结果　治疗组和对照组总有效 (CR +PR)率分别为 85 .71%及 6 0 % (P <0 .0 5 ) ,12个月生存率分别为 10 0 %及 4 0 % ,18个月生存率分别为 5 7.14 %及 0 % (P <0 .0 1)。治疗组患者毒副反应轻微、食欲、食量及体重均有不同程度增加 ,而对照组变化不明显。结论　中药复方抗癌汤配合化疗能明显提高晚期口腔鳞状细胞癌的疗效。

关键词：中药复方抗癌汤晚期口腔癌疗效观察