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叉头状转录因子Foxp3重组腺病毒的构建及鉴定

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叉头状转录因子Foxp3重组腺病毒的构建及鉴定

作者：蔡永君浙江大学

学位级别：硕士

Foxp3是叉头样转录因子(Forkhead transcription factor)P亚家族的新成员。目前研究证实该基因特异性表达于固有CD4CD25调节性T细胞,并在该细胞的发育和功能维持中起重要作用,是CD4CD25调节性T细胞特异性标志物之一,并作为转录抑制因子... 详细信息

Foxp3是叉头样转录因子(Forkhead transcription factor)P亚家族的新成员。目前研究证实该基因特异性表达于固有CD4CD25调节性T细胞,并在该细胞的发育和功能维持中起重要作用,是CD4CD25调节性T细胞特异性标志物之一,并作为转录抑制因子参与免疫应答的调控。Foxp3包含叉头状结构域、CH锌指结构及亮氨酸拉链等保守序列,在与靶基因启动子和某些蛋白质结合上起着重要作用。近年来,人们通过构建Foxp3重组逆转录病毒、Foxp3转基因模型等方法对该基因的作用机制及临床应用展开了广泛的研究。实验发现Foxp3的异位表达在体外可诱导与固有CD4CD25调节性T细胞表型及作用相似的调节性T细胞的产生;诱导产生的调节性T细胞在体内可直接或间接抑制效应性T淋巴细胞、B淋巴细胞及某些抗原提呈细胞(如树突状细胞)等的增殖、分化和免疫应答,诱导体内免疫耐受的产生,对治疗某些自身免疫病及移植排斥反应有一定效果;随着研究的深入,该基因在肿瘤免疫的作用也越来越受到关注,有文献报道在某些肿瘤组织及周围淋巴结等处发现Foxp3的表达,为肿瘤逃逸机制的研究以及新型靶向制剂的开发提供了新思路。为更深入研究Foxp3的作用机制及诱导免疫耐受方面的应用,本实验利用AdEasyXL系统构建携带Foxp3的重组腺病毒,并行初步鉴定。方法:从小鼠胸腺组织获取约1.3kb大小的目的基因,克隆至穿梭载体pShuttle-IRES-hrGFP-1

关键词： Faxp3 重组腺病毒 Ad-Foxp3

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红豆杉细胞培养生产紫杉醇产量稳定性的探讨

广西植物 2002年第1期22卷 85-88页

作者：余龙江蔡永君兰文智华中科技大学生命科学与技术学院湖北武汉430074

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋... 详细信息

通过磷酸盐双饥饿和秋水仙碱这两种经典的同步化方法处理悬浮培养的红豆杉细胞 ,以实现培养物的均一性 ,并比较了同步化与非同步化细胞及不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量。结果表明 ,不同同步化方法处理的细胞紫杉醇产量有差异 :秋水仙碱同步处理处于中期的细胞紫杉醇产量高于非同步化细胞 ,而磷酸盐双饥饿同步处理处于间期的细胞紫杉醇产量则相反。这表明紫杉醇产量与培养物的均一性有关 ,且与细胞同步的周期时相有关 ,采用同步化方法来选择合适的细胞周期时相有利于紫杉醇产量的稳定 ,通过比较不同同步化方法处理对细胞生物量和

关键词：红豆杉细胞细胞培养紫杉醇产量稳定性同步化处理诱导子

正佳商业广场屋面桁架钢结构拼接和拉索施工技术

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四川建筑科学研究 2006年第6期32卷 229-232页

作者：蔡永君曾祥蓉胡远新广州市众城建筑工程配套有限公司广东广州510250 后勤工程学院重庆400041

正佳商业广场的屋面采用钢桁架结构,是国内为数不多的空腹梁结构形式,其弦杆与腹杆的连接节点形式在国内首次使用。通过总体、局部相结合的施工作业程序,以支点拆卸配合拉索张拉施工为原则,合理组织和安排拉索安装及张拉的顺序、桁架支... 详细信息

正佳商业广场的屋面采用钢桁架结构,是国内为数不多的空腹梁结构形式,其弦杆与腹杆的连接节点形式在国内首次使用。通过总体、局部相结合的施工作业程序,以支点拆卸配合拉索张拉施工为原则,合理组织和安排拉索安装及张拉的顺序、桁架支撑点拆卸的顺序及有效的监控测量手段,很好地解决了大型不对称钢结构的拉索安装,确保了桁架的稳定安全。

关键词：商业广场钢桁架空腹梁结构拉索

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高等植物细胞周期调控研究进展

生命科学 2001年第4期13卷 154-158,166页

作者：余龙江蔡永君兰文智华中理工大学生命科学与技术学院武昌430074

高等植物的细胞周期（ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ）在其生长发育过程中是受严格调控的。细胞周期的运转是基因有序表达的结果；并受外源因素的影响。植物细胞周期研究近年来已取得了较大的进展。本文综述了近几年与植物细胞周期调控相关的细... 详细信息

高等植物的细胞周期（ｃｅｌｌｃｙｃｌｅ）在其生长发育过程中是受严格调控的。细胞周期的运转是基因有序表达的结果；并受外源因素的影响。植物细胞周期研究近年来已取得了较大的进展。本文综述了近几年与植物细胞周期调控相关的细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎｓ）、细胞周期蛋白依赖性激酶（ＣＤＫｓ）等内部调控因子及外源影响因素的研究进展。

关键词：植物细胞周期周期蛋白周期蛋白依赖性激酶调控

利益表达与诉求演变——澳门第三、第四届立法会议员书面质询研究

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港澳研究 2014年第4期 84-92+96页

作者：蔡永君澳门基金会研究所

回归后书面质询成为澳门立法会议员利益表达并监督行政当局的最活跃方式。本文透过对澳门特区第三届（2005;009）和第四届（2009;013）立法会议员的书面质询梳理,剖析两届立法会议员运用书面质询的特点和其关注重点后发现:在社会经济转... 详细信息

回归后书面质询成为澳门立法会议员利益表达并监督行政当局的最活跃方式。本文透过对澳门特区第三届（2005;009）和第四届（2009;013）立法会议员的书面质询梳理,剖析两届立法会议员运用书面质询的特点和其关注重点后发现:在社会经济转型情形下,澳门社会诉求正透过立法会议员的利益表达体现并持续演变。立法会议员通过书面质询表达利益时具有议题适时性、多样性和不同政治力量侧重性等特点。但书面咨询在互动中也存在着问题,包括社会诉求与议员回应之间存在时间差、议员利益代表部分缺位以及政府回应质询质量不足等,有待进一步完善。

关键词：澳门立法会书面质询利益表达社会诉求

回归后澳门治理精英的来源、特征及其与大众关系的演变

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当代港澳研究 2013年第3期 119-131,143页

作者：蔡永君澳门基金会研究所

随着管治主体的转变,回归后澳门经历了一次大规模的治理精英转换。虽然回归后族裔的优势在治理精英的组成上大大消减,但原来社团代表的背景则延续作为治理精英的准入门槛。然而,随着治理精英与大众关系的转变,以及公民社会的发展,原有... 详细信息

随着管治主体的转变,回归后澳门经历了一次大规模的治理精英转换。虽然回归后族裔的优势在治理精英的组成上大大消减,但原来社团代表的背景则延续作为治理精英的准入门槛。然而,随着治理精英与大众关系的转变,以及公民社会的发展,原有倾向于单向性的庇护或需求关系转向为趋于对等互惠的合作模式,使得治理的权力将更大程度向公民让渡。

关键词：澳门治理精英精英转换精英与大众关系

FUT3-miRNA重组质粒对人胃癌KATO-III细胞增殖的影响

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世界华人消化杂志 2012年第25期20卷 2341-2346页

作者：辛永红郏雁飞蔡永君刘强汪运山泰山医学院临床学院济南市第四人民医院输血科山东省济南市250031 山东大学附属济南市中心医院医学实验诊断中心山东省肿瘤防治靶向分子研究重点实验室山东省济南市250013 中国重汽集团医院山东省济南市250031

目的:研究利用miRNA干扰技术抑制FUT3基因表达对人胃癌KATO-Ⅲ细胞增殖的影响.方法:将前期实验构建成功的2对针对FUT3基因的特异性miRNA表达载体,用脂质体转染入人胃癌KATO-Ⅲ细胞,RT-PCR检测FUT3基因表达水平的变化;免疫细胞化学法、... 详细信息

目的:研究利用miRNA干扰技术抑制FUT3基因表达对人胃癌KATO-Ⅲ细胞增殖的影响.方法:将前期实验构建成功的2对针对FUT3基因的特异性miRNA表达载体,用脂质体转染入人胃癌KATO-Ⅲ细胞,RT-PCR检测FUT3基因表达水平的变化;免疫细胞化学法、流式细胞术检测其合成抗原sLeA表达变化;MTT法、克隆形成实验检测FUT3基因的表达抑制对KATO-Ⅲ细胞增殖的影响.结果:转染FUT3-miRNA的2个干扰组FUT3基因mRNA相对表达量分别为0.41±0.01,0.36±0.02,明显低于对照组(0.71±0.05)和空载体组(0.65±0.03,P<0.05);细胞表面合成抗原sLeA的表达水平,FUT3-miRNA1组为35.51%±0.36%,FUT3-miRNA2组为26.05%±1.14%,明显低于对照组(52.79%±2.62%)与空载体组(49.75%±1.29%,P<0.05);与对照组(5.60%±0.63%)和空载体组(8.90%±0.91%)相比较,FUT3-miRNA1组(38.10%±1.96%)和FUT3-miRNA2组(49.04%±2.37%)能明显抑制细胞的增殖(P<0.05);细胞的克隆形成能力FUT3-miRNA1组(14.10%±1.70%)和FUT3-miRNA2组(12.50%±1.96%),显著低于对照组(29.79%±3.05%)和空载体组(28.92%±2.10%,P<0.05).结论:FUT3靶向miRNA真核表达载体可有效抑制胃癌细胞的增殖能力.

关键词： FUT3基因 miRNA RNA干扰胃肿瘤增殖