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红毛藻藻红蛋白ACE抑制肽的制备

红毛藻藻红蛋白ACE抑制肽的制备

中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：伍强孙乐常蔡秋凤翁凌沈建东张凌晶曹敏杰集美大学食品与生物工程学院

本研究以红毛藻为原料,通过35-50%硫酸铵盐析及DEAE-Sepharose阴离子交换柱,纯化获得高纯度的藻红蛋白,其纯度系数A565/A280为5.1。利用猪胃蛋白酶和胰酶对藻红蛋白进行分步酶解,以制备藻红蛋白ACE抑制肽。藻红蛋白酶解产物ACE抑制活性I... 详细信息

本研究以红毛藻为原料,通过35-50%硫酸铵盐析及DEAE-Sepharose阴离子交换柱,纯化获得高纯度的藻红蛋白,其纯度系数A565/A280为5.1。利用猪胃蛋白酶和胰酶对藻红蛋白进行分步酶解,以制备藻红蛋白ACE抑制肽。藻红蛋白酶解产物ACE抑制活性IC为186.95μg/mL,凝胶过滤色谱法测得分子量在3 kDa以下的小肽含量为91.8%。采用Sephadex G-15凝胶柱、反相高效液相色谱等一系列柱层析技术,从该酶解产物中分离纯化获得2个高纯度的ACE抑制肽,经N-端测序确定其氨基酸序列分别为ALLAGDPSVLED和VVGGTGPVDEWGIAGA,它们对ACE抑制活性IC分别为57.2μg/mL和66.2μg/mL。由NBCI数据库序列比对结果获知,ALLAGDPSVLED来自藻红蛋白β-亚基,VVGGTGPVDEWGIAGA来自藻红蛋白α-亚基。本研究制备的藻红蛋白ACE抑制肽在功能性食品的开发利用方面具有广阔前景。

关键词：红毛藻藻红蛋白 ACE抑制肽纯化

欧洲鳗鲡胃蛋白酶原的分离纯化与酶的性质研究

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欧洲鳗鲡胃蛋白酶原的分离纯化与酶的性质研究

2009年中国水产学会学术年会

作者：吴涛孙乐常杜翠红蔡秋凤张其标苏文金曹敏杰集美大学生物工程学院上海海洋大学食品学院

胃蛋白酶是天冬氨酸蛋白酶家族中专门水解蛋白质中疏水性氨基酸残基的肽链内切酶,在鱼体内起着重要的生理和消化功能。在低温下仍然具有高活性的鱼体胃蛋白酶对食品加工、鱼类饵料配制具有重要意义。但是,迄今为止国内外对淡水鱼胃蛋白... 详细信息

胃蛋白酶是天冬氨酸蛋白酶家族中专门水解蛋白质中疏水性氨基酸残基的肽链内切酶,在鱼体内起着重要的生理和消化功能。在低温下仍然具有高活性的鱼体胃蛋白酶对食品加工、鱼类饵料配制具有重要意义。但是,迄今为止国内外对淡水鱼胃蛋白酶的报道较少。本研究以欧洲鳗鲡为材料,通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel离子交换层析以及Sephacryl S-200、Superdex 75凝胶过滤层析等方法从欧洲鳗鲡胃内纯化得到3种胃蛋白酶原。SDS-PAGE显示纯化得到的3种胃蛋白酶原(PG-Ⅰ,PG-Ⅱ和PG-Ⅲ)和相应的胃蛋白酶(P-Ⅰ,P-Ⅱ和P-Ⅲ)的分子量分别约为36,30;37,30和37,30 kDa。以酸变性牛血红蛋白为底物,3种胃蛋白酶的最适pH分别为3.5,2.5和2.5,最适温度分别为40,40和35℃。这3种胃蛋白酶对酸变性血红蛋白的Km值和kcat分别为:8.8×10-5 mol/L,23.7 s-1;9.2×10-5mol/L,19.4 s-1:7.0×10-5 mol/L和34.4 s-1:kcat/Km依此是2.7×105 mol-1·L·s-1,2.1×105 mol-1·L·s-1和4.9×105 mol-1·L·s-1。用大鼠抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ,PG-Ⅲ和PG-Ⅳ多克隆抗体作为一抗,分别对这3种胃蛋白酶原进行Western blot分析,结果显示PG-Ⅱ,PG-Ⅲ均能与4种抗黄鳍鲷多抗发生免疫交叉反应,PG-I只与抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ多克隆抗体发生免疫交叉反应。本研究为胃蛋白酶的开发利用提供了理论依据,并为这种极具经济价值鱼类的消化生理研究提供重要的参考价值。

关键词：欧洲鳗鲡胃蛋白酶原胃蛋白酶纯化性质研究

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南美白对虾组织蛋白酶L的纯化及性质分析

南美白对虾组织蛋白酶L的纯化及性质分析

中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：颜龙杰麻金花蔡秋凤张凌晶刘光明苏文金曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心

南美白对虾即便在低温贮藏过程中肌原纤维蛋白也容易发生降解,引起虾肉质构的下降。本研究通过硫酸铵盐析和SP-Sepharose阳离子交换层析柱结合的方法,从南美白对虾消化腺中纯化得到一种组织蛋白酶L。SDS-PAGE结果显示该酶的分子量约为31... 详细信息

南美白对虾即便在低温贮藏过程中肌原纤维蛋白也容易发生降解,引起虾肉质构的下降。本研究通过硫酸铵盐析和SP-Sepharose阳离子交换层析柱结合的方法,从南美白对虾消化腺中纯化得到一种组织蛋白酶L。SDS-PAGE结果显示该酶的分子量约为31 ku,肽质量指纹图谱分析得到112个氨基酸残基,与报道的南美白对虾组织蛋白酶L序列的相似性为100%。运用Z-Phe-ArgMCA荧光底物检测酶活力,发现该酶的最适温度和最适pH分别为35℃和5.5。组织蛋白酶L在0-40℃以及pH 5.5-5.5之间酶活力比较稳定。半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64对其有明显的抑制作用,而金属蛋白酶抑制剂EDTA和EGTA对其有激活作用。Fe、Co、Cu、Mg、Zn等二价金属离子对其有一定程度的抑制作用,而K+对其有一定的激活作用。进一步研究发现,组织蛋白酶L在37℃和4℃均能够使对虾肌原纤维蛋白发生降解,推测其可能参与虾类贮藏过程中肌原纤维蛋白的降解。

关键词：南美白对虾组织蛋白酶L 纯化降解

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水产食物过敏原及其抗原表位的研究进展

中国渔业质量与标准 2015年第5期5卷 1-8页

作者：张永霞杨阳蔡秋凤孙乐常曹敏杰刘光明集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

近年来食物引起的过敏性疾病发病率持续增高,严重影响了人们的生活质量。水产品是中国主要的致敏性食物,且东部沿海地区过敏发病率较高。已发现的水产食物过敏原有小清蛋白(parvalbumin)、原肌球蛋白(tropomyosin)、精氨酸激酶(arginine... 详细信息

近年来食物引起的过敏性疾病发病率持续增高,严重影响了人们的生活质量。水产品是中国主要的致敏性食物,且东部沿海地区过敏发病率较高。已发现的水产食物过敏原有小清蛋白(parvalbumin)、原肌球蛋白(tropomyosin)、精氨酸激酶(arginine kinase)、肌钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein)、肌球蛋白轻链(myosin light chain)、肌钙蛋白C(troponin C)和磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase)等。水产食物过敏反应存在免疫交叉性,过敏原的抗原表位是引发过敏反应的基础,表位组成和空间构型等特征决定了抗原的特异性。本文着重对国内外水产食物过敏原及其抗原表位的研究现状进行了概述,以期为水产食物过敏疾病诊断治疗和低致敏性食品开发提供指导。

关键词：水产品食物过敏过敏原抗原表位

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生物工程专业课程双语教学的改革与实践

集美大学学报（教育科学版） 2011年第4期12卷 110-112页

作者：刘静雯曹敏杰朱艳冰蔡秋凤李利君杜翠红邱晓燕集美大学生物工程学院福建厦门361021

开展双语教学既是我国高等教育与国际接轨的要求,也是生物工程专业发展的迫切需要。以注重强化学生实际应用的技能、培养具有国际视野的应用型人才为目标,经过几年的努力,我们建立了"过渡型教学模式、多元化教学方法、阶段性强化实践"... 详细信息

开展双语教学既是我国高等教育与国际接轨的要求,也是生物工程专业发展的迫切需要。以注重强化学生实际应用的技能、培养具有国际视野的应用型人才为目标,经过几年的努力,我们建立了"过渡型教学模式、多元化教学方法、阶段性强化实践"的生物工程专业课程双语教学体系,并取得了一些成效。

关键词：双语教学生物工程教学模式

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网络时代小学班主任德育措施探讨

中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2021年第7期 33-33页

作者：蔡秋凤广东省湛江市第二十八小学广东湛江524000

在素质教育理念之下,对学生进行德育教育成为每个班主任班级管理中的重点。身为小学班主任,在小学班级管理中加强德育教育,探究网络时代下最为适合学生的班级管理形式,并融入德育方面的教育。促进学生以更为积极的心态融入到集体生活当... 详细信息

在素质教育理念之下,对学生进行德育教育成为每个班主任班级管理中的重点。身为小学班主任,在小学班级管理中加强德育教育,探究网络时代下最为适合学生的班级管理形式,并融入德育方面的教育。促进学生以更为积极的心态融入到集体生活当中,不断的提升自身的认知能力、对网络信息的判断能力,从而形成优良的品质和个人修养。本文以小学网络时代下,分析小学班主任德育实施措施。

关键词：网络时代德育教育班主任

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口虾蛄主要过敏原原肌球蛋白的免疫活性

水产学报 2010年第3期34卷 415-421页

作者：蔡秋凤王锡昌刘光明罗志湖曹敏杰上海海洋大学食品学院集美大学生物工程学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室

原肌球蛋白(TM)是甲壳类动物的主要过敏原,其氨基酸序列具有很高的保守性。本研究以口虾蛄为研究对象,旨在探明TM是否是其主要过敏原并对其相关性质进行研究。利用过敏患者血清通过免疫印迹法确定口虾蛄的主要过敏原分子量约为36ku。通... 详细信息

原肌球蛋白(TM)是甲壳类动物的主要过敏原,其氨基酸序列具有很高的保守性。本研究以口虾蛄为研究对象,旨在探明TM是否是其主要过敏原并对其相关性质进行研究。利用过敏患者血清通过免疫印迹法确定口虾蛄的主要过敏原分子量约为36ku。通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵盐析及加热等方法纯化了该主要过敏原。采用抗中华绒螯蟹TM多克隆抗体进行免疫学性质分析表明该蛋白为TM。抑制性免疫印迹和抑制性ELISA实验表明口虾蛄TM与凡纳滨对虾和锯缘青蟹等甲壳类动物的TM具有较强的免疫交叉反应,但与贝类动物杂色蛤的免疫交叉性较低。通过ELISA方法对甲壳类动物的TM进行定量测定,结果表明,口虾蛄肌肉中TM的含量约只有凡纳滨对虾TM含量的1/45,但仍具有一定的致敏性。

关键词：口虾蛄原肌球蛋白纯化免疫交叉反应定量

皱纹盘鲍Hdh-MMP-1基因cDNA的克隆及原核表达

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集美大学学报（自然科学版） 2016年第5期21卷 321-329页

作者：段雪昆杜翠红胡健健蔡秋凤刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 水产品深加工技术国家地方聚合工程研究中心福建厦门361021

利用同源克隆方法和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,从皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)肌肉组织中克隆得到基质金属蛋白酶-1基因(Hdh-MMP-1)c DNA全长序列(Gen Bank登录号:KR537291)。结果表明,Hdh-MMP-1 c DNA全长2136 bp,其中ORF长度为1551 bp,编码区含有516个氨基酸残基,预测其分子质量为58.94 ku,理论等电点为5.99。Hdh-MMP-1具有MMPs家族典型的N-端前肽区、催化区、铰链区和C-端类血红素结合区。利用SOPMA和SWISS-MODEL软件对该基因编码蛋白质高级结构进行了预测分析。氨基酸序列相似性结果显示,Hdh-MMP-1不仅与多种生物MMP-1基因具有序列相似性,且与某些软体动物和虫类的MMP-14及MMP-19也具有序列相似性。多序列比对结果显示,Hdh-MMP-1与红螺鲍、杂色鲍、美洲牡蛎的MMP-1相似性分别为95.29%、82.35%、38.85%。随后,构建了表达载体p ET28a-cat MMP-1,利用大肠杆菌原核表达系统,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功对该蛋白质催化区进行异源表达。

关键词：皱纹盘鲍基质金属蛋白酶 c DNA克隆生物信息学原核表达

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锯缘青蟹原肌球蛋白过敏者血清的筛选

集美大学学报（自然科学版） 2010年第3期15卷 185-189页

作者：李兵刘光明蔡秋凤黄园园苏文金曹敏杰集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室福建厦门361021

为了解集美大学学生的饮食及食物过敏情况,对在校学生进行了问卷调查.调查共分发了4 000份,主要涉及水产品食物过敏的种类、过敏症状等.调查收到有效问卷3 890份,应答率为97.3%.自诉过敏的学生为1 149人,约占29.5%.对水产品食物过敏的有... 详细信息

为了解集美大学学生的饮食及食物过敏情况,对在校学生进行了问卷调查.调查共分发了4 000份,主要涉及水产品食物过敏的种类、过敏症状等.调查收到有效问卷3 890份,应答率为97.3%.自诉过敏的学生为1 149人,约占29.5%.对水产品食物过敏的有545人(占自诉过敏的47.4%),其中31例经ELISA检测,IgE为对蟹的原肌球蛋白呈阳性反应(占水产品食物过敏的5.7%,占蟹过敏的11.3%).男女之间无统计学差异.自诉对蟹、虾、贝、鱼等水产品的过敏症状相似,多为皮疹和皮肤瘙痒.调查结果表明,蟹、虾、贝类和鱼是主要的水产品过敏食物.食物过敏症患者血清食物过敏原特异性IgE升高明显,采用ELISA检测法,方便,安全,准确,对临床确诊与防治食物过敏症有重要意义.

关键词：食物过敏水产品问卷调查 ELISA