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骨形成蛋白对小鼠造血型急性放射损伤治疗作用的研究

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辐射研究与辐射工艺学报 2001年第3期19卷 199-204页

作者：田琼张绍章蒲勤张发科 Hannah X.H. 第四军医大学基础部教学实验中心西安710032 第四军医大学生化教研室西安710032 香港科技大学生物化学系

小鼠经60 Coγ射线 6 .5 - 7.5Gy照射后 ,分别于肌袋内植入纯化牛BMP ,或腹腔内注入可溶性rhBMP - 2m ,或移植Pbk -hBMP - 2 /NIH3T3入腹腔内 ,观察动物的 30d活存情况 ,并检测几种造血参数。结果表明 ,pbBMP(纯化牛骨形成蛋白 )、hBMP ... 详细信息

小鼠经60 Coγ射线 6 .5 - 7.5Gy照射后 ,分别于肌袋内植入纯化牛BMP ,或腹腔内注入可溶性rhBMP - 2m ,或移植Pbk -hBMP - 2 /NIH3T3入腹腔内 ,观察动物的 30d活存情况 ,并检测几种造血参数。结果表明 ,pbBMP(纯化牛骨形成蛋白 )、hBMP - 2m (重组骨形成蛋白 - 2多肽 )Pbk -BMP - 2 /NIH3T3cellline(PBKhBMP - 2转基因细胞株 )对小鼠 6 .5、7.0、7.5Gyγ射线照射后急性放射造血损伤有治疗作用 :GM -CFU集落形成率、各项造血参数和 30d活存率均较对照组有显著性差异 (p <0 .0 1)。本工作结果提示 ,BMP对成年动物放射所致造血损伤具有治疗作用 ,其机理与促进已损伤的造血功能的修复作用有关。

关键词： BMP 放射损放造血修复骨形成蛋白急性放射病

基于多孔铂纳米复合物和酶介导的DNA步行策略的通用比率电化学传感器

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基于多孔铂纳米复合物和酶介导的DNA步行策略的通用比率电化学传...

作者：蒲勤丽重庆医科大学

学位级别：硕士

目的人类许多复杂疾病的发生和发展都和机体多种分子改变密切相关,包括影响代谢相关的小分子、调控生理功能相关蛋白、遗传调控的基因等。而这些分子的改变在疾病的早期是非常微小的。目前也有很多检测平台用于这些生物标记物的检测,例... 详细信息

目的人类许多复杂疾病的发生和发展都和机体多种分子改变密切相关,包括影响代谢相关的小分子、调控生理功能相关蛋白、遗传调控的基因等。而这些分子的改变在疾病的早期是非常微小的。目前也有很多检测平台用于这些生物标记物的检测,例如:酶联免疫吸附试验(ELISA),聚合酶链反应(PCR)等。但是这些检测方法或需要昂贵的设备,或样本预处理程序复杂,或程序操作复杂需专业人员进行,最重要的是,这些方法都只能对单一分子水平的生物标记物进行检测。目前,单一分子标记物的检测不能准确的诊断疾病的发生发展。从基因组学,蛋白组学,代谢组学的角度看,一些复杂的疾病(例如:肿瘤)发生与复杂多系统改变有关。因此,一种用于多分子水平的快速、易操作,低成本,超灵敏的检测平台对疾病的早期诊断和精准医疗具有非常重要的意义。方法在本研究中,首次将DNA修饰在装载了阿霉素(DOX)的多孔铂(MPN)上形成核酸功能化的纳米信号探针(MPNs@DOX@DNA2)。MPN在传感器中一方面充当了DOX和功能化核酸的纳米载体,另一方面作为催化导电性能的材料大大增加了检测分析的灵敏度。采用DNA walker策略可以让核酸在分子电极表面自主反应,在切刻内切酶(NtBbvCI)的辅助下,Walker探针可以在电极表面自主切割。通过逐步优化实验反应原理,成功构建了一种基于多孔铂纳米复合物和切刻内切酶辅助的DNA步行策略的通用“signal-off-on”比率电化学传感器,可对小分子、蛋白、核酸进行分析。亚甲蓝(Mb)标记的发夹探针(MB-HPs)作为“signal-off”探针,MPNs@DOX@DNA2作为“signal-on”探针。在MPNs@DOX@DNA2和***介导的DNA walker策略的辅助下实现对目标物特异性检测与信号放大。结果在最优的实验条件下,构建的比率电化学传感器具有超高的灵敏性和更宽的检测范围。此外,改变传感器的适配体核酸识别探针序列可实现对小分子ATP,蛋白VEGF,以及rpoB基因的定量检测。在血清样本中用该方法对分析物进行检测,也得到很好的分析结果。结论通过层层优化电化学生物传感器的原理,一方面,把两种核酸探针同时固定在电极表面,通过NtBbvCI酶驱动的DNA Walking策略自主剪切,不需要认为操作和复杂的热力学循环,副反应少,背景信号低。另一方面,采用多孔铂纳米球作为信号的载体连接反应探针,大大增加检测的灵敏度。在最优的条件下,构建的生物传感对小分子、蛋白、基因都具有非常好的分析性能。且在复杂的血清样本中检测仍具有良好的准确性。该方法对临床的生物分析和诊断具有很大的应用潜能。

关键词：比率电化学传感器多孔铂切刻内切酶 DNA步行策略

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GPS技术在高速公路客运车辆管理中的应用

电子技术（上海） 1999年第2期26卷 19-21页

作者：蔡锦成蒲勤四川大学无线电电子学系成都亚光电工厂保安分厂

ＧＰＳ全球卫星定位系统能根据卫星发出的信号进行导航、定位、授时，非常适合于对移动目标进行定位管理。文章介绍了基于ＧＰＳ技术高速公路客运车辆管理系统的原理、系统组成、工作方法、客运车辆状态分析软件功能及软件框图，在ＳＡ... 详细信息

ＧＰＳ全球卫星定位系统能根据卫星发出的信号进行导航、定位、授时，非常适合于对移动目标进行定位管理。文章介绍了基于ＧＰＳ技术高速公路客运车辆管理系统的原理、系统组成、工作方法、客运车辆状态分析软件功能及软件框图，在ＳＡ影响下用Ｃ／Ａ码测定公路里程坐标和坐标转换方法。

关键词： GPS 高速公路客运车辆全球卫星定位

用消减杂交技术克隆人成骨样细胞机械牵张力敏感基因的研究

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华西口腔医学杂志 2004年第4期22卷 278-280页

作者：冯雪丁寅段银钟林珠欧阳为明蒲勤第四军医大学秦都口腔医院正畸科第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学生物化学教研室陕西西安710032

目的　对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法　对人成骨样细胞Saos_2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周期分钟 ,加载 12h后分别提取牵张力作用后Saos_2细胞及未作处理的正常Saos_2对照细胞的mRN... 详细信息

目的　对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法　对人成骨样细胞Saos_2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周期分钟 ,加载 12h后分别提取牵张力作用后Saos_2细胞及未作处理的正常Saos_2对照细胞的mRNA ,反转录制备cDNA ,将cDNA进行消减杂交 ,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库 ,克隆后进行序列测定。结果　克隆到的基因片段中 ,功能已知基因片段 15个 ,功能未知基因片段 2个 ,其中牵张力敏感基因 1(SSG1)位于 9号染色体上 ,功能未知 ;牵张力敏感基因 2 (SSG2 )位于 18号染色体上 ,与转录因子 2 ,4高度同源。结论　用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究。

关键词：消减杂交基因克隆成骨细胞机械牵张力敏感基因

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从《新华日报》看南方局统战工作

红岩春秋 2018年第10期 32-39页

作者：蒲勤重庆红岩革命历史博物馆

《新华日报》是中国共产党在抗日战争时期和解放战争初期于国民党统治区公开出版的惟一的全国性日报。从1938年1月11日武汉创刊,10月25日迁重庆,至1947年2月28日被迫停刊,历时9年有余,出版报纸3231期。在以周恩来为首的中共中央南方局... 详细信息

《新华日报》是中国共产党在抗日战争时期和解放战争初期于国民党统治区公开出版的惟一的全国性日报。从1938年1月11日武汉创刊,10月25日迁重庆,至1947年2月28日被迫停刊,历时9年有余,出版报纸3231期。在以周恩来为首的中共中央南方局的直接领导下,《新华日报》不仅是中国共产党宣传抗战民主的重要阵地,党和人民的喉舌,还是南方局统战工作的重要载体,密切联系和团结一切可以团结力量的纽带和桥梁。

关键词：中共中央南方局《新华日报》统战工作中国共产党国民党统治区抗日战争时期公开出版战争初期

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兔抗人BMP-2成熟肽抗血清的制备

细胞与分子免疫学杂志 2001年第6期17卷 568-569页

作者：张斌蒲勤李毅陈南春陈苏民第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的利用在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-2(hBMP-2)成熟肽,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清。方法将含有hBMP-2成熟肽基因的表达载体pDH2m,转化大肠杆菌,热诱导表达hBMP-2成熟肽,经纯化、复性后,再用其免疫兔子,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血... 详细信息

目的利用在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-2(hBMP-2)成熟肽,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清。方法将含有hBMP-2成熟肽基因的表达载体pDH2m,转化大肠杆菌,热诱导表达hBMP-2成熟肽,经纯化、复性后,再用其免疫兔子,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清。并以Western-blot和免疫组化方法对抗血清进行鉴定。结果Western-blot结果显示在对应于hBMP-2成熟肽位置有阳性条带,免疫组化结果显示人软骨细胞胞浆阳性着色。结论hBMP-2成熟肽在大肠杆菌中获得高表达,并成功制备了兔抗hBMP-2成熟肽抗血清。

关键词：人BMP-2 成熟肽抗血清大肠杆菌制备

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三种抗人TNF-α重组抗体的重折叠

第四军医大学学报 2002年第1期23卷 1-4页

作者：陈萍徐鹏蒲勤邓健蓓药立波第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033

目的　探讨重组抗体蛋白的复性规律 .方法　用共溶剂氧化还原、表面活性剂介导、变性剂介导及抗原介导复性四种条件对抗人 TNF- α单域抗体、单链抗体 GST融合蛋白进行了分离纯化 .结果　复性产物的可溶率为 1 0 %左右 .结论　几种复性... 详细信息

目的　探讨重组抗体蛋白的复性规律 .方法　用共溶剂氧化还原、表面活性剂介导、变性剂介导及抗原介导复性四种条件对抗人 TNF- α单域抗体、单链抗体 GST融合蛋白进行了分离纯化 .结果　复性产物的可溶率为 1 0 %左右 .结论　几种复性方法均可使目的蛋白复性。

关键词：复性抗体肿瘤坏死因子重折叠

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人骨形态发生蛋白-2真核表达载体的构建

中国修复重建外科杂志 2001年第3期15卷 155-157页

作者：栗向东胡蕴玉蒲勤朱邦福第四军医大学西京医院全军创伤骨科研究所西安710032 第四军医大学西京医院生物化学教研室

目的　构建人骨形态发生蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 ,并观察其在真核细胞内表达的可能性。方法　 Sal I和 Xba I双酶切含有 h BMP- 2全长 c DNA的 p U C19,回收 1.2 4kb片段 ,将其连入真核表达载体pc DNA3,构建重组子 pc DNA3- h... 详细信息

目的　构建人骨形态发生蛋白 - 2 (h BMP- 2 )真核表达载体 ,并观察其在真核细胞内表达的可能性。方法　 Sal I和 Xba I双酶切含有 h BMP- 2全长 c DNA的 p U C19,回收 1.2 4kb片段 ,将其连入真核表达载体pc DNA3,构建重组子 pc DNA3- h BMP- 2。将重组子转化细菌 ,扩增后提取质粒 ,分别用 Eco R I和 Xba I双酶切和Xho I单酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定。将重组子转染成纤维细胞 ,G418筛选形成阳性克隆后继续培养 4周行细胞原位杂交和免疫组织化学染色。结果　琼脂糖电泳显示 :用 Eco R I和 Xba I双酶切后可形成两条带 ,大小分别为1.3kb和 5 .38kb,而 Xho I酶切位点消失 ,符合物理图谱 ,表明载体构建成功。转染后 G418筛选所获阳性克隆 ,继续培养 4周 ,细胞原位杂交和免疫组织化学染色 ,结果表明 h BMP- 2基因在 m RNA水平和蛋白水平均有表达。结论成功构建 h BMP- 2真核表达载体 ,该载体可在真核细胞内表达。

关键词：骨形态发生蛋白-2 基因转染成纤维细胞载体构建

pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞的体外表达及体内成骨能力(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第38期12卷 7587-7590页

作者：魏利成刘丹平蒲勤邵阳市第一人民医院骨科湖南省邵阳市422000 辽宁医学院附属第一医院骨科辽宁省锦州市121001 解放军第四军医大学生化教研室陕西市西安市710033

背景:能否通过病毒或者非病毒载体将骨形态发生蛋白2转导到骨髓基质细胞发挥成骨作用?目的:观察真核表达载体pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞后体外表达,同时将MSC转染后但未筛选兔骨髓基质细胞自体回植入肌组织,利用X线观察其成骨情况... 详细信息

背景:能否通过病毒或者非病毒载体将骨形态发生蛋白2转导到骨髓基质细胞发挥成骨作用?目的:观察真核表达载体pcDNA3-hBMP2转染兔骨髓基质细胞后体外表达,同时将MSC转染后但未筛选兔骨髓基质细胞自体回植入肌组织,利用X线观察其成骨情况。设计、时间及地点:观察对比实验。实验于2004-11/2005-04在辽宁医学院骨科研究室完成。材料:6只成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体质量2.0～3.0kg。BMP2抗体为美国Sanaka公司产品,pcDNA3-hBMP2由解放军第四军医大学生化教研室蒲勤教授提供,限制性内切酶购于大连宝生物工程有限公司。方法:从大肠杆菌提取超纯质粒pcDNA3-hBMP2,从成年兔股骨抽取骨髓,密度梯度分离法分离培养骨髓基质干细胞,将细胞分成4组:A组:pcDNA3-hBMP2转染进行G418筛选;B组:pcDNA3-hBMP2转染未用G418筛选;C组:给予pcDNA3空载体转染;D组:仅加入脂质体转染试剂Fugene6。主要观察指标:①应用免疫组织化学法检测转染后瞬时表达。②应用免疫组织化学法检测细胞骨钙素表达,分别应用原位杂交法检测细胞Ⅰ型胶原表达。③转染2周后将B组细胞自体回植入兔后腿肌组织中,移植4周后应用X射线观察成骨情况。结果:①pcDNA3-hBMP2成功转染入骨髓基质干细胞内并100%瞬间表达BMP2。②基因转染4周后,A组细胞骨钙素及Ⅰ型胶原表达高于C组及D组。③B组细胞回植肌组织4周后,X射线可显示新骨形成。结论:pcDNA3-hBMP2能安全有效转染兔骨髓基质干细胞,通过其分泌物BMP2来作用诱导细胞加速分化为成骨细胞。

关键词：骨髓基质细胞 pcDNA3-hBMP2成骨能力表达