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不同气候环境中团棵期烟草叶片蛋白质组学分析

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中国农业科学 2013年第4期46卷 859-870页

作者：蔡永占周普雄李佛琳赵昶灵林春杨焕文毛自朝云南农业大学烟草学院云南农业大学农学与生物技术学院

【目的】应用比较蛋白组学策略,在蛋白表达水平揭示团棵期烟草对不同气候环境响应的分子机理。【方法】在相同土壤和大田栽培管理条件下,分别在昆明市云南农业大学农场和丽江市玉龙县金庄两个不同气候环境的生态试验点盆栽烤烟品种云烟... 详细信息

【目的】应用比较蛋白组学策略,在蛋白表达水平揭示团棵期烟草对不同气候环境响应的分子机理。【方法】在相同土壤和大田栽培管理条件下,分别在昆明市云南农业大学农场和丽江市玉龙县金庄两个不同气候环境的生态试验点盆栽烤烟品种云烟87,在团棵期进行农艺性状、SPAD值和净光合速率测定,并运用双向电泳和MALDI-TOF-MS质谱鉴定技术研究烟草叶片蛋白质表达谱的变化。【结果】金庄点烟草具有较高的SPAD值和净光合速率,较大的株高、节间距、茎围、叶宽和叶面积等农艺性状参数。蛋白质组学分析表明,在两个生态点烟草叶片中共检测到39个表达量相差2倍以上的蛋白质点,通过MALDI-TOF-MS质谱鉴定和数据库检索注释了33个蛋白质点,相对于昆明点,金庄点有3个(9.09%)特异表达,7个(21.12%)表达量上调,19个(57.57%)表达量下调的蛋白质点,而昆明点有4个(12.12%)特异表达蛋白质点;功能分类表明,它们分别参与光合作用、防御/抗胁迫、蛋白质合成、矿质代谢等细胞过程。【结论】金庄点烟草具有较高SPAD值,净光合速率,较大的株高、节间距、茎围、叶宽和叶面积等农艺性状参数,这与该点烟草叶片中积累较多高光合效率相关的蛋白质相一致,而昆明点烟草叶片则富集较多的叶绿体蛋白质合成、防御/胁迫以及氮、硫等矿质元素代谢相关的蛋白质。该结果初步阐明了丽江烟区烟叶总糖、还原糖含量较高,总氮、烟碱含量偏低特征的分子机制。

关键词：烟草团棵期农艺性状蛋白质组气候环境

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生物钾肥对烤烟含钾量及品质影响的研究进展

农学学报 2016年第11期6卷 37-41页

作者：蔡永占韩小女曲靖市烟草公司宣威分公司云南宣威655400 宣威市农业技术推广中心云南宣威655400

钾是烤烟生长和发育必不可少的元素之一,烟叶含钾量是评价烟叶品质的重要指标,烟叶含钾量偏低已严重制约国内烟叶生产的发展。因此,提高烟叶含钾量对改善烟叶内在品质具有重要的现实意义。笔者综述了钾元素的生理功能、钾元素对烟叶品... 详细信息

钾是烤烟生长和发育必不可少的元素之一,烟叶含钾量是评价烟叶品质的重要指标,烟叶含钾量偏低已严重制约国内烟叶生产的发展。因此,提高烟叶含钾量对改善烟叶内在品质具有重要的现实意义。笔者综述了钾元素的生理功能、钾元素对烟叶品质影响、生物钾肥对烤烟生长发育、烟叶含钾量、烟叶品质的影响以及生物钾肥有效施用条件等方面的研究进展,归纳了生物钾肥对烤烟生长发育、产量、品质具有重要决定作用,在此基础探讨了提高烟叶含钾量的有效途径及措施,认为施用生物钾肥是进一步提高中国烟叶内在品质的有效途径之一,最后对生物钾肥今后研究方向进行了展望。

关键词：烤烟生物钾肥含钾量烟叶品质

氮饥饿环境中稻瘟病不同致病力菌株分泌蛋白的双向电泳图谱分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2010年第6期25卷 775-785,801页

作者：蔡永占苏源孔垂思杨静刘林李成云云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室云南昆明650201

采用双向电泳技术研究了稻瘟病菌株Y99-63和Y98-16在氮饥饿条件下分泌蛋白群的组成及差异。在稻瘟病菌株Y99-63和菌株Y98-16分泌蛋白的2-DE图谱中分别检测出262±10和253±10个蛋白质点。其中有130个蛋白质点为菌株Y99-63特异表达,121... 详细信息

采用双向电泳技术研究了稻瘟病菌株Y99-63和Y98-16在氮饥饿条件下分泌蛋白群的组成及差异。在稻瘟病菌株Y99-63和菌株Y98-16分泌蛋白的2-DE图谱中分别检测出262±10和253±10个蛋白质点。其中有130个蛋白质点为菌株Y99-63特异表达,121个蛋白质点为Y98-16特异表达,132个蛋白质点为两菌株共同表达。在两菌株共同表达的表达量相差达5倍以上的有38个蛋白质点,其中有25个蛋白质点在菌株Y99-63表达量较大,有13个蛋白质点在菌株Y98-16表达量较大。生物信息学预测稻瘟病菌分泌蛋白的分子量在10～20 kDa以及等电点在5.0～5.5范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的分子量10～20 kDa范围内蛋白质点最多,菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的分子量在20～30 kDa范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达的分泌蛋白分子量在10～20 kDa范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的等电点在5.5～6.0范围内蛋白质点数最多,菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的等电点在4.5～5.0范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达分泌蛋白等电点在5.0～5.5范围内蛋白质点数最多。稻瘟病菌不同菌株在氮饥饿条件下产生的分泌蛋白有较大差异。

关键词：稻瘟病菌分泌蛋白双向电泳生物信息学

烟草赤星病高效生防内生细菌的分离筛选及发酵培养条件优化

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江苏农业科学 2022年第13期50卷 129-135页

作者：蔡永占白涛刘冬梅邱春丽符宗伟朱颖勋华小兵赵崇钧张琪云南省烟草公司曲靖市公司云南曲靖655000 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司云南昆明650217

为提高烟叶安全,探索曲靖烟区烟草赤星病生物防控技术,研究烟草内生菌株对烟草赤星病的防控作用。以曲靖烟区分离得到的烟草赤星病病原菌为靶标,采用平板对峙培养法从健康烟株体内分离筛选出生防内生细菌,并应用Design-Expert软件,采用... 详细信息

为提高烟叶安全,探索曲靖烟区烟草赤星病生物防控技术,研究烟草内生菌株对烟草赤星病的防控作用。以曲靖烟区分离得到的烟草赤星病病原菌为靶标,采用平板对峙培养法从健康烟株体内分离筛选出生防内生细菌,并应用Design-Expert软件,采用响应面法对其进行发酵培养基的优化。结果表明,从曲靖烟区健康烟株体内分离筛选出15株对烟草赤星病病原真菌链格孢菌具有拮抗作用的菌株,其中编号为YWF-19-0004、YWF-19-0065、YWF-19-0068、YWF-19-0070、YWF-19-0071的5株内生细菌抑菌带宽≥10 mm、抑菌率≥50%;采用响应面法获得YWF-19-0068菌株的优化培养基配方:大豆粉浓度14 g/L,蛋白胨浓度2 g/L,鱼粉浓度2 g/L,蔗糖浓度11 g/L,玉米粉浓度为7 g/L,碳酸钙浓度5 g/L,氯化钠浓度0.3 g/L,磷酸二氢钾浓度0.3 g/L,磷酸氢二钾浓度0.3 g/L,硫酸锰浓度0.2 g/L,硫酸镁浓度0.3 g/L,硫酸铵浓度0.5 g/L,利用优化培养基进行发酵,YWF-19-0068菌株的菌量是基础培养基发酵所得菌量的4.47倍,说明优化后的发酵培养基有助于降低生产成本,为其规模化生产应用奠定了基础。

关键词：烟草烟草赤星病生物防控内生细菌响应面法

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烟草(云烟87)NBS-LRR类同源抗病基因克隆及分析

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南方农业学报 2020年第9期51卷 2138-2144页

作者：童文杰蔺忠龙郑元仙何元胜蔡永占邓小鹏云南省烟草农业科学研究院昆明650201 中国烟草总公司云南省公司昆明650011 云南省烟草公司临沧市公司云南临沧677000 云南省烟草公司曲靖市公司云南曲靖655000

【目的】克隆并分析烟草NBS-LRR类抗病基因的同源序列(RGAs),为采用同源克隆技术挖掘烟草抗病基因提供理论参考。【方法】从基于NBS-LRR类抗病基因保守序列设计的简并引物中筛选扩增效果较好的引物用于扩增烟草RGAs,采用DNAMAN 6.0翻译... 详细信息

【目的】克隆并分析烟草NBS-LRR类抗病基因的同源序列(RGAs),为采用同源克隆技术挖掘烟草抗病基因提供理论参考。【方法】从基于NBS-LRR类抗病基因保守序列设计的简并引物中筛选扩增效果较好的引物用于扩增烟草RGAs,采用DNAMAN 6.0翻译成氨基酸序列,并与已知的其他植物抗病基因进行聚类分析。【结果】克隆获得6条与参比抗病基因具有高度同源性的烟草RGAs,大小在500 bp左右,但仅有4条RGAs具有连续的开放阅读框(ORF)及编码NBS功能结构域的核苷酸序列,命名为TRGA-87-1~TRGA-87-4。这4个烟草RGAs编码的氨基酸序列均含有NBS类抗病蛋白的多个典型保守基序,与已知的多种植物抗病基因编码的氨基酸序列均具有较高的相似性,其中,与烟草相关抗病基因编码的氨基酸序列相似性最高,为97.00%~100.00%,与其他植物的抗病基因编码氨基酸序列相似性为29.00%~53.00%,这些序列可分为3个亚类,其中TRGA-87-2与烟草N和亚麻L6聚为一类(TRGAⅠ),属于TIR-NBS-LRR类;TRGA-87-3和TRGA-87-4与水稻Xa-1和番茄Mi聚为一类(TRGAⅡ),属于non-TIR-NBS-LRR类,TRGA-87-1与拟南芥RPM1聚成一类(TRGAⅢ),属于non-TIR-NBS-LRR类。【结论】同源扩增技术可用于烟草中抗病基因的克隆、功能分析及定位等研究。

关键词：烟草 NBS-LRR 抗病基因同源序列克隆

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稻瘟菌胞外蛋白的提取及电泳方法初探

云南农业大学学报（自然科学版） 2009年第5期24卷 661-666页

作者：常明苏源蔡永占孔垂思仓晓燕杨静刘林朱有勇李成云云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室云南昆明650201

利用蛋白质组学研究方法对稻瘟菌的胞外蛋白进行分析，可以更好地了解该病原菌的生物学特性和致病机制。蛋白质样品制备和双向电泳，都是蛋白质组学研究的基础。采用冷冻干燥，透析结合法与三氯乙酸-脱氧胆酸钠沉淀法（TCA-DOC沉淀法）... 详细信息

利用蛋白质组学研究方法对稻瘟菌的胞外蛋白进行分析，可以更好地了解该病原菌的生物学特性和致病机制。蛋白质样品制备和双向电泳，都是蛋白质组学研究的基础。采用冷冻干燥，透析结合法与三氯乙酸-脱氧胆酸钠沉淀法（TCA-DOC沉淀法）提取液体培养稻瘟菌得到的胞外蛋白，利用17cm pH3.0-10.0与17cm pH4.0-7.0两种pH梯度IPG胶条对同一样品进行第一向等电聚焦，12％ SDS-PAGE凝胶进行第二向电泳，银染后用PDQuest软件（V7.4）对电泳图谱进行分析。结果表明，在上述两种提取稻瘟菌胞外蛋白的方法中，TCA-DOC沉淀法具有较好的提取效果，应用该实验方法得到的蛋白质分布在pH4.0-7.0之间的点数达到621个，因此在双向电泳中，采用pH4.0-7.0的胶条具有较好的分辨率。

关键词：稻瘟菌胞外蛋白提取双向电泳

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黑胫病对不同品种烟草根际土壤细菌群落的影响

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江苏农业科学 2023年第3期51卷 118-125页

作者：方宇蔡永占韩小女白涛刘冬梅刘舜王瑞宝郭永升陈小龙黄飞燕余磊刘佳妮昆明学院/云南省都市特色农业工程技术研究中心云南昆明650214 云南省烟草公司曲靖市公司云南曲靖655002 宣威市农业技术推广中心云南曲靖655499 河南中烟工业有限责任公司原料采购中心河南郑州450000

为改善云南烟区烤烟品种分布及从土壤生防菌筛选等角度防治烟草黑胫病提供基础数据和理论依据,采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析了云南省主栽烤烟品种的烟株根际土壤细菌群落结构。研究显示,云99、云97、云116、K326、云105、云87... 详细信息

为改善云南烟区烤烟品种分布及从土壤生防菌筛选等角度防治烟草黑胫病提供基础数据和理论依据,采用Illumina MiSeq高通量测序技术分析了云南省主栽烤烟品种的烟株根际土壤细菌群落结构。研究显示,云99、云97、云116、K326、云105、云87、红大、云100根际土壤细菌中OTU数从大到小依次为2677.33、2604.00、2575.50、2472.00、2459.00、2440.33、2388.00、2373.33个,且在云100中的特有OTU数最少,仅有75个;同时,根际土壤细菌的多样性和丰富度与烤烟品种抗性呈现正相关关系,其中ACE指数、Chao1指数均在云99、云100和红大中最低,Shannon指数的范围在9.041~9.558之间,云99与云97、云87存在显著差异(P<0.05)。此外,不同烤烟品种根际土壤细菌组成无明显差异,主要由变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteriota)、拟杆菌门(Bacteroidota)、酸杆菌门(Acidobacteriota)、芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)、泉古菌门(Crenarchaeota)、绿弯菌门(Chloroflflexi)、Myxococcota组成,但菌属在不同品种根际土壤中的相对丰度差异较为明显,其中芽单胞菌属、朱氏杆菌、Pseudolabrys、罗河杆菌属、戴氏菌属、寡养单胞菌属、副球菌属在抗性品种特异性聚集,而RB41、乳杆菌属、Romboutsia、无色小杆菌属、类诺卡氏菌属在云100和红大感黑胫病品种中聚集。综上,不同品种根际土壤细菌的多样性和丰富度与品种抗性呈现正相关,在细菌结构上相似性较高,但不同抗性品种根际土壤分别富集了特定菌属,这些菌属对于品种抗性机制的影响还有待进一步研究。

关键词：烟草黑胫病根际土壤细菌群落品种

烘烤期烟叶霉烂病病原菌的分离、鉴定及生物学特性

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中国烟草科学 2019年第4期40卷 42-47页

作者：潘祖贤蔡永占何鹏飞于仰谢金思吴毅歆蒋佳容何月秋云南农业大学昆明650201 云南省烟草公司曲靖市公司宣威分公司云南宣威655400 微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心昆明650217

为明确云南省烘烤期烟叶霉烂病的病原,采用分子和形态学鉴定方法,依据柯赫氏法则,对病原菌进行分离和鉴定并将其命名为Rhi-1,并初步研究了该病原菌的生物学特性。结果表明,引起该病害的病原菌为米根霉(Rhizopus oryzae)。菌株Rhi-1的气... 详细信息

为明确云南省烘烤期烟叶霉烂病的病原,采用分子和形态学鉴定方法,依据柯赫氏法则,对病原菌进行分离和鉴定并将其命名为Rhi-1,并初步研究了该病原菌的生物学特性。结果表明,引起该病害的病原菌为米根霉(Rhizopus oryzae)。菌株Rhi-1的气生菌丝旺盛,质地疏松,孢子囊和孢囊孢子直径分别为53~123μm和2.1~9.0μm,两者均呈球形或椭圆形。孢囊孢子萌发的最高温度为44.6℃,水相介质中孢囊孢子热处理10min的致死温度为54℃,菌丝体热处理30min的致死温度为70℃,最适pH为7.0,最佳培养基为PSA。此结果为研究霉烂病发生机制提供了依据。

关键词：烟叶霉烂米根霉孢子囊孢囊孢子

曲靖植烟土壤pH和主要养分空间变异特征及其影响因素

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土壤 2021年第6期53卷 1299-1308页

作者：杨树明余小芬邹炳礼解燕刘加红王瑞宝吕亚琼蔡永占张素华邱学礼云南省农业科学院农业环境资源研究所昆明650205 云南省烟草公司曲靖市公司云南曲靖655002 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所昆明650205

2017—2020年用GPS定位采集云南省曲靖市9个县区核心烟田耕层(0~20 cm)土壤样品6685个,测定pH、有机质、水解性氮、有效磷和速效钾,运用地统计学和地理信息系统(GIS)分析上述指标的空间分布特征及其变异主控因素。结果表明:土壤pH、有... 详细信息

2017—2020年用GPS定位采集云南省曲靖市9个县区核心烟田耕层(0~20 cm)土壤样品6685个,测定pH、有机质、水解性氮、有效磷和速效钾,运用地统计学和地理信息系统(GIS)分析上述指标的空间分布特征及其变异主控因素。结果表明:土壤pH、有机质、水解性氮、有效磷和速效钾变幅分别介于4.16~8.50、2.23~99.93 g/kg、14.88~393.36 mg/kg、2.45~142.78 mg/kg和19.65~991.33 mg/kg,均值分别为6.30、32.83 g/kg、125.42 mg/kg、29.92 mg/kg和270.38 mg/kg,变异系数分别为11.59%、33.54%、29.93%、64.54%和35.18%,均为中等程度变异。pH集中在微酸至中性,较适宜烤烟种植,有机质、有效磷和速效钾含量集中在中等至极高等级,共占研究区总面积的70%以上。半方差分析表明,土壤pH空间自相关性较强,变异受自然因素(土壤类型、质地和降雨)的主导;有机质、水解性氮和速效钾空间自相关性中等,变异受自然和人为因素(施肥)共同影响;有效磷的空间自相关性很弱,人为因素是造成其空间差异的主控因素。克里格空间插值结果揭示土壤pH空间连续性好,整体呈聚集分布,强酸和极强酸土壤主要分布在马龙、宣威和会泽;有机质、水解性氮、有效磷、速效钾呈不规则的块状分布,随机性较强,其中有机质、水解性氮、速效钾的高值区主要在富源、罗平,有效磷较高的区域集中在陆良、罗平。

关键词：植烟土壤土壤养分地理信息系统空间变异影响因素