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副猪嗜血杆菌Fur蛋白和猪链球菌PerR蛋白与启动子的相互作用

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副猪嗜血杆菌Fur蛋白和猪链球菌PerR蛋白与启动子的相互作用

作者：蔡雯雯华中农业大学

学位级别：硕士

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,主要危害2周龄～4月龄的猪,给全球的养猪业带来巨大的经济损失。猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种在全世界范围内广泛存在的重要的病原菌,受其影响... 详细信息

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,主要危害2周龄～4月龄的猪,给全球的养猪业带来巨大的经济损失。猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种在全世界范围内广泛存在的重要的病原菌,受其影响,养猪业国家常常遭受巨大的经济损失。猪链球菌现在分为33个血清型,猪链球菌2型(SS2)是其中最重要的,流行最广的血清型。人接触感染猪链球菌的病猪或食用病死猪肉,可能会感染发病。 Fur家族蛋白质,包括Fur、Zur、Mur、Nur、PerR等,是细菌体内的重要的金属调节蛋白,与细菌所需的重要金属离子的吸收调节密切相关,有些还能感应其他信号如过氧化物或血红素。它们能够抑制或激活为数众多的基因的启动子的转录,对细菌的生长繁殖、毒力以及抵抗外界不利影响方面都起着着重要的作用。本研究旨在克隆表达HPS的Fur蛋白和SS2的PerR蛋白,分别研究它们与HPS和SS2相关基因启动子的相互作用,为这些基因表达调控机制的研究奠定基础。主要研究内容和结果如下: 1.副猪嗜血杆菌的fur基因和猪链球菌perR基因的克隆表达根据已经公布的基因序列设计引物,利用PCR方法克隆HPS的fur基因以及SS2的perR基因,在大肠杆菌大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物经过亲和层析柱纯化,超滤离心,得到纯化浓缩后的蛋白Fur-HPS和PerR-SS2。经SDS-PAGE分析,所得蛋白与目地蛋白大小一致。 2.副猪嗜血杆菌的Fur蛋白和猪链球菌PerR蛋白目标基因启动子片段的制备利用实验室SCOTS技术筛选出的铁限制条件下HPS和SS2中转录表达上调的基因,结合生物信息学方法分析及相关文献报道,预测出分别与Fur-HPS和PerR-SS蛋白互作的目标基因启动子片段,设计引物扩增基因上游启动子片段,作为与这两种蛋白互作的目标基因启动子片段。所得的PCR产物与预计大小一致。 ***蛋白和PerR蛋白与启动子片段的相互作用的EMSA分析将Fur-HPS蛋白和PerR-SS蛋白分别与可能含有"fur-box"和“perR-box”的目标基因片段相互作用,通过电泳迁移位移分析(EMSA)的方法检测蛋白和DNA的结合活性。电泳后,用溴化乙锭(EB)溶液染色。结果显示蛋白与目标DNA均能结合且效力较高。在加入Fe、Zn、Mn时,蛋白与目标DNA的结合效率更高,尤其是加入Fe时。

关键词：副猪嗜血杆菌猪链球菌 Fur蛋白质 PerR蛋白质启动子电泳迁移位移实验

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美国中小学法治教育课程研究

美国中小学法治教育课程研究

作者：蔡雯雯广西师范大学

学位级别：硕士

健全的社会主义法治文明强国离不开高素质的法治公民,奉法者强,严于律己的法治文明人已然是衡量法治国家最显眼的标志。近年来,青少年法治观念淡薄、违法犯罪的人数增加、犯罪者的低龄化、犯罪形态的多样化以及极端犯罪手段的日趋残忍... 详细信息

健全的社会主义法治文明强国离不开高素质的法治公民,奉法者强,严于律己的法治文明人已然是衡量法治国家最显眼的标志。近年来,青少年法治观念淡薄、违法犯罪的人数增加、犯罪者的低龄化、犯罪形态的多样化以及极端犯罪手段的日趋残忍等等现象令人触目‘惊心’。在依法治国与精神文明建设的时代背景下,“在中小学设立法治教育课程”的呼声越来越高。美国作为一个典型的法治国家,法治内容十分丰富,课程实效突出,教育成果斐然。关注美国法治教育,聚焦美国中小学法治教育课程,合理借鉴美国中小学法治教育课程的成功经验,有助于我国探索社会主义特色法治教育。本文运用比较研究法、历史研究法、内容分析法,站在历史的长廊上回顾梳理了美国法治教育课程的历史演变,总结了中小学法治教育各阶段的个性化目标,在此基础上罗列了特色的法治教育课程类型,并对课程内容进行深入分析,剖析了法治教育课程成功实施的策略,探究其特色课程评价,并结合当下我国中小学课程面临的困境与争议,为我国法治教育课程提出些许建议。美国法治教育课程早期阶段关注国家法律文本,为应对社会动荡转向关注社会现实,现在独立的法治教育越发成熟,法治教育的制度化倾向亦越发明显。美国中小学法治教育课程目标以民主、自由、正义、平等、法律的核心精神为牵引,课程目标涉及法治知识、法治技能和法治信仰,各阶段目标在知识能力上既一脉相承又逐级加深。法治教育纳入社会科课程中,课程设置的类型主要有《少年司法》、《公民计划》、《民主的基础》、《街头法》、《我们人民:公民与宪法》。中小学法治教育课程内容在于普及法治知识,包括基础法律常识和实用性法治知识,在此基础上提升学生的思考、判断技能、交流和社会参与的法治技能,最终将法治精神内化,形成法治信仰。美国中小学法治教育课程实施遵循跨学科综合、接受学习与发现学习、学科学习与社会实践相结合的原则,其中富有特色的是在实施过程中灵活运用主题教学、案例教学、模拟法庭的教学策略,社区参与和学校政府作为隐性课程略为补充,这使法治教育课程实施效果富有成效。法治教育课程评价由全国教育进步评估组织进行,评价的目的注重学生的发展,关注学生学习的学习过程,不强调过分地甄别与选择。评价的主要方法是量化评价和质性评价的有机统一,评价主体以学生为主,评价主体是多元化的,强调多方力量共同参与。它山之石可以攻玉,美国中小学法治教育课程带给我国的启示如下:一是以社会主义特色法律体系为基础,社会主义核心价值观带头牵引,打造适合我国现阶段国情的中国特色社会主义法治教育课程;二是要在学生生活中挖掘法治元素,丰富法治教育课程内容;三是法治教育课程实施要以学生为中心,倾听学生的法治学习需求,综合运用多种教学策略开展教学;四是建立科学规范的法治教育课程评价体系,发挥法治教育成效最大化,培养具有坚定共产主义信仰的社会主义事业的建设者和接班人,推动社会主义民主和法治建设。

关键词：美国中小学法治教育法治课程

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农杆菌介导大豆遗传转化体系的优化研究

农杆菌介导大豆遗传转化体系的优化研究

作者：蔡雯雯南京农业大学

学位级别：硕士

大豆(Glycine max L. Merrill)起源于我国,栽培历史悠久,品种资源丰富,是世界上主要的粮食和油料作物。由于大豆的品质和产量易受各种病、虫、草害的影响,因此人们试图利用转基因方法对大豆进行有目的定向改变的遗传改良,以此来改善大... 详细信息

大豆(Glycine max L. Merrill)起源于我国,栽培历史悠久,品种资源丰富,是世界上主要的粮食和油料作物。由于大豆的品质和产量易受各种病、虫、草害的影响,因此人们试图利用转基因方法对大豆进行有目的定向改变的遗传改良,以此来改善大豆的产量、品质和抗逆能力。但大豆与其他作物相比,转基因研究的主要问题是转化率低,重复性差。农杆菌介导法是目前大豆转基因中发展较为成熟的方法,但尚不能满足大豆育种和功能基因研究的需要,对转化过程中影响大豆子叶节再生的因素做进一步优化研究具有重要的应用价值。本研究利用农杆菌介导的子叶节转化系统,将大豆光合作用相关基因GmDeg2转入大豆,以不定芽诱导率和不定芽伸长获得率为指标,采用四因素三水平的正交试验设计,分别对科丰6号、徐豆10号、菜豆5号的遗传转化条件(侵染时间、共培养PH值、共培养时间、诱导不定芽的6-BA浓度)进行优化分析,初步筛选出三个大豆品种的最优遗传转化体系。直观分析、Duncan多重比较分析结果表明,科丰6号的最佳转化条件是侵染时间为30min、共培养pH值为5.6、共培养时间为3d、诱导不定芽6-BA的浓度为1.6mg/L,其不定芽诱导率为87.7%、不定芽伸长获得率为33%;徐豆10号的最佳转化条件是侵染时间为20min、共培养pH值为5.4、共培养时间为4d、诱导不定芽6-BA的浓度为1.6mg/L,其不定芽诱导率为55.7%、不定芽伸长获得率为24.3%;菜豆5号最佳转化条件是侵染时间为30min、共培养pH值为5.6、共培养时间为3d、诱导不定芽6-BA的浓度为1.6mg/L,其不定芽诱导率为36.7%、不定芽伸长获得率为11.7%。对三种基因型大豆的最佳不定芽诱导率和不定芽伸长获得率进行单因素分差分析,得出不同大豆基因型之间的不定芽诱导率和不定芽伸长获得率存在显著差异,其中科丰6号最适于作大豆再生植株的供体材料,其次为徐豆10号、菜豆5号。可见不同基因型大豆所需的遗传转化条件不一样,在遗传转化中应根据不同的大豆基因型选择最适合的转化体系,从而获得较高的植株再生频率。

关键词：大豆(Glycine max L.Merr) 农杆菌介导遗传转化体系优化

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果糖的吸收代谢以及与健康的关系

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2016年第3期42卷 265-272页

作者：蔡雯雯李铎浙江大学食品科学与营养系杭州310058

果糖是一种单糖,由于其甜度大于葡萄糖和蔗糖,近年来高果糖浓度的果葡糖浆被广泛用于食品工业中。因此,近年来果糖对人体健康的影响备受关注。本研究总结了果糖的主要食物来源、吸收和代谢,与相关疾病之间的关系,以及推荐摄入量。果糖... 详细信息

果糖是一种单糖,由于其甜度大于葡萄糖和蔗糖,近年来高果糖浓度的果葡糖浆被广泛用于食品工业中。因此,近年来果糖对人体健康的影响备受关注。本研究总结了果糖的主要食物来源、吸收和代谢,与相关疾病之间的关系,以及推荐摄入量。果糖和葡萄糖不同,它的主要代谢器官是肝,除部分代谢为葡萄糖外,主要代谢为脂肪酸,后者进一步合成甘油三酯。肝中甘油三酯沉积会增加脂肪肝的发病风险和胰岛素抵抗,其余甘油三酯可被转运至其他组织器官,增加胰岛素抵抗、肥胖和心血管系统疾病的发病风险。世界卫生组织建议在整个生命历程中减少游离糖摄入量,成人和儿童游离糖摄入量应减至摄入总能量的10%以内。如能进一步将其降至低于摄入总能量的5%,则对健康有更多益处。

关键词：果糖胰岛素抵抗高血压

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卡西尔语言与神话理论研究

卡西尔语言与神话理论研究

作者：蔡雯雯贵州大学

学位级别：硕士

神话是卡西尔整个符号形式哲学体系的切入点，即使像神话这种看上去似乎荒诞不经的东西同样也是人类文化的一个组成部分，他所说的神话并不是我们通常所理解的仅仅作为神话故事的神话，他主要借助作为文化类型的神话以及对文化类型的分... 详细信息

神话是卡西尔整个符号形式哲学体系的切入点，即使像神话这种看上去似乎荒诞不经的东西同样也是人类文化的一个组成部分，他所说的神话并不是我们通常所理解的仅仅作为神话故事的神话，他主要借助作为文化类型的神话以及对文化类型的分析，考察人对神的观念是如何发生的，在这一点上语言与神话就连接在了一起。在古希腊，逻各斯一词本身就兼有言语与理性双重含义，许多西方哲学家因此强调语言与逻辑之间的关系，认为理性是人区别于动物的唯一特征，卡西尔则主张用“人是符号的动物”来取代“人是理性的动物”，符号是人的意义世界的组成部分，人并不是生活在单纯的物理世界之中，而是生活在符号世界之中。语言、神话、宗教、艺术、科学都是人类文化符号的组成部分，任何一种符号形式都不可能完全反映出整个人类文化，所有的文化符号形式在建构人类文化的过程中起着重要作用。

关键词：符号神话神话思维语言隐喻

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瑞安市农村社会保障问题研究

瑞安市农村社会保障问题研究

作者：蔡雯雯江西农业大学

学位级别：硕士

本文采用文献研究法、调查法、总结法等研究方法从农村医疗保障、农村养老保障和农村社会救助3方面阐述了瑞安市农村社会保障的现状,并着重分析了制约瑞安市农村社会保障建设的关键因素,同时提出了瑞安市农村社会保障建设可持续发展的对... 详细信息

本文采用文献研究法、调查法、总结法等研究方法从农村医疗保障、农村养老保障和农村社会救助3方面阐述了瑞安市农村社会保障的现状,并着重分析了制约瑞安市农村社会保障建设的关键因素,同时提出了瑞安市农村社会保障建设可持续发展的对策,旨在为瑞安市农村社会保障的进一步完善提供借鉴意义。1.从3个方面阐述瑞安市农村社会保障制度实施的现状:(1)农村医疗保障方面,群众受益面不断扩大,参合积极性得到提高,医药费用得到有效的控制,配套设施建设得到加强等,同时,也存在许多问题,如资金筹集困难、报销补偿水平低、医疗机构不健全和健康体检率低等;(2)农村养老保障方面,统筹推进了城乡居民社会养老保险制度和被征地农民的保障工作,但是还存在缺乏统一制度保障、资金来源单一,财政扶持力度小、基础养老金标准低和社保机构管理不完善等问题;(3)农村社会救助方面,救助信息系统、信息员队伍有效完善,救助标准和医疗救助水平也得到了提高,但是依然存在救助水平偏低、救助对象确定困难、缺乏有效监管等问题。2.制约瑞安市农村社会保障制度发展的主要因素有(1)农民思想意识薄弱,农村的“养儿防老”思想根深蒂固;(2)制度建设不健全,首先是城乡分割的户籍制度,制约了城市化进程的推进;其次是土地制度,失地农民政府在安置和补偿中没有给他们提供妥善的安排;(3)经济发展欠佳,经济落后的地区大部分生产原产品,加工增值能力弱,文化水平低,缺乏生产工作技能,没有就业优势,加之不断攀升的物价水平,他们的生活就更加困难;(4)政府责任缺失,瑞安市农村社会保障管理体制小,责任主体不明晰、管理不够科学和规范,而农村社会保障的资金来源又单一,部分偏远地区农民无力承担费用,导致参保率低等问题。3.完善瑞安市农村社会保障制度建设的策略有(1)建立覆盖城乡居民的社会保障体系;加快推进农村新型合作医疗保险和养老保险建设;加快失地等弱势群体的社会保障工作等;(2)发展农村经济,坚持政府多元化投入,加快农村基础设施建设和文化建设并且还要因地制宜提高农民收入;(3)加大宣传提高农民自我保障意识;(4)完善政府对农村社会保障建设的监管体系,明确民政部门工作职责,选拔专业的从业上岗人员,建立有效的农村社会保障专业人才储备机制和设立有效的监督渠径等。

关键词：农村社会保障农村医疗农村养老社会救助制度建设

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果糖和葡萄糖对健康人群急性反应研究

果糖和葡萄糖对健康人群急性反应研究

作者：蔡雯雯浙江大学

学位级别：硕士

背景和目的：果糖与肥胖、胰岛素抵抗和高血压之间的关系越来越引起重视。国内仍未有相关的临床研究报道。本课题的研究目的是研究葡萄糖和果糖的摄入对健康人群相关代谢指标的急性影响。方法：本试验是一个随机交叉双盲试验,杭州地区20... 详细信息

背景和目的：果糖与肥胖、胰岛素抵抗和高血压之间的关系越来越引起重视。国内仍未有相关的临床研究报道。本课题的研究目的是研究葡萄糖和果糖的摄入对健康人群相关代谢指标的急性影响。方法：本试验是一个随机交叉双盲试验,杭州地区20位(男性10人和女性10人)健康大学生,平均年龄为23.6岁纳入为试验对象,20人随机分成组A和组B两组。所有的志愿者在8小时隔夜禁食后,在第二日8：00时,组A和组B在五分钟内分别摄入300 ml浓度均为22.5%的果糖和葡萄糖溶液。在经过一个星期的洗脱期后,受试者在8小时隔夜禁食后,在第二日8：00时,组A和组B在五分钟内分别摄入300 ml浓度均为22.5%的葡萄糖和果糖溶液。试验过程中,分别在干预前和干预后0.5h、1h、2h以及3h时采集受试者血液;同时,在干预前和干预后1h、2h和3h时测量受试者血压,检测血清血糖、血脂、胰岛素、胰岛素c肽、一氧化氮、尿酸、乳酸脱氢酶、磷酸果糖激酶和醛醣还原酶等水平。用SPSS统计软件对数据进行分析。结果：一共18名志愿者最终完成试验(男性9人和女性9人)。葡萄糖组血糖水平与基线相比在0.5h和1h时显著升高(p≤0.01和p≤0.001);葡萄糖组胰岛素水平在0.5h、1h和2h时显著升高(p≤0.001、p≤0.01和p≤0.01);葡萄糖组胰岛素c肽水平在0.5h、1h和2h时显著升高(p≤0.001、p≤0.001和p≤0.05)。果糖组的血糖水平与基线相比没有显著变化;果糖组胰岛素水平在0.5h比基线水平显著高(p≤0.05);果糖组胰岛素c肽在1h时比基线水平显著性升高。血糖、胰岛素和胰岛素c肽3h-AUC果糖组比葡萄糖组显著低(p≤0.001、p≤0.001和p≤0.001)。葡萄糖组和果糖组的甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白与基线相比均无显著变化。甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白3h-AUC葡萄糖组和果糖组之间无显著差异。果糖组血清中一氧化氮水平与基线相比在1h和2h显著降低(p≤0.05和p≤0.05);果糖组尿酸水平在1h和2h时显著升高(p≤0.01和p≤0.05);果糖组收缩压在1h比显著性升高(p≤0.05);舒张压无显著变化。葡萄糖组的尿酸、一氧化氮、收缩压和舒张压与基线相比均无显著变化。一氧化氮3h-AUC果糖比葡萄糖组显著低(p≤0.05);尿酸和收缩压3h-AUC果糖组比葡萄糖组显著高(p<0.05和p≤0.051;舒张压3h-AUC两组之间则无显著差异;果糖组血清中乳酸脱氢酶的水平与基线相比在0.5h和1h显著升高(p≤0.05和p≤0.05);果糖组醛醣还原酶水平在1h显著升高(p≤0.05)。葡萄糖组血清中乳酸脱氢酶和醛糖还原酶水平与基相比无显著变化;葡萄糖组磷酸果糖激酶水平与基线相比在1h时显著升高(p≤0.05)。乳酸脱氢酶3h-AUC果糖组比葡萄糖组显著升高(p≤0.05);醛醣还原酶3h-AUC果糖组比葡萄糖组显著高(p≤0.05)。磷酸果糖激酶3h-AUC葡萄糖组比果糖组显著高(p≤0.05)。结论：果糖和葡萄糖对血液中不同参数指标的影响显著不同。本研究第一次发现,果糖的摄入可以显著降低血清中一氧化氮水平和升高乳酸脱氢酶活性、醛糖还原酶水平。果糖可能会通过影响一氧化氮的产生,从而对血管内皮功能造成影响,影响血压的变化;然而,果糖和葡萄糖对高血压的影响仍需要慢性随机对照试验进一步的探究。

关键词：果糖急性高血压

我国非物质文化遗产保护路径研究 ——以民间法为视角

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我国非物质文化遗产保护路径研究 ——...

作者：蔡雯雯西北大学

学位级别：硕士

20世纪以来,我国的非物质文化遗产保护取得了明显的成效,关于“非遗”的立法也日趋完善,上至宪法法律,下至地方性法规,无不体现着对“非遗”保护的日益重视。然而,法律自身的局限性以及“非遗”固有的地域性等特点却导致国家法在其保护... 详细信息

20世纪以来,我国的非物质文化遗产保护取得了明显的成效,关于“非遗”的立法也日趋完善,上至宪法法律,下至地方性法规,无不体现着对“非遗”保护的日益重视。然而,法律自身的局限性以及“非遗”固有的地域性等特点却导致国家法在其保护过程中并不能达到面面俱到的效果,甚至根本无法渗入一些相对封闭的地区进行社会秩序的规范;另外,我国长期以来忽视对本土民间法探索的事实导致当前的国家立法与“非遗”保护的现实需求之间产生了许多不相适应的后果。为弥补国家法在“非遗”保护中的局限性,拓宽非物质文化遗产的保护路径,文章结合案例剖析了我国当前国家法的立法现状及不足,并在此前提下详细分析了民间法参与非物质文化遗产保护的可能性、适宜性及现实性。通过上述研究认为,国家法秩序之外的民间法也是非物质文化遗产保护的重要力量,因此有必要在我国现有立法的基础上,加强对民间法功能的关注和重视,发挥其对国家法的补充和修正作用。文章通过进一步研究民间法参与“非遗”保护的困境,从明确民间法的定位,在立法、司法过程中引入民间法合理成分,加强民间法自身的完善及学术界的研究等方面入手探讨了其在我国“非遗”保护中的适用思路,从而拓宽了我国“非遗”保护的研究视角。

关键词：非物质文化遗产国家法民间法传承人

基于剂量与通量同步预测的鼻咽癌自动放疗计划设计研究

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基于剂量与通量同步预测的鼻咽癌自动放疗计划设计研究

作者：蔡雯雯南方医科大学

学位级别：硕士