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应用比较基因组杂交和多色荧光原位杂交分析肺癌染色体异常

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应用比较基因组杂交和多色荧光原位杂交分析肺癌染色体异常

作者：蔡东焱苏州大学

学位级别：硕士

目的:应用比较基因组杂交技术（CGH）和多色荧光原位杂交技术（M-FISH）分析肺癌的染色体异常,了解染色体异常与肺癌不同病理类型和临床特征之间的关系。方法:试验分为两个部分,第一部分采用CGH技术对30例肺癌组织的DNA进行检... 详细信息

目的:应用比较基因组杂交技术（CGH）和多色荧光原位杂交技术（M-FISH）分析肺癌的染色体异常,了解染色体异常与肺癌不同病理类型和临床特征之间的关系。方法:试验分为两个部分,第一部分采用CGH技术对30例肺癌组织的DNA进行检测,以了解肺癌全基因组的变化;第二部分采用R显带核型分析、CGH和M-FISH对1例原发性小细胞肺癌标本和2例肺癌细胞株染色体异常进行同步分析,了解染色体扩增或缺失与不平衡易位改变的关系。结果:1. 30例肺癌标本中CGH都发现有染色体异常改变,每例标本最少涉及2条染色体异常,不同病理类型肺癌染色体畸变数无明显的差异。染色体基因扩增的发生率比缺失高,比例约为2∶1。 2.不同病理类型肺癌在1p11-p22、5p11-p14、16p11-P12、19q13、19p13、20p12和21q21等区域均有高频的扩增,在5q、6p24-pter、9p31-qter、13q21-qter和14q21-qter等区域均有高频的缺失。 3.不同病理类型肺癌的染色体异常表现也有一定的区别:（1）小细胞癌在6p12-p21和4p13-p15区域有高频的扩增达70%和50%,显著高于鳞癌和腺癌（P＜0.05, =0.05）;在11p11-p14和18q12区域扩增频数分别为70%和60%,都显著高于腺癌（P＜0.05, ＜0.05）;在18p11区域扩增频数为50%,显著高于鳞癌（P=0.05）;在8q22-qter和4q的缺失频数均为50%,显著高于鳞癌（P＜0.05, =0.05）。（2）鳞癌在2p12-p16区域的扩增频数为40%,显著高于腺癌（P＜0.05）;在3q24-qter区域鳞癌的扩增频数为40%,显著高于小细胞癌（P＜0.05）。（3）腺癌在2p和8q22-qter的缺失频数均为50%,显著高于鳞癌（P＜0.05, ＜0.05）。 4. R显带在细胞株A-549和H-1299中分别发现4条和2条染色体异常,主要为染色体的大片段缺失、延伸或插入。原发性小细胞肺癌中染色体十分的短小,R显带难以进行分析。CGH在细胞株A-549、H-1299和原发性小细胞肺癌中分别发现有7条、6条和16条染色体畸变,主要为染色体扩增或缺失。M-FISH在细胞株A-549、H-1299和原发性小细胞肺癌中分别发现有7个、8个和13个染色体异常,主要为染色体不平衡易位。 5.原发性小细胞肺癌细胞5、7、8、9、18、16、1和19发生染色体不平衡易位的几率较高,常见的易位有t（9;14）、t（16;19）、t（16;17）、t（2;5;18）和t（7;12;19）。 6.在细胞株A-549、H-1299和原发小细胞肺癌细胞中R显带和CGH发现的一些有延伸、扩增或缺失的染色体,M-FISH在相应的染色体上发现不平衡易位。结论:1.遗传物质的异常改变在肺癌细胞中普遍存在,肺癌细胞染色体扩增比缺失更为常见,遗传物质异常是肺癌发生和发展的基础。 2.不同病理类型肺癌（腺癌、鳞癌和小细胞肺癌）有共同的染色体异常区域,但在一些染色体区域的异常有所不同,这可能导致三者不同的生物学特性,也可能为三者的鉴别诊断提供一种遗传学标志。 3.随着恶性肿瘤病程的进展,染色体畸变的复杂性也明显的提高。 4.不同的致癌因素（如吸烟）可导致不同的染色体异常。 5.核型分析、CGH和M-FISH有各自的优点与不足,联合检测能更深入和全面地了解肺癌的染色体异常。 6.原发肺癌组织的染色体异常比细胞株更为复杂和多变,对原发肺癌组织的染色体分析更能揭示染色体异常在肺癌发生和发展中的作用。

关键词：肺癌染色体癌基因抑癌基因核型分析比较基因组杂交技术（CGH）染色体不平衡易位多色荧光原位杂交技术（M-FISH）

多西他赛培美曲塞和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂二线治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效与安全性

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中华肿瘤杂志 2012年第11期34卷 869-872页

作者：张茹霞蔡东焱吴小红华东苏州大学附属第四人民医院肿瘤内科无锡市214000

目的比较多西他赛、培美曲塞和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）二线治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的近期疗效及安全性。方法标准一线治疗失败的170例晚期肺癌患者分为A组、B组和C组，A组60例，接受多西他赛二线治疗；B... 详细信息

目的比较多西他赛、培美曲塞和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）二线治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的近期疗效及安全性。方法标准一线治疗失败的170例晚期肺癌患者分为A组、B组和C组，A组60例，接受多西他赛二线治疗；B组49例，患者接受培美曲塞治疗；C组61例，接受EGFR-TKIs治疗。采用Kaplan-Meier方法、Logrank检验和Cox回归分析3组患者二线治疗后的无进展生存时间（PFS）和中位生存时间（MST）。结果A组、B组和C组患者的有效率分别为15．0％（9／60）、24．5％（12／49）和36．1％（22／61）。A组、B组和C组患者二线治疗后的PFS分别为（5．49±0．75）个月（95％CI为4．03-6．95个月）、（5．45±0．60）个月（95％CI为4．23-6．60个月）和（9．31±1．24）个月（95％CI为6．88-11．73个月），差异有统计学意义（P=0．045）。A组、B组和C组患者的MST分别为（14．89±1．87）个月（95％CI为11．23-18．55个月）、（15．81±I．89）个月（95％口为12．11-19．52个月）、（17．47±2．09）个月（95％CI为13．38-21．56个月），差异无统计学意义（P=0．574）。多因素回归分析显示，二线治疗时功能状态评分（PS）和二线治疗后反应为各亚组独立预后因素，且病理类型也为C组独立预后因素（P=0．003）。结论一线治疗失败的晚期NSCLC患者选择多西他赛、培美曲塞和EGFR-TKIs作为二线治疗，安全性相当，但以EGFR-TKIs治疗的有效率最高，且PFS较多西他赛、培美曲塞差异显著。

关键词：癌非小细胞肺多西他赛培美曲塞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂二线治疗治疗结果预后

ER和Ki-67对63例局部晚期乳腺癌新辅助化疗疗效的观察

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中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 650-653页

作者：蔡东焱张茹霞吴小红无锡市第四人民医院肿瘤内科江苏省无锡市214062

目的:通过回顾性分析局部晚期乳腺癌新辅助化疗的疗效进而明确生物标志物对疗效和预后的判断意义。方法:分析2006年1月至2007年12月间63例接受新辅助化疗局部晚期乳腺癌患者,免疫组化法检测ER、HER-2、Ki-67表达情况,术后均接受辅助放疗... 详细信息

目的:通过回顾性分析局部晚期乳腺癌新辅助化疗的疗效进而明确生物标志物对疗效和预后的判断意义。方法:分析2006年1月至2007年12月间63例接受新辅助化疗局部晚期乳腺癌患者,免疫组化法检测ER、HER-2、Ki-67表达情况,术后均接受辅助放疗,并根据激素受体情况选择内分泌治疗。结果:全部患者新辅助化疗有效率达93.6%,不良反应可以耐受。生物标志物表达差异与疗效无明显的相关性,中位随访42个月后,单因素分析显示术前Ki-67≥30%、化疗前与术后ER(-)及术后HER-2(++～+++)是局部晚期乳腺癌无病生存率的不良预后因素。多因素回归分析显示治疗前ER(-)和术后HER-2(++～+++)是对无病生存率有独立影响的不良预后因素(P<0.05)。结论:治疗前ER(-)是局部晚期乳腺癌最重要的不良预后因素,化疗前测定的Ki-67指数和ER表达情况更能反应肿瘤的恶性程度。

关键词：乳腺癌新辅助化疗生物标志物

β-榄香烯注射液联合紫杉醇注射液对乳腺癌MB-468细胞体外协同作用研究

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中国中西医结合杂志 2013年第7期33卷 978-982页

作者：蔡东焱高翔吴小红洪婷婷无锡市第四人民医院肿瘤科江苏无锡214062

目的探讨β-榄香烯与紫杉醇对乳腺癌细胞株协同作用及其机制。方法体外分别以β-榄香烯注射液(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0、640.0μg/mL)、紫杉醇注射液(0.00100、0.00200、0.00400、0.00800、0.01600、0.03125、0.06250、0.12500、0.25000μg/mL)作用24h和48h以及两药联合处理人乳腺癌细胞株MB-468细胞,SRB法检测增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布,通过Westernblot检测干预后细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase,CDK1)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞周期调控蛋白P21cip1和P27kip1表达变化。结果单药β-榄香烯或紫杉醇对MB-468细胞株生长均有抑制作用,β-榄香烯24h和48h的IC50和IC20值分别为34.20、52.59和10.15、17.81μg/mL,紫杉醇24、48h的IC50值分别为2.449和1.698μg/mL。联合组(β-榄香烯和紫杉醇的浓度分别为20、40和0.016、0.008μg/mL)对乳腺癌MB-468细胞株的生长抑制率具有协同作用,Q值>1.15。β-榄香烯组(52.59μg/mL)cyclin-B1蛋白表达有明显的下降,联合组较紫杉醇单药组(1.698μg/mL)cyclin B1的表达水平也有降低,联合组P27kip1蛋白的表达较β-榄香烯和紫杉醇单药作用时有增加。结论β-榄香烯对紫杉醇具有协同作用,其可能机制是通过下调细胞周期蛋白cyclin B1表达和上调P27kip1表达有关。

关键词：乳腺癌 β-榄香烯紫杉醇协同作用细胞周期

伊立替康及其主要活性代谢产物在人血浆和唾液中的药物浓度及药动学

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中国医院药学杂志 2012年第23期32卷 1877-1882页

作者：卢红文郁浩蔡东焱刘丽陶冠军江南大学附属医院江苏无锡214062 江南大学信息工程学院江苏无锡214122 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122

目的:测定伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38和SN-38G在人血浆和唾液中的浓度,研究伊立替康及其主要活性代谢物在2种体液中药动学参数的差异。方法:6例采用Folfiri两周方案治疗的晚期结肠癌患者,给药剂量180 mg.m-2,测定血浆和... 详细信息

目的:测定伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38和SN-38G在人血浆和唾液中的浓度,研究伊立替康及其主要活性代谢物在2种体液中药动学参数的差异。方法:6例采用Folfiri两周方案治疗的晚期结肠癌患者,给药剂量180 mg.m-2,测定血浆和唾液中药物浓度,计算药动学参数。样品先经甲醇-乙腈(50∶50)沉淀蛋白,用盐酸酸化使内酯环开环,再定量。采用Waters Platform ZMD4000液相色谱仪,Xterra RP18柱,波长为370 nm,检测波长为470 nm和534 nm。喜树碱作内标。结果:血浆和唾液CPT-11及其活性代谢物,酸性提取物在此条件下的稳定性较好。3种待测物线性范围皆为1～1 000 ng.mL-1,检测限都是1 ng.mL-1。RSD为3.1%～11.7%,测定回收率为93.2%～109.8%,中位提取回收率为91%。CPT-11在2种体液中AUC相近,药动学参数相近;SN-38唾液中的AUC约为血浆的42%;SN-38G在唾液中未检出。结论:建立的方法可用于测定CPT-11,SN-38和SN-38G在人血浆和唾液中的药物浓度,可满足临床进行CPT-11及其主要活性代谢物人体药代动力学研究。在血浆样品不易得时,可采集唾液样品,两者药动学参数具有一定的相关性。

关键词：伊立替康,活性代谢物液相色谱法血浆唾液药动学

伊立替康及其主要活性代谢物血药浓度和药代动力学测定

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江苏医药 2011年第23期37卷 2817-2820页

作者：卢红文蔡东焱郁皓刘丽陶冠军苏州大学附属第四医院无锡市214062 江南大学信息工程学院江南大学仪器科学与技术国家重点实验室

目的测定抗癌药物伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38,SN-38G的血药浓度和药代动力学指标。方法样品先经甲醇-乙腈(50∶50体积比)沉淀蛋白,并用盐酸酸化使内酯环开环。用高效液相色谱仪定量:以喜树碱作内标;Xterra RP18柱,激发波... 详细信息

目的测定抗癌药物伊立替康(CPT-11)及其主要活性代谢物SN-38,SN-38G的血药浓度和药代动力学指标。方法样品先经甲醇-乙腈(50∶50体积比)沉淀蛋白,并用盐酸酸化使内酯环开环。用高效液相色谱仪定量:以喜树碱作内标;Xterra RP18柱,激发波长370nm,检测波长为470nm和534nm。结果血浆CPT-11及其活性代谢物、酸性提取物在此条件下的稳定性较好。三种待测物线性范围皆为1～1000ng/ml,检测限都是1ng/ml。相对标准差为3.1%～11.7%的血浆。测定回收率为93.2%～109.8%。中位提取回收率为91%。结论所建立的方法可用于测定CPT-11,SN38和SN38-G在人血浆中的药物浓度,可满足临床进行CPT-11人体药代动力学研究。

关键词：伊立替康高效液相色谱药代动力学

小分子酪氨酸激酶抑制剂和培美曲塞二钠互为二三线治疗晚期肺腺癌的临床研究

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中华肿瘤杂志 2012年第2期34卷 147-151页

作者：张茹霞蔡东焱洪婷婷吴小红华东苏州大学附属第四人民医院肿瘤内科 214062

目的比较晚期肺腺癌患者采用表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）和培美曲塞互为二、三线治疗是否存在优先顺序。方法回顾性分析标准一线治疗失败的83例晚期肺腺癌患者的临床资料，并分为A组（45例）和B组（38例）。A组患者在接... 详细信息

目的比较晚期肺腺癌患者采用表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）和培美曲塞互为二、三线治疗是否存在优先顺序。方法回顾性分析标准一线治疗失败的83例晚期肺腺癌患者的临床资料，并分为A组（45例）和B组（38例）。A组患者在接受EGFR-TKIs二线治疗失败后接受培美曲塞三线治疗，B组患者在接受培美曲塞二线治疗失败后接受EGFR-TKIs三线治疗。结果A组和B组患者二线治疗后的PFS分别为8．05个月（95％C15．90-10．20个月）和4．20个月（95％CI3．33-5．06个月，P=0．001），吸烟和不吸烟患者二线治疗后的PFS分别为3．69个月（95％CU5．00-7．59个月）和7．12个月（95％C15．51-8．38个月，P=0．007），男性患者和女性患者二线治疗后的PFS分别为5．56个月（95％C14．02-7．10个月）和6．85个月（95％CI4．98-7．58个月，P=0．279）。A组和B组患者三线治疗后的PFS分别为6．88个月（95％CI5．07-8．69个月）和7．60个月（95％CI5．59-9．12个月，P=0．899），吸烟和不吸烟患者三线治疗后的PFS分别为4．95个月（95％C12．83-7．05个月）和8．49个月（95％C16．27-10．76个月，P=0．050），男性患者与女性患者三线治疗后的PFS分别为5．96个月（95％C14．02-7．91个月）和8．38个月（95％CI5．68-11．07个月，P：0．176）。A组和B组患者的MST分别为23．60个月（95％C119．23-28．00个月）和15．58个月（95％CI11．85-19．32个月，P=0．021），吸烟和不吸烟患者的MST分别为11．99个月（95％CI8．55-15．49个月）和23．18个月（95％CI19．33-27．02个月，P=0．001），男性患者与女性患者的MST分别为17．40个月（95％CI13．19-21．61个月）和22．74个月（95％CI18．29-27．19个月，P=0．111）。结论一线治疗失败的晚期肺腺癌患者，EGFR-TKIs二线治疗失败后选择培美曲塞三线治疗较培美曲塞二线治疗失败后选择EGFR-TKIs治疗更能延长患者的PFS和MST，且更为合理。吸烟为肺腺癌预后的独立危险因素（P=0．012）。

关键词：肺肿瘤药物疗法表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂培美曲塞无进展生存时间中位生存时间

血小板与过表达平足蛋白的乳腺成纤维在乳腺癌原位生长中的作用及其机制

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中华实验外科杂志 2018年第6期35卷 1013-1016页

作者：蔡东焱孟东李励琦华东江南大学附属医院乳腺中心无锡214062 苏州大学第二附属医院肿瘤科 215004

目的观察过表达平足蛋白（PDPN）的人乳腺成纤维细胞（HMF）在乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外成瘤中的作用，探讨降低外周血小板数对过表达PDPN的HMF（HMF-P）促进肿瘤生长作用的影响及其机制。方法构建PDPN真核表达质粒PDPN-pEGFP-LV5，... 详细信息

目的观察过表达平足蛋白（PDPN）的人乳腺成纤维细胞（HMF）在乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外成瘤中的作用，探讨降低外周血小板数对过表达PDPN的HMF（HMF-P）促进肿瘤生长作用的影响及其机制。方法构建PDPN真核表达质粒PDPN-pEGFP-LV5，慢病毒转染HMF构建HMF-P，观察HMF-P对裸鼠成瘤的促进作用。应用血小板去除抗体11300构建血小板减少症小鼠模型，观察血小板数降低后HMF-P促进肿瘤作用的变化，Westernblot检测肿瘤生长因子的表达变化。结果HMF-P＋MDA-MB-23l共注射组瘤体体积最大，达3．16cm^3，而HMF-4-MDA-MB-231和MDA-MB-231组瘤体体积分别为1．93、0．52cm^3。降低血小板数后HMF-P＋MDA-MB-231组瘤体体积降至1．03cm^3，而HMF＋MDA-MB-231组瘤体积变化不明显。Westernblot检测显示HMF-P＋MDA．MB．231组血小板源性生长因子D（PDGF-D）的表达增加，降低血小板数后其表达明显降低。结论HMF．P可以促进MDA-MB-231的成瘤作用，其可能的作用机制是PDPN与浸润血小板相互作用促进其活化并释放PDGF-D相关。降低外周血血小板数以减少血小板肿瘤浸润可以抑制HMF-P促进肿瘤生长的作用。

关键词：乳腺癌血小板平足蛋白乳腺成纤维细胞

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中华实验外科杂志 2017年第7期34卷 1188-1191页

作者：蔡东焱孟东李励琦华东苏州大学第二附属医院肿瘤科 215004 江南大学附属医院乳腺中心无锡214062

目的探讨过表达平足蛋白（PDPN）的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）和肿瘤浸润血小板在乳腺癌预后判断中的作用。方法收集行乳腺癌根治术的164例浸润性乳腺导管癌患者，通过D2-40和CD61单抗免疫组织化学法分别检测CAFs中PDPN和肿瘤组织中血... 详细信息

目的探讨过表达平足蛋白（PDPN）的肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）和肿瘤浸润血小板在乳腺癌预后判断中的作用。方法收集行乳腺癌根治术的164例浸润性乳腺导管癌患者，通过D2-40和CD61单抗免疫组织化学法分别检测CAFs中PDPN和肿瘤组织中血小板浸润的表达，并获取所有患者术前血小板计数，统计学分析这些指标在乳腺癌预后判断中的作用。结果免疫组织化学显乐72例（44％）患者的CAFs中存在PDPN的表达（CAF^＋），而在57例（35％）患者中显示有血小板的浸润（CD61^＋）。相关分析显示有多个因素间呈显著性相关，其中CAF^＋与临床分期明显相关（P=0．049），CD61^＋与术前血小板计数（P=0．004）和CAF^＋与CD61^＋（P=0．048）。单因素生存分析显示CAF^＋，CD61^＋和术前血小板计数大于280×10^9／L组的无病生存期（DFS）明显低于对照组，P值分别为0．001、0．024和0．027。而在多因素生存分析中显示CAF^＋是一个独立的不良预后因素[风险比（HR）值=3．928；P=0．005]。结论CAF^＋和CD61^＋均是浸润型乳腺导管癌的不良预后因素，同时CD61^＋与术前外周血血小板的计数明显相关。

关键词：乳腺癌血小板肿瘤相关成纤维细胞预后