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猪轮状病毒重组VP6*蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4021-4028页

作者：高力国申翰钦陈诒全陈胜蔺文成陈峰华南农业大学动物科学学院广州510642 广东精捷检验检测有限公司云浮527400

旨在建立猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的抗体检测方法。本研究以PoRV截短的VP6*(aa149-332)蛋白作为检测抗原,建立PoRV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示:截短的重组VP6*(aa149-332)以包涵体和可溶性两种形式存在,大小为22.5 k... 详细信息

旨在建立猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)的抗体检测方法。本研究以PoRV截短的VP6*(aa149-332)蛋白作为检测抗原,建立PoRV抗体的间接ELISA检测方法。结果显示:截短的重组VP6*(aa149-332)以包涵体和可溶性两种形式存在,大小为22.5 ku。优化后的ELISA反应条件:VP6*(aa149-332)包被量为25 ng·孔^(-1),抗原4℃过夜包被,5%脱脂奶粉溶液37℃封闭2 h,待检血清1∶400稀释、37℃孵育30 min,酶标羊抗鼠IgG二抗1∶24000稀释、37℃孵育30 min,显色15 min。试验确定阴阳性临界值OD_(450 nm)=0.418,可检测到抗体的最大稀释度为1∶3200,批内和批间重复变异系数均小于10%,并具有较好的特异性。28份血清与Western blot结果符合率为96.42%。ELISA OD_(450 nm)值与中和抗体效价log2相关系数R^(2)=0.8785。综上所述,本研究建立的PoRV抗体间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可应用于PoRV的临床血清样本抗体检测。

关键词：猪轮状病毒 VP6*蛋白间接ELISA 原核表达

猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2011年第12期33卷 953-956页

作者：王晓玲蔺文成刘芹防崔尚金青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特... 详细信息

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1(RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7(IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β-actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法。结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于3%。利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测。结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析。

关键词： Ⅰ型干扰素信号传导因子荧光定量PCR 检测

猪JAK-1、JAK-2、STAT-1和STAT-2 TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2011年第11期33卷 873-876页

作者：蔺文成王晓玲刘芹防崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立定量检测猪Janus激酶(JAK)和信号转导和转录激活因子(STAT)mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪JAK-1,JAK-2,STAT-1、STAT-2及管家基因β-actin的序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性重组质粒,建立了Taq... 详细信息

为建立定量检测猪Janus激酶(JAK)和信号转导和转录激活因子(STAT)mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪JAK-1,JAK-2,STAT-1、STAT-2及管家基因β-actin的序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性重组质粒,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物的产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于2%。利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染ST细胞48 h后JAK-1、JAK-2、STAT-1和STAT-2 mRNA的转录水平进行了检测,结果表明:JAK-1和JAK-2转录水平显著上调,STAT-1和STAT-2转录水平呈现下调趋势,本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪细胞传导因子JAK和STAT的定量检测。

关键词： I型干扰素 JAK-STAT 荧光定量PCR 检测

生物炭及炭基肥改良棕壤理化性状及提高花生产量的作用

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植物营养与肥料学报 2015年第6期21卷 1633-1641页

作者：战秀梅彭靖王月刘轶飞陈坤韩晓日王恒飞蔺文成李喜研沈阳农业大学土地与环境学院土肥资源高效利用国家工程实验室辽宁省生物炭工程技术研究中心沈阳110866

【目的】炭基复合肥是生物炭农用的另一种方式,生物炭作为土壤改良剂对土壤改良研究的报道较多,但大多为短期培养或模拟试验。目前更缺乏生物炭与传统土壤培肥方式的比较研究。本研究旨在通过4年的田间微区定位试验,开展生物炭及炭基复... 详细信息

【目的】炭基复合肥是生物炭农用的另一种方式,生物炭作为土壤改良剂对土壤改良研究的报道较多,但大多为短期培养或模拟试验。目前更缺乏生物炭与传统土壤培肥方式的比较研究。本研究旨在通过4年的田间微区定位试验,开展生物炭及炭基复合肥对棕壤理化性质及花生产量的影响研究,以期为生物炭的培肥改土及合理农用提供理论依据。【方法】定位试验于2009年开始连续4年进行了花生微区田间试验(2 m^2)。试验设4个处理分别为秸秆还田+NPK(CS)、施用猪厩肥+NPK(PMC)、生物炭+NPK(BIO)和基于生物炭的炭基复合肥(BF)所有处理均为等氮磷钾养分,BIO处理与PMC处理为等碳量,BIO处理相当于CS处理所施用的玉米秸秆量制备得到的生物炭量,BF处理碳含量低于BIO碳含量每个处理重复3次,随机排列。分析试验前和2012年收获后土壤理化性质,比较各处理4年的花生产量。【结果】连续施用4年后,与试验前相比,BIO处理的土壤有机碳提高了27.6%全氮含量提高了75.6%,显著高于其他各处理,土壤pH提高了0.14个单位,显著高于CS处理,与PMC处理相近;土壤碱解氮、速效磷、速效钾和CEC值与CS或PMC处理相近;BIO处理的土壤毛管孔隙度和田间持水量显著高于其他处理容重和土壤总孔隙度与CS和PMC处理差异不显著;4年中花生产量均居首位,从3198.5 kg/hm^2提高到4818.0 kg/hm^2,但与PMC处理差异不显著。连续施用4年后,BF处理土壤pH较试验前提高了0.57个单位显著高于其他各处理,优势显著;土壤有机碳和全氮含量较试验前分别提高了4.4%和27.9%显著低于BIO处理对土壤物理性质的调节作用也不及BIO处理其他指标差异不显著但总体上与CS或PMC处理相近;BF处理的花生产量在试验的前3年与BIO处理差异不显著,第4年较BIO处理降低了317.1 kg/hm2,差异显著介于PMC和CS处理之间。【结论】各处理作物产量随施用年限增加而提高。生物炭和炭基复合肥对土壤的理化性质的改良作用与秸秆还田和施用猪厩肥相近,生物炭在提高土壤有机碳和全氮含量方面,炭基复合肥在改善土壤pH方面优势突出对作物具有持续增产作用。

关键词：生物炭炭基复合肥土壤理化性质产量

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鸡蛋壳暗斑形成及影响因素研究进展

黑龙江畜牧兽医 2021年第1期 36-38,45,161,162页

作者：包楚翘谢青梅蔺文成李鸿鑫华南农业大学动物科学学院广州510642

暗斑蛋是蛋壳表面出现一种肉眼可见色泽灰暗或浅褐色斑点的鸡蛋。暗斑主要为鸡蛋内容物水分渗透并积聚在蛋壳形成,与蛋壳质量下降密切相关,又受到高温高湿、微生物活动等环境因素影响。文章综述了蛋壳结构及温度、湿度、微生物、储存时... 详细信息

暗斑蛋是蛋壳表面出现一种肉眼可见色泽灰暗或浅褐色斑点的鸡蛋。暗斑主要为鸡蛋内容物水分渗透并积聚在蛋壳形成,与蛋壳质量下降密切相关,又受到高温高湿、微生物活动等环境因素影响。文章综述了蛋壳结构及温度、湿度、微生物、储存时间等环境因素对蛋壳暗斑形成、变化的影响,并对暗斑蛋蛋品质变化等进行归纳,以期深入了解鸡蛋壳暗斑形成、变化规律及影响因素,减少暗斑的形成,维持鸡蛋的新鲜度,降低暗斑蛋的负面影响。

关键词：暗斑蛋蛋壳蛋品质温湿度微生物储存时间

CDV和CPV及CCV多重纳米PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2016年第10期46卷 1207-1212页

作者：罗亚坤刘琪蔺文成王静周灵梁琳崔尚金中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站北京100193 华南农业大学动物科技学院广东广州510642 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒（CDV）N基因序列、犬细小病毒（CPV）VP2基因序列和犬冠状病毒（CCV）M基因序列的保守型片段分别设计特异性引物,建立了CPV（193 bp）、CDV（500 bp）和CCV（780bp）的多重纳米PCR（nano-mPCR）检测方法... 详细信息

参考Gen Bank上登录的犬瘟热病毒（CDV）N基因序列、犬细小病毒（CPV）VP2基因序列和犬冠状病毒（CCV）M基因序列的保守型片段分别设计特异性引物,建立了CPV（193 bp）、CDV（500 bp）和CCV（780bp）的多重纳米PCR（nano-mPCR）检测方法,同时考查所建立nano-mPCR检测方法的特异性和敏感性。结果表明,该方法特异性和敏感性良好,对CPV、CDV和CCV的最低核酸检测量分别为1.39×10~2、6.0×10~2和6.7×10~2copies/L,其敏感性比普通PCR高100倍。临床样品的检测结果表明,nano-mPCR的建立为CDV、CPV和CCV的单独或混合感染进行早期快速、灵敏、准确的鉴别诊断提供了新方法。

关键词：多重纳米PCR 犬瘟热病毒犬细小病毒犬冠状病毒检测流行病学

基于家禽产业发展需求的《养禽学》教学改革探索

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中国家禽 2023年第6期45卷 120-124页

作者：蔺文成李鸿鑫陈峰谢青梅罗庆斌华南农业大学动物科学学院广东广州510642

研究旨在解决课程教学与产业脱节严重影响人才培养质量的问题,通过分析传统教学模式与产业发展对人才质量需求之间的突出问题,提出基于家禽产业发展需求的《养禽学》教学内容、教学方法和人才培养模式等方面改革措施并付诸实践。3年教... 详细信息

研究旨在解决课程教学与产业脱节严重影响人才培养质量的问题,通过分析传统教学模式与产业发展对人才质量需求之间的突出问题,提出基于家禽产业发展需求的《养禽学》教学内容、教学方法和人才培养模式等方面改革措施并付诸实践。3年教学实践表明:本科生的学习兴趣明显提高,对《养禽学》课程的满意度95%以上;对家禽产业的认同感显著增强,攻读家禽生产方向研究生和进入养禽生产一线就业的人数显著增加。基于家禽产业发展需求的《养禽学》教学改革提高了人才培养质量,为华南地区家禽业培养了大量的技术和管理人才。

关键词：《养禽学》家禽产业教学改革

猪捷申病毒8型rVP1-ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2012年第3期42卷 258-263页

作者：胡峰刘杉杉蔺文成王晓玲张超范王朝刘朝霞胡泉博崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体的间接ELISA检测方法,将PTV-8VP1基因克隆至原核表达载体pET-30a中,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta表达重组的VP1蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析结果表明,表达的重组蛋白分子质量约为36.2ku,且能被PTV-8阳性... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体的间接ELISA检测方法,将PTV-8VP1基因克隆至原核表达载体pET-30a中,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta表达重组的VP1蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析结果表明,表达的重组蛋白分子质量约为36.2ku,且能被PTV-8阳性血清特异性识别。以纯化的重组蛋白包被ELISA反应板,建立了检测PTV抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果表明,重组VP1蛋白与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒阳性血清不发生反应。敏感性试验结果表明血清稀释至1∶800时仍检测为阳性。该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明具有较好的重复性。利用建立的方法对633份临床样品进行检测,阳性率是88.10%。选取58份临床样品与间接免疫荧光方法作比对试验,两者的符合率是94.80%。

关键词：猪捷申病毒重组VP1蛋白原核表达间接ELISA

1997～2015年我国不同地区H9N2亚型禽流感病毒流行情况研究

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中国家禽 2016年第20期38卷 20-27页

作者：张静陈立根张宇孙乾晋李如意白牧原蔺文成谢青梅华南农业大学动物科学学院广东广州510642

为了揭示H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化规律，为H9N2亚型禽流感的防控提供参考，研究从Gisaid以及NCBI下载1997～2015年我国各地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列，按时间、地域、物种等信息进行统计，并从中选取873株具有代表性的毒株... 详细信息

为了揭示H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化规律，为H9N2亚型禽流感的防控提供参考，研究从Gisaid以及NCBI下载1997～2015年我国各地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列，按时间、地域、物种等信息进行统计，并从中选取873株具有代表性的毒株，利用Mega7．0等软件对我国8个地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因进行遗传进化分析。结果发现，我国H9N2亚型禽流感病毒经过了四次大暴发（2001、2007、2011、2013年），主要来源于华南和华东地区。呈现出以鸡群为主、多种宿主并存的现象，并以h9．4．2．5和h9．4．2．6亚分支为主要流行分支。结果说明，H9N2亚型禽流感病毒进化持续进行，禽流感的暴发以养禽密集地区为主且具有一定周期性，宿主范围不断扩大，使得H9N2亚型禽流感的防控在我国面临着越来越严峻的挑战。

关键词：禽流感病毒 HA基因 H9N2亚型