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基因编辑技术在斑马鱼中的应用及研究进展

基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 591-598页

作者：雷立芳蔡英桂王宏波吴秀山叶湘漓中南大学湘雅三医院长沙410013 湖南师范大学生命科学学院长沙410013 湖南师范大学医学院长沙410013

基因编辑技术通过对特定DNA片段的插入、敲除、修饰或替换等,实现对生物体中目标基因的编辑。与早期基因工程技术将遗传物质随机插入宿主基因组中的方式不同的是,基因编辑技术能够定点需要插入的位置,从而实现对生物体基因组特定位点的... 详细信息

基因编辑技术通过对特定DNA片段的插入、敲除、修饰或替换等,实现对生物体中目标基因的编辑。与早期基因工程技术将遗传物质随机插入宿主基因组中的方式不同的是,基因编辑技术能够定点需要插入的位置,从而实现对生物体基因组特定位点的准确修饰、人为地改造生物体的遗传信息,目前广泛应用于斑马鱼的基因组学、遗传发育和基因功能研究中。其方法包括诱变技术、Tol2转座子、Morpholino、ZFNs、TALEN和CRISPR/Cas系统等。本研究主要介绍了基因编辑技术的作用机理与发展概况。作为一种精准而高效的基因工程方法,基因编辑技术在近年来得到了飞速地发展。它既可以采用对特定基因的靶向突变来研究基因的功能,也可以通过将功能性基因插入并替代缺陷基因而用于某些遗传性疾病的基因治疗。可以肯定的是,基因编辑技术未来将在基础生物学、医学、生物技术等多个领域具有重要的研究价值和应用价值。

关键词：基因编辑斑马鱼 Morpholino ZFNs TALEN CRISPR/Cas系统

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DSBs修复通路的选择及其影响因素

基因组学与应用生物学 2018年第8期37卷 3619-3625页

作者：王宏波曾蓉王宇鹏蔡英桂吴秀山叶湘漓湖南师范大学医学院长沙410013 湖南师范大学生命科学学院长沙410081 中南大学湘雅二医院长沙410011 湖南省人民医院、湖南师范大学第一附属医院长沙410005

DSBs（DNA双链断裂）是细胞DNA在内外各种因素影响下产生的一种严重损伤,也是包括肿瘤在内的多种疾病发生发展的重要原因之一。为修复该损伤,机体形成了包括同源重组（HR）、非同源末端连接（NHEJ）等在内的多种修复通路;在不同情况下,... 详细信息

DSBs（DNA双链断裂）是细胞DNA在内外各种因素影响下产生的一种严重损伤,也是包括肿瘤在内的多种疾病发生发展的重要原因之一。为修复该损伤,机体形成了包括同源重组（HR）、非同源末端连接（NHEJ）等在内的多种修复通路;在不同情况下,机体对修复通路的选择受到多种因素的影响。近年来的研究表明,包括细胞类型、末端切除、细胞周期、损伤原因、损伤位置等在内的诸多因素对修复通路的选择均起到了重要的作用。本综述介绍了DSBs修复的常见通路,并对DSBs修复通路的影响因素的最新研究进展进行了综述。

关键词： DSBs 同源重组非同源末端连接修复通路

海南省2022年emm12型A族链球菌基因组及药物敏感性特征分析

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中国热带医学 2024年第6期24卷 659-663页

作者：孙初阳吴庆梓蔡英桂甘晓婷王素王吉晓张亚淋遇晓杰海南省疾病预防控制中心海南省预防医学科学院海南海口571129

目的了解海南emm12型A族链球菌(group A Streptococcus, GAS)基因组特征及对目前常用抗菌药物的敏感性,为猩红热等GAS相关疾病提供病原学数据。方法基于2022年海南省呼吸道症候群监测获得的咽拭子分离GAS菌株,应用高通量测序技术对所... 详细信息

目的了解海南emm12型A族链球菌(group A Streptococcus, GAS)基因组特征及对目前常用抗菌药物的敏感性,为猩红热等GAS相关疾病提供病原学数据。方法基于2022年海南省呼吸道症候群监测获得的咽拭子分离GAS菌株,应用高通量测序技术对所分离菌株进行基因组测序和emm基因分型、基因多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)、耐药基因与毒力基因预测,利用MEGA 10.1.8最大似然法(maximum likelihood, ML)绘制系统进化树。采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)进行药敏试验。结果 2022年海南呼吸道症候群监测分离的4株GAS分离株均为emm12/ST36型,毒力基因除emm基因外,共检测到7种超抗原基因speB(100%)、speI(75%)、speH(75%)、speC(100%)、ssa(100%)、sme Z(100%)、speG(100%)。所有菌株均携带大环内酯类耐药基因ermB和ermTM、四环素耐药基因tet(M),均不携带耐药基因mefA,对红霉素、克林霉素、四环素耐药率100%,对青霉素仍保持高度敏感。系统进化树分析显示,海南分离株均集中在同一分支上。结论 2022年海南GAS优势基因型为emm12型,MLST分型与emm分型具有一致性。携带的耐药基因与药敏实验结果一致,海南地区青霉素等β-内酰胺类药物可继续作为GAS临床治疗首选药物,需扩大菌株量进一步监测。

关键词：猩红热 A族溶血性链球菌 emm12型超抗原药物敏感性

海南省2023年1月至2024年3月新型冠状病毒变异监测分析

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中国热带医学 2024年

作者：崔蕾李丹丹邱丽孙初阳邝仕壮甘晓婷蔡英桂曾云婷王素魏昕马焱海南省疾病预防控制中心

目的分析2023年1月至2024年3月海南省本土病例新冠病毒变异监测资料，掌握优势流行分支动态变化趋势与人群特征，为新冠病毒感染及时预警风险与防控策略制定提供科学指导。方法收集2023年1月至2024年3月海南省新冠病毒病原学监测网络... 详细信息

目的分析2023年1月至2024年3月海南省本土病例新冠病毒变异监测资料，掌握优势流行分支动态变化趋势与人群特征，为新冠病毒感染及时预警风险与防控策略制定提供科学指导。方法收集2023年1月至2024年3月海南省新冠病毒病原学监测网络实验室报送的变异监测数据，并对优势进化分支动态流行趋势、感染病例人群特征、疾病严重程度等进行一般描述性分析。结果 2023年1月至2024年3月，共获得海南省2600例本土病例进化分支信息，均为奥密克戎变异株，涉及115种进化分支；依次经历2023年第01周至2024年第13周BA.5.2.48与BF.7竞争流行、2023年第16周至2023年第52周XBB及其亚分支优势流行、2024年第1周至第13周BA.2.86及其亚分支优势流行三个阶段，伴随OmicronBA.2.75呈小规模散发流行；所有分支感染病例年龄构成中，19-60岁年龄组占比均为第1位，＜4岁年龄组均最低，无明显性别差异，临床疾病严重程度均以无症状及轻型为主。结论新型冠状病毒不同优势进化分支呈依次替代流行特征，临床疾病严重程度逐渐降低。未来应重点关注61岁及以上老年人群或18～60岁有基础疾病人群，持续加强新冠病毒变异监测与分析，及时掌握优势进化分支动态流行趋势，关注新型变异分支免疫原性及疫苗保护力变化，为疫苗研发、临床治疗、防控与免疫策略制定提供科学指导。

关键词：新型冠状病毒奥密克戎监测分析

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湘莲中产耐酸性α-淀粉酶菌株的分离及鉴定

中国生物制品学杂志 2014年第8期27卷 1006-1009页

作者：凌玲金元昌张建贺蔡英桂苏壬香吴银亮湖南科技大学生命科学学院湖南湘潭411201

目的从湘莲中分离产耐酸性α-淀粉酶菌株,并对其进行鉴定。方法采用淀粉富集培养基分离湘莲中产α-淀粉酶菌株,通过形态学、生理生化分析及16S rDNA序列分析进行鉴定;在不同pH(3.20、3.38、3.56、3.85、4.15和4.45)条件下培养筛选出的菌... 详细信息

目的从湘莲中分离产耐酸性α-淀粉酶菌株,并对其进行鉴定。方法采用淀粉富集培养基分离湘莲中产α-淀粉酶菌株,通过形态学、生理生化分析及16S rDNA序列分析进行鉴定;在不同pH(3.20、3.38、3.56、3.85、4.15和4.45)条件下培养筛选出的菌株,测定酶活力,确定产酶的最适pH;在不同温度(25、30、35和40℃)条件下培养耐酸性α-淀粉酶产生菌,测定酶活力,确定产酶的最适温度;用不同碳源(蔗糖、淀粉和葡萄糖)和不同氮源[牛肉膏、(NH4)2SO4、柠檬酸氢二铵、柠檬酸三铵和蛋白胨]培养耐酸性α-淀粉酶产生菌,测定酶活力,确定产酶的最适碳源和氮源。结果从湘莲样品中筛选出2株酶活力较高的菌株,酶活力分别为376.21和395.62 U/ml,分别编号为LL5和LL9,2株菌株均为解淀粉芽胞杆菌。菌株LL5产α-淀粉酶的最适pH为3.56,最适温度为34℃,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为柠檬酸三铵,为耐酸性α-淀粉酶产生菌。结论成功从湘莲中分离出1株产耐酸性α-淀粉酶菌株LL5。

关键词：湘莲淀粉酶分离

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羊种布鲁氏菌分离株体外抗生素敏感性研究

疾病监测 2021年第12期36卷 1286-1290页

作者：杨晓雯姜霞安翠红孙长云李巧玲李文博蔡英桂姜海中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 河北省疾病预防控制中心河北石家庄050021 陕西省疾病预防控制中心陕西西安710054 广东省疾病预防控制中心广东广州511430 湘潭市疾病预防控制中心湖南湘潭411100 四川省疾病预防控制中心微生物检验所四川成都610041 海南省疾病预防控制中心海南海口570203

目的为研究布鲁氏菌临床分离株常见抗生素的敏感性。方法本研究利用肉汤稀释法检测布鲁氏菌临床分离株对临床常见布鲁氏菌病治疗药物的最小抑菌浓度(MIC),并利用单因素方差分析比较不同分离省份的菌株药物敏感性差异。结果在现有的布鲁... 详细信息

目的为研究布鲁氏菌临床分离株常见抗生素的敏感性。方法本研究利用肉汤稀释法检测布鲁氏菌临床分离株对临床常见布鲁氏菌病治疗药物的最小抑菌浓度(MIC),并利用单因素方差分析比较不同分离省份的菌株药物敏感性差异。结果在现有的布鲁氏菌耐药拐点下,本研究涉及的布鲁氏菌临床分离株常见治疗药物的MIC均在敏感范围内,其中多西环素(0.06~0.12μg/mL)、四环素(0.06~0.25μg/mL)、庆大霉素(0.015~0.03μg/mL)的MIC范围较低;分析分离株氨苄西林MIC值发现,四川省与陕西省(P=0.0001)、河北省(P=0.0001)和湖南省(P=0.04)均差异显著,河北省与广东省(P=0.02)差异显著。另外,本研究还发现了红霉素(32μg/mL)、复方新诺明(0.25/4.8μg/mL)MIC值较高的分离株。结论本研究涉及的布鲁氏菌临床分离株对临床常见治疗药物敏感,但部分分离株对复方新诺明等的敏感性较低,应加强监测,防止菌株耐药。本研究为我国布鲁氏菌耐药水平监测提供基础数据,同时为抗性菌株的筛查及防控提供思路。

关键词：布鲁氏菌最小抑菌浓度复方新诺明

海南省Y群脑膜炎奈瑟菌流行病学、分子特征及药敏性分析

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中国热带医学 2024年第10期24卷 1238-1242页

作者：王少玲黄雅靖李丹丹吴庆梓蔡英桂邝仕壮劳世军马焱海南省疾病预防控制中心海南省预防医学科学院海南海口571129

目的了解海南省Y群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)流行病学、分子特征及对抗菌药物的敏感性,为Y群流行性脑脊髓膜炎(流脑)的预防控制和治疗提供科学依据。方法对海口市2022年5月发现的2例流脑病例患者血液标本和密切接触者咽... 详细信息

目的了解海南省Y群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)流行病学、分子特征及对抗菌药物的敏感性,为Y群流行性脑脊髓膜炎(流脑)的预防控制和治疗提供科学依据。方法对海口市2022年5月发现的2例流脑病例患者血液标本和密切接触者咽拭子进行脑膜炎奈瑟菌分离培养、生化和普通聚合酶链反应种属鉴定,将得到的Nm用玻片凝集法和荧光聚合酶链反应进行血清分群和基因分群;用二代全基因组测序技术对7株Nm进行全基因组测序;用E-test试纸条法进行13种抗菌药物敏感性试验。结果2例患者都是青少年。从患者和密切接触者中共获得7株Nm分离株,其中2株来自患者,5株来自密切接触者。7株Nm血清分群结果与基因分群结果一致,均是Y群Nm。所有分离株基因序列GC含量在51.84%~51.86%,序列型是ST-1655型,属于ST-23克隆群。外膜蛋白porA(P1.5-1,10-1)、porB(3-117)和fetA(F4-1)基因分型结果均一致。7株Nm的耐药相关基因序列完全相同。所有菌株对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、氯霉素、阿奇霉素、米诺环素、利福平、环丙沙星、萘啶酸、左氧氟沙星敏感,对复方新诺明耐药。结论海南省已发现ST-1655型血清Y群Nm感染病例,应加强该地区流脑菌群监测,推广流脑ACWY群四价疫苗接种,防止Y群流脑发病和死亡。

关键词：流行性脑脊髓膜炎脑膜炎奈瑟菌 Y血清群序列型克隆群药物敏感性

2009-2022年海南省人间布鲁氏菌病流行病学特征分析

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疾病监测 2024年第3期39卷 285-289页

作者：谢永慧闫秀娟蔡英桂张玲罗艳李俊陈菁菁杜中华邱仁王南来邱丽海南省疾病预防控制中心海南海口570203

目的分析海南省2009-2022年人间布鲁氏菌病(布病)的流行病学特征,为制定针对性的布病预防控制策略提供依据。方法收集中国疾病预防控制信息系统中海南省2009-2022年人间布病报告数据和各监测点血清学监测数据,进行描述性流行病学分析... 详细信息

目的分析海南省2009-2022年人间布鲁氏菌病(布病)的流行病学特征,为制定针对性的布病预防控制策略提供依据。方法收集中国疾病预防控制信息系统中海南省2009-2022年人间布病报告数据和各监测点血清学监测数据,进行描述性流行病学分析。结果 2009-2022年海南省共报告布病140例,年均发病率为0.11/10万,发病率呈逐年上升趋势(χ^(2)=164.602,P<0.001)。发病以3-8月为主。全省17个市(县)(17/19,89.47%)有布病病例报告,以东方市、昌江黎族自治县、白沙黎族自治县、乐东黎族自治县、临高5个邻近的市(县)发病水平最高,发病市(县)数呈逐年增加趋势。男性年均报告发病率为0.13/10万,女性年均报告发病率为0.07/10万,差异有统计学意义(χ^(2)=21.174,P<0.001)。以30~69岁人群为主,占全部病例的77.85%。职业分布以农民为主,占53.57%。共开展重点职业人群血清学监测13 175人,检出阳性161例(阳性率1.22%)。养殖牛、羊、猪等家畜,肉类加工及屠宰等直接接触病畜及污染物等为感染的主要原因,占95.00%,食源性感染占2.86%。77.14%的病例在发病30 d内就诊。结论海南省人间布病的发病率呈逐年上升的趋势,迅速扩散到多个市(县),建议相关部门加强联防联控,根据流行病学特征,采取适当的控制措施。

关键词：布鲁氏菌病流行病学监测

利用DNA免疫技术制备ASB11蛋白的多克隆抗体

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激光生物学报 2018年第3期27卷 260-264,280页

作者：蔡英桂尹丽阳王宏波陈宇曾蓉吴秀山叶湘漓湖南师范大学医学院湖南长沙410013 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心湖南长沙410081 中南大学湘雅二医院湖南长沙410011

ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的c DNA构建p CAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,... 详细信息

ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的c DNA构建p CAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,肌肉注射入6-8周龄的BALB/c小鼠体内,诱导抗原蛋白的表达和免疫应答的发生。结果显示,制备的p CAGGS-P7/ASB11重组质粒具有较好的免疫原性;将提取的抗血清进行Western-blot和免疫荧光检测,显示所制备的多克隆抗体抗体效价为1∶400,抗血清抗体能特异的结合ASB11蛋白。本研究为后续的功能研究奠定了基础。

关键词： Asb11 多克隆抗体 DNA免疫技术