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天然维生素E的生物合成途径

植物生理学通讯 2003年第5期39卷 501-507页

作者：欧阳青蔡文启中国科学院微生物研究所北京100080

概述了近些年来维生素E生物合成途径及其调控的研究进展

关键词：天然维生素E 生育酚生物合成途径生物合成调控

单纯疱疹病毒包膜糖蛋白靶向EGFR的溶瘤改造

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单纯疱疹病毒包膜糖蛋白靶向EGFR的溶瘤改造

作者：蔡文启长江大学

学位级别：硕士

背景:近年来,随着人们对癌症的不断深入研究,溶瘤病毒(Oncolytic virus,OVs)疗法成为了对晚期癌症患者最有希望的治疗手段之一。2015年美国批准了溶瘤单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus,o HSV)talimogene laherparepvec(T-V... 详细信息

背景:近年来,随着人们对癌症的不断深入研究,溶瘤病毒(Oncolytic virus,OVs)疗法成为了对晚期癌症患者最有希望的治疗手段之一。2015年美国批准了溶瘤单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus,o HSV)talimogene laherparepvec(T-Vec)用于临床治疗黑色素瘤。单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)包膜糖蛋白的改造可特异性增加HSV对肿瘤表面异常表达抗原(例如:表皮生长因子受体)的靶向能力以及减少病毒对于正常细胞的毒性。目前国内安柯瑞Oncorine是自2003年唯一在中国市场上市的溶瘤病毒药物,溶瘤病毒具有肿瘤杀伤性高、靶向性好、副作用小、多途径杀伤肿瘤和成本低廉等优点,有望成为最有前景的抗癌药物。Crispr Cas9技术的出现推动了溶瘤病毒构建工程的发展,为了研发高效、低价并拥有自主知识产权的溶瘤单纯疱疹病毒药物需要进行全面性的研究。目的:分离鉴定一株中国人的HSV毒株,并进行全基因组测序及滴度测定。进一步分析新毒株包膜糖蛋白D的序列与其他11种毒株的差异。并对包膜糖蛋白D基因进行基因编辑相关质粒构建及设计,拟使HSV-1特异性靶向表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor,EGFR)阳性肿瘤细胞,为构建新型o HSV治疗EGFR阳性肿瘤奠定基础。方法:(1)使用vero细胞培养可能含HSV病毒的样本,待大部分vero细胞变圆、飘落之后收集病毒悬液。将病毒悬液进行病毒DNA的抽提和鉴定,并送往测序公司进行第二代病毒全基因组测序。序列比对确定新毒株HSV-1的糖蛋白D(Glycoprotein D,g D)与其他11种毒株的差异以便进一步改造;(2)使用Crispr Cas9基因编辑技术构建相关向导RNA(guide RNA,g RNA)质粒,多途径获取并设计靶向表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGFR)的单链抗体序列以构建同源重组质粒;(3)Crispr Cas9相关质粒转染后,使用无限稀释法挑选单克隆细胞,并通过荧光观察及q PCR验证转染效率和建立重组病毒快速筛选方法。结果:(1)分离和鉴定了一株中国人HSV-1新毒株,发现其和北京HSV-1-LXMW具有高度亲缘性,其次与英国的HSV-1毒株17亲缘性较近。(2)通过对HSV-1糖蛋白D的US6基因序列对比分析,发现其与HSV-1-LXMW、HSV-1-KOS和HSV-1-Patton亲缘性近,氨基酸序列保守。(3)构建了三种HSV-1-g D的g RNA质粒,分别靶向于g D序列的不同功能区,提供了最优化的编辑方案。(4)使用无限稀释法成功挑选出共转染上述质粒的单克隆细胞并成功验证,为后期HSV-1溶瘤病毒的构建奠定了基础。

关键词：溶瘤单纯疱疹病毒包膜糖蛋白D 表皮生长因子(EGFR)

南海滨珊瑚对高温、高悬浮物和营养富集的生理适应机制研究

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南海滨珊瑚对高温、高悬浮物和营养富集的生理适应机制研究

作者：蔡文启海南大学

学位级别：硕士

近年来,海水升温、悬浮物浓度增加和营养富集等环境问题日益凸显,已严重威胁珊瑚礁生态系统的平衡与安全。大部分造礁石珊瑚对环境变化较为敏感,但滨珊瑚表现出较强的环境适应性。本研究以团块滨珊瑚(Porites lobata)、普哥滨珊瑚(Porit... 详细信息

近年来,海水升温、悬浮物浓度增加和营养富集等环境问题日益凸显,已严重威胁珊瑚礁生态系统的平衡与安全。大部分造礁石珊瑚对环境变化较为敏感,但滨珊瑚表现出较强的环境适应性。本研究以团块滨珊瑚(Porites lobata)、普哥滨珊瑚(Porites pukoensis)和澄黄滨珊瑚(Porites lutea)等三种滨珊瑚为研究对象,采用生理生态学方法,调查研究了西沙群岛、三亚和长圮港礁区中滨珊瑚分别对高温、高浓度悬浮物和营养富集等环境压力的生理适应机制。取得的主要研究进展如下:(1)在2020年8月(热白化事件发生后)西沙群岛的5个岛礁21个站点,测定了海水温度以及团块滨珊瑚的生理指标和能量分配情况。平均海水温度为30.4℃,最低温度29.2℃,最高温度30.9℃。相关性分析表明,海水温度与珊瑚的糖含量、脂含量、总能量储备和能量分配均呈显著性正相关(p凤凰岛>西岛的特征。(3)2021年9月,测定了文昌长圮港礁区9个站点的海水可溶无机氮含量(DIN),以及澄黄滨珊瑚及其共生虫黄藻的生理指标和能量分配情况。将所有站点分为低DIN组(2.0μM)。显著性差异分析表明,低DIN组虫黄藻的叶绿素a+c含量显著高于高DIN组(7.577 pg cell,5.978 pg cell,p<0.05);低DIN组珊瑚蛋白含量显著低于高DIN组(3.638 mg cm,5.088 mg cm,p<0.05);低DIN组珊瑚和虫黄藻的MDA含量均显著低于高DIN组(13.598 nmol mg,25.431nmol mg,p<0.05)。综上所述,滨珊瑚在海水升温、悬浮物浓度增加和营养富集环境胁迫下表现出较强的适应性,其机理为:团块滨珊瑚通过储备充足的糖和脂等能量物质来适应海水温度的上升;普哥滨珊瑚通过维持较高的共生虫黄藻密度,以及调节共生虫黄藻的一氧化氮合成酶和谷胱甘肽S-转移酶活性来适应高浓度悬浮物环境;澄黄滨珊瑚通过降低虫黄藻叶绿素含量以及升高珊瑚蛋白含量来适应营养富集环境。本研究初步揭示了南海滨珊瑚对高温、高悬浮物和营养富集的差异化适应机制,为阐明造礁石珊瑚的环境适应机制提供了科学参考,丰富和发展了珊瑚礁生态学基础理论研究。

关键词：滨珊瑚虫黄藻海水升温海水污染生理适应

黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

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微生物学报 1999年第1期39卷 8-14页

作者：张国华许燕蔡文启方荣祥中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列，在此基础上，利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３，并通过拼接构建了ＲＮＡ... 详细信息

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列，在此基础上，利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３，并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定，得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成，其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ），分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白，并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％；２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％，２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。

关键词：黄瓜花叶病毒山东株 RNA2 全长cDNA克隆序列分析

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颈卵器植物MADS-box基因的研究进展

植物学通报 2002年第2期19卷 150-155页

作者：刘建武刘宁孙卉蔡文启北京师范大学生命科学学院北京100875 中国科学院微生物所北京100080

作者通过对颈卵器植物MADS_box基因最新研究结果的概述 ,介绍了MADS_box基因与颈卵器植物生殖器官决定、发育和进化的关系以及被子植物花器官发育的ABCD模型在三类颈卵器植物中的表现形式和进化关系。这些结果表明MADS_box基因的结构、... 详细信息

作者通过对颈卵器植物MADS_box基因最新研究结果的概述 ,介绍了MADS_box基因与颈卵器植物生殖器官决定、发育和进化的关系以及被子植物花器官发育的ABCD模型在三类颈卵器植物中的表现形式和进化关系。这些结果表明MADS_box基因的结构、功能和表达模式的变化是植物生殖器官决定、发育和进化的主要原因。

关键词：颈卵器植物 MADS-box基因研究进展进化蕨类植物裸子植物

蕨晚期配子体发育相关cDNA的克隆和初步研究

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北京师范大学学报（自然科学版） 2002年第4期38卷 530-534页

作者：刘建武刘宁孙卉蔡文启北京师范大学生命科学学院北京100875 中国科学院微生物研究所北京100080

利用差异显示PCR技术比较蕨早、晚期配子体 (颈卵器期 )在mRNA水平上基因表达的差异 .经Reverse Northern杂交证实获得了 6个和颈卵器发育相关的cDNA ,对其克隆并测序 .用BLAST和DNAStar分析了各片段间的序列同源性 ,发现这些序列与水... 详细信息

利用差异显示PCR技术比较蕨早、晚期配子体 (颈卵器期 )在mRNA水平上基因表达的差异 .经Reverse Northern杂交证实获得了 6个和颈卵器发育相关的cDNA ,对其克隆并测序 .用BLAST和DNAStar分析了各片段间的序列同源性 ,发现这些序列与水稻、拟南芥。

关键词：蕨类植物晚期配子体发育 cDNA 颈卵器 CDNA测序基因克隆基因表达分子生物学

葡萄扇叶病毒的分离、鉴定、提纯及血清学研究

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植物病理学报 1990年第2期20卷 99-105页

作者：蔡文启郭德银徐绍华王荣莽克强中国科学院微生物研究所中国农业科学院郑州果树研究所

从表现扇叶和叶肉褪绿斑驳症状的先锋、葡萄园皇后和北醇的杂交单株中分离到3个与国外扇叶病毒(GFV)DIL分离物相似的GFY-DIL类似物。它们在昆诺藜、苋色藜、千日红和菜豆上表现症状。提纯病毒颗粒为直径约30nm的球形颗粒。在免疫双扩散... 详细信息

从表现扇叶和叶肉褪绿斑驳症状的先锋、葡萄园皇后和北醇的杂交单株中分离到3个与国外扇叶病毒(GFV)DIL分离物相似的GFY-DIL类似物。它们在昆诺藜、苋色藜、千日红和菜豆上表现症状。提纯病毒颗粒为直径约30nm的球形颗粒。在免疫双扩散试验中均与扇叶病毒抗血清形成完全融合的沉淀线。免疫电镜下病毒颗粒受扇叶病毒抗血清的修饰。利用三种间接异种动物抗体双夹心法和金黄色葡萄球菌蛋白A夹心酶联免疫吸附试验(PAS—ELISA)从感病的葡萄植株或组培苗叶片中检测了GF。间接异种动物抗休双夹心法能检测提纯GFV的最低浓度为1.6ng—8ng/ml。春季的芽和幼叶为合适的检测器官。

关键词：葡萄扇叶病毒分离提纯血清学

葡萄卷叶病毒的纯化、血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

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微生物学报 1997年第5期37卷 385-392页

作者：蔡文启徐绍华莽克强孟保中马云霞中国科学院微生物研究所北京100080 河北省农林科学院昌黎果树研究所昌黎066600

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线... 详细信息

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。

关键词：植物病毒葡萄卷叶病毒纯化血清学检测

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植物芪类植保素研究进展

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2003年第1期31卷 157-160页

作者：胡小平孙卉蔡文启杨之为西北农林科技大学植物保护学院陕西杨陵712100 中国科学院微生物研究所植物生物技术开放实验室北京100080

评述了芪类植保素的研究状况 ,重点介绍了芪类化合物的分布、种类、理化特性、芪类植保素的生物合成、芪合酶基因及其表达调控、芪合酶蛋白、芪合酶基因转化植物及其抗病性等方面的研究进展 ,并讨论了存在的问题。

关键词：植物芪类植保素芪合酶种类理化特性分布生物合成花类化合物花合酶基因抗病性