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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因特性分析

中国生物化学与分子生物学报 2004年第5期20卷 598-603页

作者：蔡启良刘子铎喻子牛华中农业大学农业微生物国家重点实验室微生物农药国家工程研究中心武汉430070

营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率... 详细信息

营养期杀虫蛋白是在苏云金芽胞杆菌营养期中发现的一种非晶体状胞外杀虫蛋白 .通过Southern杂交的基因定位实验 ,证实了营养期杀虫蛋白基因并非位于染色体和环型质粒上 ;在 2 0个不同血清型的 2 3种菌株中 ,营养期杀虫蛋白基因的存在率为 5 6 5 % (13 2 3) .同时对随机选择的 3个不同亚种菌株进行基因克隆和序列分析 ,表明其基因具有相当高的同源性 .运用生物信息技术 ,对营养期杀虫蛋白多肽进行了功能结构域比对分析 ,发现这 789多肽蛋白的N端 31至 15 0残基之间存在一种趋化信号传导因子相似序列 ,C端 5 36至 6 6 6残基之间则存在着纤维素结合结构域相似肽 .上述结果提示 ,营养期杀虫蛋白基因在苏云金芽胞杆菌天然菌株中高度保守并较为广泛分布 ,其编码蛋白的特殊结构提示了营养期杀虫蛋白潜在的功能特性 ,为进一步研究营养期杀虫蛋白奠定了基础 .

关键词：苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因克隆与序列分析

苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因的克隆及表达分析

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生物工程学报 2002年第5期18卷 579-582页

作者：蔡启良刘子铎孙明魏芳喻子牛华中农业大学生命科学技术学院农业部农业微生物重点实验室武汉430070

选择本实验室分离的苏云金芽胞杆菌李氏亚种 (subsp .Leesis)菌株YBT 833、鲇泽亚种 (subsp .Aizawai)菌株YBT 1416和库斯塔克亚种 (subsp .Kurstaki)菌株YBT 15 35为出发菌株 ,以营养期杀虫蛋白基因PCR扩增的特异片段为探针 ,进行总DN... 详细信息

选择本实验室分离的苏云金芽胞杆菌李氏亚种 (subsp .Leesis)菌株YBT 833、鲇泽亚种 (subsp .Aizawai)菌株YBT 1416和库斯塔克亚种 (subsp .Kurstaki)菌株YBT 15 35为出发菌株 ,以营养期杀虫蛋白基因PCR扩增的特异片段为探针 ,进行总DNA酶切片段的Southern杂交定位。结果显示 3株菌株的营养期杀虫蛋白基因 ,均位于经XbaI完全消化的 4～ 5kb大小的DNA片段上。将该区域DNA片段回收后克隆到pUC19载体 ,建立了 3个较基因组文库小的亚基因组文库。通过菌落原位杂交筛选和酶切鉴定分别得到 3个相应的营养期杀虫蛋白基因vip83、vip14和vip15 ,并对其测序。DNA序列比较发现基因vip83与已知营养期杀虫蛋白基因存在 5个差异碱基。将vip83、vip14基因亚克隆到苏云金芽胞杆菌大肠杆菌穿梭载体pHT315 ,分别得到重组质粒pBMB890 1和pBMB890 2。将它们电转化到vip- 的B .t.受体菌BMB171和 4Q7,获得了相应的工程菌BMB890 1 171,BMB890 2 171,BMB890 1 4Q7和BMB890 2 4Q7。SDS PAGE电泳检测均有 88kD大小的蛋白表达。生物测定结果亦表明了 ,营养期杀虫蛋白Vip83和Vip14对鳞翅目棉铃虫、小菜蛾和甜菜夜蛾的三龄幼虫均有一定的杀虫活性 ;其中对小菜蛾的毒力最高 ,LC50 值分别为 2 8.6 ,31.6 ,45 .4和 37.6 μL mL。该结?

关键词：苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因克隆表达分析棉铃虫小菜蛾甜菜夜蛾

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我国高等级生物安全实验室现状、发展和挑战

国家安全研究 2023年第1期 61-76,151页

作者：蔡启良蔡霞瞿涤金力上海复旦大学生物安全三级防护实验室上海复旦大学医学分子病毒学教育部/卫健委/医学院重点实验室复旦大学

高等级生物安全实验室是国家生物安全的重要基础设施。近年来,全球高等级生物安全实验室数量快速增长和监管能力不匹配问题凸显,实验室泄露和安全事故时有发生,加上严重危害全球社会经济发展的新发突发传染病威胁形势日益严峻,如何规划... 详细信息

高等级生物安全实验室是国家生物安全的重要基础设施。近年来,全球高等级生物安全实验室数量快速增长和监管能力不匹配问题凸显,实验室泄露和安全事故时有发生,加上严重危害全球社会经济发展的新发突发传染病威胁形势日益严峻,如何规划建设和管理好我国高等级生物安全实验室已涉及国家安全。本文通过对比分析目前国内外高等级生物安全实验室现状和问题,探究未来加强我国高等级生物安全实验室建设与发展的关键任务和亟需应对的挑战。

关键词：高等级生物安全实验室生物安全国家安全

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苏云金芽胞杆菌生物活性成分研究进展

应用与环境生物学报 2003年第2期9卷 207-212页

作者：蔡启良刘子铎喻子牛华中农业大学农业微生物农业部重点开放实验室

自1901年Ishimata从家蚕(Bambyx mori)中分离出第1株苏云金芽胞杆菌淬倒亚种(Bacillus thuringiensis subsp. sotto)以来,对苏云金芽胞杆菌研究已有百年的历史.现在国际上确认的苏云金芽胞杆菌菌株已有69个血清型[6],近40 000株.

关键词：苏云金芽胞杆菌生物活性成分胞外因子胞内因子

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合作网络双重嵌入与企业关键核心技术突破

科学学研究 2024年

作者：安琪冯启良方炜西北工业大学管理学院

合作网络嵌入对企业创新绩效的影响已得到学术界关注，然而鲜有研究考察如何利用研发主体间合作网络关系嵌入与结构嵌入获取多样性、异质性资源，进而促进企业关键核心技术突破。基于网络嵌入性理论与资源基础理论，本研究以2010-2020... 详细信息

合作网络嵌入对企业创新绩效的影响已得到学术界关注，然而鲜有研究考察如何利用研发主体间合作网络关系嵌入与结构嵌入获取多样性、异质性资源，进而促进企业关键核心技术突破。基于网络嵌入性理论与资源基础理论，本研究以2010-2020年中国高技术制造业的经验证据，实证检验企业合作网络关系嵌入与结构嵌入对企业关键核心技术突破的影响。研究发现，合作网络双重嵌入对企业关键核心技术突破具有显著的促进效应，在稳健性检验之后这一结论仍然成立。此外，技术多元化、吸收能力和企业数字化转型对合作网络双重嵌入与关键核心技术突破的关系具有显著调节作用，其中较高水平的吸收能力和企业数字化转型程度对合作网络关系嵌入与关键核心技术突破关系的正向调节作用更为显著，而较高水平的技术多元化对合作网络结构嵌入与关键核心技术突破关系的正向调节作用更加突出。本研究证实了合作网络双重嵌入对关键核心技术突破的积极影响，为政府推进网络治理、引导企业关键核心技术突破提供了理论指导。

关键词：合作网络关系嵌入结构嵌入关键核心技术

组态视角下高技术制造企业关键核心技术创新绩效提升策略研究

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科技进步与对策 2024年

作者：冯启良安琪方炜西北工业大学管理学院

关键核心技术创新对推动我国经济高质量发展、保障国家安全具有重要意义。然而,如何提升企业关键核心技术创新绩效的决策经验与实践证据相对匮乏,尚未得到充分探讨。基于TOE理论框架,以80家中国高技术制造企业为样本案例,采用模糊集定... 详细信息

关键核心技术创新对推动我国经济高质量发展、保障国家安全具有重要意义。然而,如何提升企业关键核心技术创新绩效的决策经验与实践证据相对匮乏,尚未得到充分探讨。基于TOE理论框架,以80家中国高技术制造企业为样本案例,采用模糊集定性比较分析法(fs QCA)探讨高技术制造企业关键核心技术创新绩效的影响因素及提升策略。结果发现:单个前因要素并不构成高创新绩效产生的必要条件,但是数字技术水平和企业研发投入在高创新绩效产生过程中发挥重要作用。存在4种高创新绩效提升策略,具体包括数字—整合创新型、数字—感知创新型、数字—协同创新型以及数字—研发创新型策略。特定条件下,知识整合能力和知识感知能力存在替代与互补关系。基于组态视角探究企业关键核心技术创新绩效提升策略,以期拓宽TOE理论框架适用范围,为企业制定、优化关键核心技术创新策略提供参考。

关键词：关键核心技术创新数字创新创新绩效 TOE框架组态分析

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多边形断层生长过程和机制

地球科学 2024年

作者：王锦怡孙启良中国地质大学(武汉)海洋学院

多边形断层广泛发育在大陆边缘沉积盆地中，但是目前对于多边形断层的生长过程和机制尚不清楚。本研究基于高精度三维地震资料，刻画了新西兰大南盆地中多边形断层系统的特征，剖析了其生长过程，并建立其生长模式。根据研究区多边形断... 详细信息

多边形断层广泛发育在大陆边缘沉积盆地中，但是目前对于多边形断层的生长过程和机制尚不清楚。本研究基于高精度三维地震资料，刻画了新西兰大南盆地中多边形断层系统的特征，剖析了其生长过程，并建立其生长模式。根据研究区多边形断层的几何特征，新西兰大南盆地中多边形断层可以划分为Tier1和Tier2两个层段。多边形断层落差剖面主要为“C”型、双“C”型和“B”型。结合断层的几何及生长特征，本研究提出了跨层段多边形断层的生长模式：多边形断层首先在下部层段的中心成核，并向各个方向生长；经过一段平静期后，多边形断层在新（上部）层段的中心成核；上覆层段中的多边形断层与下伏层段中的多边形断层逐渐联通，形成中继结构和跨层的“大断层”。本研究揭示了多边形断层的生长机制，明确了断层的成核、生长和停止生长等生长过程，相关研究成果能够服务于油气勘探开发及防灾减灾等。

关键词：多边形断层几何特征生长过程新西兰大南盆地

应用PAMAM dendrimers作为DNA运送载体的体外研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 804-811页

作者：郭晨莹王恒蔺亚晖蔡启良中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原生物学系分子寄生虫学实验室北京100005

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与... 详细信息

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与DNA结合后介导其转染细胞的能力,并初步评价这种复合物转染对细胞活力的影响.实验证实,全代的PAMAMdendrmers皆可与DNA结合,并可在体外培养的细胞中介导高效的DNA转染.PAMAMdendrimer/DNA复合物很稳定,在较大的pH值变化范围内(pH 2～ 10 )不解离.PAMAMdendrimers可保护与之复合的DNA分子免受限制性内切酶的降解.在一定的电荷比范围内,高代数的dendrimers分子与DNA形成的复合物对培养细胞的转染效率高于低代数dendrimer分子,复合物所介导的转染效率在不同的细胞系之间也有差异.在有效作用浓度范围内(≤ 1 3× 10 -1g/L),PAMAMdendrimers/DNA复合物对被转染细胞无毒性.但是,未与DNA复合的dendrimers分子在较低浓度时则表现出毒性,表明StarburstTM PAMAMdendrimers分子可作为新型的低毒非病毒DNA载体,用于介导DNA对体外培养细胞的转染.这些前期观察。

关键词： DNA转运 Starburst^TM PAMAM dendrimers 转染非病毒载体

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基因人工进化的分子育种技术

生命科学 2003年第3期15卷 183-188页

作者：蔡启良王恒中国医学科学院基础医学研究所

分子育种技术(molecular breeding technology)利用人工手段模拟生物杂交优势的分子进化模式,在体外构建含有感兴趣基因的大量突变文库,并根据基因表达产物的特性,以合适的筛选方法选择具有最佳功能的改良基因。经过近几年的快速发展,... 详细信息

分子育种技术(molecular breeding technology)利用人工手段模拟生物杂交优势的分子进化模式,在体外构建含有感兴趣基因的大量突变文库,并根据基因表达产物的特性,以合适的筛选方法选择具有最佳功能的改良基因。经过近几年的快速发展,分子育种技术在创造高效随机基因突变库的方法上日臻完善,已在医学、工业和环境保护酶类研究等方面收到了很好的成效。预计未来该技术将广泛地应用于重要传染性疾病(如疟疾、艾滋病病毒等)的预防和治疗,尤其可通过DNA疫苗手段的应用而获得强大的生命力。作者全面地综述了分子育种技术的产生、发展和应用现状。

关键词：分子育种技术基因改组