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重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

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四川大学学报（医学版） 2004年第6期35卷 832-835页

作者：蔡绍晖杜军黄宁王伯瑶暨南大学药学院广州510632 日本名古屋大学医学部保健学科四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室

目的　探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法　利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移... 详细信息

目的　探索杆状病毒表达系统 (BEVS)高效表达人 β-防御素 - 2 (h BD- 2 )的可行性及其技术路线。方法　利用特异性引物经 PCR扩增 ,从重组质粒 rpc DNA3.1/h BD- 2 /myc- His中扩增出完整重组 h BD- 2 /His基因片段。将此片段插入转移质粒 p Ac GHL T- A的多克隆位点中 ,构建成重组转移载体 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His。用该重组转移载体和多角体病毒 Ac NPV DNA共转染草地夜蛾细胞 (Sf2 1) ,二者在细胞内经过同源重组形成重组病毒 r Ac NPV/h BD- 2 /His。用终点稀释分析法检测感染上清重组病毒的感染效率。采用 Western印迹法通过特异性抗 - His抗体检测细胞及上清 h BD- 2 /His的表达。结果　目的基因 h BD- 2 /His正确地插入 BEVS系统的转移载体。经 rp Ac GHL T- A/h BD- 2 /His和 Ac NPV DNA共转染的 Sf2 1细胞有较高滴度的重组病毒 r Ac NPVh BD- 2 /his存在。被共转染的 Sf2 1细胞的可溶性蛋白 ,在相对分子质量约 4 7.5× 10 3处有强反应条带显示 ,其大小与根据测序结果所推测的 h BD- 2融合肽相对分子质量接近。培养上清分别在相对分子质量约 4 0× 10 3和 30× 10 3处有强反应条带显示。结论　可利用 BEVS系统作为高效表达重组 h BD- 2的生物反应器。

关键词：人类β-防御素-2基因基因重组杆状病毒表达系统草地夜蛾细胞

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β-榄香烯抗肿瘤作用的基础与临床研究

中药材 2006年第1期29卷 93-97页

作者：花文峰蔡绍晖暨南大学药学院临床药理教研室广东广州510632

β-榄香烯是温莪术抗肿瘤作用的主要活性成分,具有抗瘤谱广泛,疗效确切,毒副作用轻微,能明显提高肿瘤患者生存质量等突出优点。本文就β-榄香烯抗肿瘤作用的基础研究与临床应用的现状及其亟待解决的问题作一综述。

关键词： β-榄香烯温莪术抗肿瘤作用

重组人β-防御素-2基因COS-7细胞的转染表达

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中国病理生理杂志 2001年第8期 99-100页

作者：蔡绍晖黄宁王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室

目的:通过构建两种SV40系列的重组载体,即N端带Flag标签的重组hBD-2基因和C端带Myc和6xHis双标签的重组hBD-2,并转染COS-7细胞,探索建立既能持续有效地表达和分泌hBD-2、其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可... 详细信息

目的:通过构建两种SV40系列的重组载体,即N端带Flag标签的重组hBD-2基因和C端带Myc和6xHis双标签的重组hBD-2,并转染COS-7细胞,探索建立既能持续有效地表达和分泌hBD-2、其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线.方法与结果:(1)将hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒***2B构建出hBD-2的上游带Flag报告基因的重组表达载体***2B/hBD-2,经DNA测序证明:hBD-2cDNA片段的插入方向和其全长cDNA的碱基组成顺序均准确无误.(2)hBD-2全长cDNA片段插入编码双重标签基因Myc和6xHis的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(+),构建出C端带Myc和6xHis双重标签的重组真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)/***测序结果表明:hBD-2cDNA片段插入方向和全长cDNA的碱基组成顺序均准确无误.(3)采用脂质体转染法分别将以上两种重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析hBD-2的表达情况.并检测经重组真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2转染细胞的可溶性蛋白及其培养上清的抗菌活性.(4)采用RT-PCR法对经带Flag报告基因的重组表达载体***2B/hBD-2转染的COS-7细胞的总RNA进行RT-PCR扩增,结果扩增出一条约240 bp的cDNA片段,其大小与预测相符.经Western blot法检测到细胞可溶性蛋白在约10 kD处有强反应条带显示.(5)用特异性引物(hBD2p6/hBD2p7)对经pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2转染的COS7细胞的总RNA进行RT-PCR扩增,用抗标签基因His表达产物的特异性抗体,经Western blot法检测到细胞蛋白在约10 kD处有强反应条带显示,其大小与该重组质粒结构中由pCMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量(10.1)相符.双层肉汤琼脂平板扩散法抑菌试验结果表明:分别与正常COS-7细胞的细胞可溶性蛋白及其培养上清比较,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2的COS-7细胞的细胞可溶性蛋白及其培养上清在金黄色葡萄球菌质控菌株25 923的平板上形成明显的抑菌环.结论:(1)N端带Flag标签基因重组真核表达载体***2B/hBD-2已被成功构建和转染COS-7细胞.通过RT-PCR法和Western blot法证实hBD-2基因已在COS-7细胞内持续有效地表达.(2)C端带双重标签基因Myc和6xHis的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2已被成功构建和转染COS-7细胞.通过RT-PCR法、Western blot法和体外抗菌实验证实,该系统不仅能有效地表达和分泌具抗菌活性hBD-2,也为其表达产物的检测、分离纯化提供了必要条件.

关键词：人β-防御素转染 COS-7 细胞基因

重组人β-防御素-2基因的植物表达载体的建立

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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 385-389页

作者：蔡绍晖余懋群杨晓鹃杜军黄宁王伯瑶暨南大学药学院广州510632 中国科学院成都生物研究所农业高新技术与育种研究室日本名古屋大学医学部保健学科四川大学华西医学中心感染与免疫研究室

目的　运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法　将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x Hi... 详细信息

目的　运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法　将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ,确定根癌农杆菌的阳性克隆。重组 h BD- 2通过转化阳性的根癌农杆菌被导入小麦幼胚愈伤组织细胞 ,经潮霉素进行抗性基因筛选 ,获得抗性愈伤组织。结果　酶切分析、PCR验证和 DNA测序等证据表明 :C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2已被正确地插入 p CAMBI-A13 0 4载体中 ,并位于 Ca MV 3 5 S与 Nos终止子之间 ,提示重组 h BD- 2 / His基因的植物表达载体 rp CAMBI-A13 0 4/ h BD- 2 / His已被成功构建。卡那霉素抗性基因筛选和 PCR检测显示 :rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His已成功转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,阳性克隆菌株已获得。潮霉素抗性筛选结果提示 :h BD- 2基因被导入小麦幼胚愈伤组织细胞。结论　本研究为进一步培育 h BD-

关键词：重组人β-防御素-2基因植物表达载体植物转基因技术可能性技术路线

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细胞微囊技术及其在基因治疗领域的研究进展

生物医学工程学杂志 2006年第6期23卷 1355-1358页

作者：李晓玲蔡绍晖暨南大学药学院广州510632

利用重组工程细胞进行基因治疗无疑为多种难治性疾病的有效治疗提供了新的思路,但宿主对异源细胞产生的移植排斥反应却是其在临床上应用的主要障碍。现代细胞微囊技术因其具有良好的免疫隔离屏障作用,使克服这一障碍成为可能。近年来,... 详细信息

利用重组工程细胞进行基因治疗无疑为多种难治性疾病的有效治疗提供了新的思路,但宿主对异源细胞产生的移植排斥反应却是其在临床上应用的主要障碍。现代细胞微囊技术因其具有良好的免疫隔离屏障作用,使克服这一障碍成为可能。近年来,细胞微囊技术在基因治疗方面的发展迅速,已在血友病,帕金森病、肿瘤等多种难治性疾病的治疗应用中显示出广阔的应用前景。本文就细胞微囊技术的微囊膜材料、制作工艺、微囊内重组细胞的构建以及其在基因治疗方面的研究作一综述。

关键词：细胞微囊技术基因工程细胞基因治疗

松萜宁胶囊的镇痛作用及对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用

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华西药学杂志 1999年第2期14卷 85-89页

作者：蔡绍晖唐琼刘于宾朱玲华西医科大学基础医学院

用扭体法及热板法考察松萜宁胶囊的镇痛作用，求得松萜宁胶囊小鼠镇痛作用的ＥＤ５０。并进一步采用剂量递增方法形成吗啡依赖模型，用纳洛酮催促戒断，以评价松萜宁胶囊对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用。结果表明，松萜宁胶... 详细信息

用扭体法及热板法考察松萜宁胶囊的镇痛作用，求得松萜宁胶囊小鼠镇痛作用的ＥＤ５０。并进一步采用剂量递增方法形成吗啡依赖模型，用纳洛酮催促戒断，以评价松萜宁胶囊对吗啡依赖性小鼠、大鼠催促戒断的治疗作用。结果表明，松萜宁胶囊具有一定程度的镇痛作用，其ＥＤ５０为６１．２８ｍｇ／ｋｇ；其对吗啡依赖性小鼠催促戒断后出现的跳跃、体重减轻等有一定程度的抑制作用；能明显抑制吗啡依赖性大鼠异常姿势、激惹、咬牙、流泪、腹泻、流涎等催促戒断反应症状（评分值Ｐ＜０．０１～０．００１），且能抑制大鼠体重减轻（Ｐ＜０．００１）。

关键词：松萜宁胶囊吗啡依赖催促戒断镇痛药物疗法

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舒必利消除小鼠对吗啡的条件性位置偏爱

中华精神科杂志 1998年第4期31卷 213-214页

作者：刘闯蔡绍晖彭英黄明生华西医科大学附属第一医院心理卫生研究所

目的对阿片类成瘾觅药行为的药物干预的可能性进行探索。方法将４０只雄性昆明种小鼠随机分为盐水组、吗啡组（９ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）、舒必利（２０ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）＋吗啡组、舒必利（３０ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）＋吗啡组，... 详细信息

目的对阿片类成瘾觅药行为的药物干预的可能性进行探索。方法将４０只雄性昆明种小鼠随机分为盐水组、吗啡组（９ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）、舒必利（２０ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）＋吗啡组、舒必利（３０ｍｇ／ｋｇ，皮下注射）＋吗啡组，每组１０只，观察多巴胺Ｄ２受体拮抗剂舒必利对吗啡所致小鼠条件性位置偏爱的效应。结果吗啡组在相应的箱体中停留的时间较对侧显著延长（Ｐ＜０．０１）。盐水组、舒必利２０ｍｇ／ｋｇ＋吗啡组、舒必利３０ｍｇ／ｋｇ＋吗啡组与吗啡组之间比较，显示吗啡组在其相应的箱体中停留的时间显著增加（Ｐ＜０．０５），而其它组无显著增加。结论提示预先给予舒必利能消除吗啡产生的条件性位置偏爱。

关键词：吗啡依赖舒必利受体多巴胺药物疗法

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颇利肝胶囊对小鼠免疫功能的影响

华西医科大学学报 1999年第1期30卷 101-103页

作者：陈嘉钰蔡绍晖包定元肖蓉华西医科大学基础医学院药理学教研室华西医科大学制药厂

为研究颇利肝胶囊（ＰＬＧＣ）对小鼠免疫功能的影响，分别观察了ＰＬＧＣ对小鼠巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素的影响，以及对巨噬细胞分泌白介素－１、白介素－２的影响。结果：实验组吞噬指数和吞噬系数均较对照组明显升高（Ｐ＜０．... 详细信息

为研究颇利肝胶囊（ＰＬＧＣ）对小鼠免疫功能的影响，分别观察了ＰＬＧＣ对小鼠巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素的影响，以及对巨噬细胞分泌白介素－１、白介素－２的影响。结果：实验组吞噬指数和吞噬系数均较对照组明显升高（Ｐ＜０．０１）；５０ｍｇ／ｋｇ和１００ｍｇ／ｋｇ实验组的半数溶血值较对照组明显升高（Ｐ＜０．０１）；实验组ＰＬＧＣ可恢复由环磷酰胺所抑制的小鼠巨噬细胞分泌白介素－１的能力；实验组较对照组显著提高小鼠脾细胞生成白介素－２的能力（Ｐ＜０．０５～０．０１）。结果显示。

关键词：病毒性肝炎颇利肝胶囊吞噬功能免疫功能小鼠

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以己糖激酶Ⅱ为靶点治疗肿瘤的研究进展

华西药学杂志 2011年第3期26卷 288-290页

作者：张欢黄思超蔡绍晖暨南大学药学院广东广州510632

己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)作为糖酵解过程的关键限速酶,在肿瘤的存活、增殖、恶性转移及药物耐受等方面发挥着重要的作用。文中就肿瘤中HKⅡ的生物学特征及功能和以HKⅡ为靶点治疗肿瘤的研究进展做一综述。

关键词：己糖激酶Ⅱ 糖酵解抗凋亡耐药靶向治疗