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早期髓系祖细胞免疫抑制功能的分析

早期髓系祖细胞免疫抑制功能的分析

作者：蒲仕明广西师范大学

学位级别：硕士

目的：髓源性抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)为未成熟但具免疫抑制能力的髓系细胞。MDSCs与肿瘤等疾病的发生密切相关,是免疫学领域近年来的热点之一。MDSCs在细胞构成上具有高度异质性,但迄今的研究局限于单核细胞... 详细信息

目的：髓源性抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)为未成熟但具免疫抑制能力的髓系细胞。MDSCs与肿瘤等疾病的发生密切相关,是免疫学领域近年来的热点之一。MDSCs在细胞构成上具有高度异质性,但迄今的研究局限于单核细胞样和粒细胞样MDSCs两个亚群。MDSCs是否还包括其它细胞群尤其是髓系发生早期的细胞一直是MDSC研究亟待解决的关键问题之一。据报道,小鼠胚胎干细胞和造血干细胞在体外可产生一种在分化潜能上相当于粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMPs)但呈现抑制活性的细胞群,提示体内GMPs可能具有免疫调节功能。本研究的目的是,通过系统地检测髓系分化通路早期系列细胞群对T细胞的抑制能力,探明髓系祖细胞的免疫调节功能属性并界定MDSC的发育起源。方法：1)小鼠Lewis肺癌细胞模型构建：接种对数生长期的LLC细胞于6-8周龄近交系C57BL/6J小鼠左腋皮下;4周后选择所长肿瘤大小适宜(直径约1.5cm)的动物用于实验。2)骨髓细胞分离与制备：取胫骨与股骨骨髓,去除红细胞,制备成骨髓单细胞悬液。3)细胞表型分析与分选：细胞用抗标志蛋白抗体(与荧光素分子结合)标记;通过流式细胞分析仪分析细胞表型和频率,通过流式细胞分选仪分选纯化特定细胞群。4)非特异性T细胞抑制实验：实验设置三个组别即待测细胞组、非免疫细胞(使用纯化的巨核细胞/红细胞祖细胞,MEP)对照组和空白对照组(以培液代替骨髓细胞);骨髓细胞分别与经CFSE染色的C57BL/6J小鼠脾脏细胞在抗CD3/抗CD28抗体存在下共培养72小时;流式术测定CFSE荧光强度变化。5)特异性T细胞抑制实验：实验设计及方法与非特异性T细胞抑制实验类似,不同之处是以经丝裂霉素c处理的BABL/c小鼠脾脏细胞(作为抗原提呈细胞)代替抗CD3/抗CD28抗体刺激C57BL/6J小鼠脾脏T细胞。6)统计方法：数据统计采用SPSS17.0统计软件进行独立样品T检验分析。统计结果以平均值±标准差(standard deviation, SD)表示。结果：1)粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMPs)表现极强的免疫抑制能力。GMPs是MDSCs两个亚群的前体细胞。本课题首先分析了GMPs对非特异和抗原特异性激活的T细胞增殖的影响。在非特异T细胞反应中,分离自荷瘤小鼠的GMPs (T-GMP,T:tumor)呈现极强的T细胞抑制活性。加入T-GMP后,T细胞的增殖指数为0.82±0.45%(分裂T细胞/总脾脏细胞百分比,三次独立实验,下同),显著低于荷瘤小鼠MEP(T-MEP)添加组的22.40±2.09%(P<0.01)和无骨髓细胞添加组(Medium)的(27.87±3.44%)(P<0.001)。后两者间则无明显差异,亦即非免疫细胞MEP对T细胞增殖无抑制作用。出乎意料的是,分离自正常小鼠(注射PBS)的GMP (N-GMP, N:normal)也能有效地抑制T细胞增殖并表现出与T-GMP相当的抑制活性。N-GMP和N-MEP组T细胞的增殖指数分别为1.17±1.03%和23.10±2.45%(P<0.01)。在特异性T细胞反应抑制实验中,我们得到了类似的结果。T-GMP组、T-MEP组和Medium组的T细胞增殖指数分别为0.32±0.08%、3.15±0.52%和4.37士0.9%(0.32±0.08% VS 3.15±0.52%,P<0.05;0.32±0.08%VS 4.37±0.9%,P<0.01)。N-GMP组和N-MEP组的T细胞增殖指数分别为0.36±0.02%和3.76±0.63%(P<0.01)。2)共同髓系祖细胞(CMPs)是髓系发生通路中最早的抑制细胞群。接下来检测了GMPs上游的系列细胞群,包括共同髓系祖细胞(CMPs)、多能祖细胞(MPPs)和造血干细胞(HSCs)。结果显示,分离自荷瘤小鼠CMP(T-CMP)和正常小鼠CMP (N-CMP)均能有效地抑制T细胞的增殖。在非特异T细胞反应中,T-CMP和N-CMP两组T细胞的增殖指数分别为4.51±1.89%和5.21±2.91%,而相对应的T-MEP组和N-MEP组的T细胞增殖指数分别为26.70±2.09%和28.00±2.45%。在特异性T细胞反应中,T-CMP组和N-CMP组T细胞的增殖指数分别为1.36±0.15%和1.47±0.21%,而相对应的T-MEP组和N-MEP组的T细胞增殖指数分别为3.15±0.52%和3.76±0.63%。但是,无论是分离自正常小鼠还是荷瘤小鼠的MPPs和HSCs,均不表现T细胞抑制作用。3)早期髓系祖细胞具有比其下游细胞更强的抑制活性。我们进而比较了GMPs和CMPs与经典MDSCs的抑制能力。在相同的细胞比例(GMP或MDSC:脾脏细胞=1：

关键词：髓系祖细胞免疫抑制肿瘤髓源性抑制细胞

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人才与产业“同频共振”

乡村振兴 2020年第8期 56-57页

作者：蒲仕明不详

隆昌市,位于连绵起伏的川中丘陵。在丘陵间的坝子上,水稻正抽穗生长。在实施乡村振兴战略的道路上,人口流失之弊、土地溢价之难、产业发展之艰都摆在了这个丘区县域的面前。作为全省人口最为密集的县域之一,隆昌所经历的过往和对未来的... 详细信息

隆昌市,位于连绵起伏的川中丘陵。在丘陵间的坝子上,水稻正抽穗生长。在实施乡村振兴战略的道路上,人口流失之弊、土地溢价之难、产业发展之艰都摆在了这个丘区县域的面前。作为全省人口最为密集的县域之一,隆昌所经历的过往和对未来的谋划,对于同类地区都有着较强的典型价值。

关键词：人口流失同频共振乡村振兴战略川中丘陵连绵起伏隆昌典型价值县域

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新农村建设4.0时代的“四川回答”

新城乡 2017年第5期 26-27页

作者：蒲仕明

现在是新农村建设的4．0时代。“四个好”的提出，说明四川在破解三农问题方面，始终拥有明确的重点和方向，而且始终走在前列，

关键词：新农村建设四川三农问题

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谱写乡村治理新篇章

乡村振兴 2021年第2期 44-45页

作者：蒲仕明不详

乡村治,则百姓安、国家稳。只有始终坚持和加强党对乡村治理的集中统一领导,结合各地具体实际,持续探索自治、法治、德治"三治融合"的模式与路径,才能保证乡村治理有章可循、乡村振兴有序推进。"治理之道,莫要于安民。"乡村是我国最基... 详细信息

乡村治,则百姓安、国家稳。只有始终坚持和加强党对乡村治理的集中统一领导,结合各地具体实际,持续探索自治、法治、德治"三治融合"的模式与路径,才能保证乡村治理有章可循、乡村振兴有序推进。"治理之道,莫要于安民。"乡村是我国最基本的治理单元,在我国经济社会发展中发挥着基础性作用。

关键词：乡村振兴始终坚持乡村治理集中统一领导模式与路径治理之道德治有序推进

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四川:“川字号”集结从青白江走向世界

乡村振兴 2021年第5期 38-39页

作者：蒲仕明不详

"嘟——",伴随着一声长长的汽笛轰鸣,4月9日,首趟四川夹江茶叶出口中亚专列从成都国际铁路港驶出,前往乌兹别克斯坦塔什干。"这是四川历史上第一次茶叶专列开出国门,意义重大。"四川省政协副主席祝春秀在当日首发仪式上表示,茶叶专列的... 详细信息

"嘟——",伴随着一声长长的汽笛轰鸣,4月9日,首趟四川夹江茶叶出口中亚专列从成都国际铁路港驶出,前往乌兹别克斯坦塔什干。"这是四川历史上第一次茶叶专列开出国门,意义重大。"四川省政协副主席祝春秀在当日首发仪式上表示,茶叶专列的开通,将有助于四川茶企拓展中亚国家市场,进一步扩大川茶出口规模。

关键词：茶叶出口走向世界政协副主席茶企乌兹别克斯坦青白江中亚国家四川夹江

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激活“三类人”农业供给侧改革的最后拼图

新城乡 2017年第5期 58-59页

作者：蒲仕明

如果说大自然的风调雨顺是四川农业肇端的天时，都江堰的水旱得序是天府农业发展的地利，那么显而易见，“三类人”的核心建构，将是四川农业供给侧改革的人和，

关键词：四川农业改革供给拼图激活农业发展大自然都江堰

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潮水退去谁将赢得下半场

乡村振兴 2020年第6期 30-31页

作者：蒲仕明不详

新冠肺炎疫情之下,蓄力已久的直播经济呈现了暴发之势。企业CEO、明星网红、领导干部等纷纷加入带货大军。据商务大数据监测,一季度全国农产品网络零售额达936.8亿元,增长31.0%,电商直播超过400万场。

关键词：数据监测农产品网络零售电商直播一季度

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率先脱贫摘帽,为什么是川东北

新城乡 2017年第6期 58-59页

作者：蒲仕明

自然和历史的双重压力曾是川东北的难言之隐,随着社会的逐步演进和发展,尤其是脱贫攻坚的进一步深入,无论是庙堂之上还是江湖之远,都已感受到了强烈的变化：过往的痛点正在挣脱＂危＂的定义,并逐步寻求＂机＂的来临川东北地区是集革命... 详细信息

自然和历史的双重压力曾是川东北的难言之隐,随着社会的逐步演进和发展,尤其是脱贫攻坚的进一步深入,无论是庙堂之上还是江湖之远,都已感受到了强烈的变化：过往的痛点正在挣脱＂危＂的定义,并逐步寻求＂机＂的来临川东北地区是集革命老区、贫困地区、边远山区、地震灾区为一体的欠发达区域。一直以来,＂地少人多＂＂交通落后＂＂产业薄弱＂等略显贬义的词语,

关键词：川东北欠发达区域东北经济区边远山区极化效应创造就业机会空心化地理特征四川省统计局产业关联效应

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元山村“轻农业”扶贫试验

新城乡 2017年第8期 60-61页

作者：蒲仕明

所谓＂轻农业＂,是指生产规模较小、产品质量较高、劳动力投入强度不大、对交通依赖程度较低的农业产业旺苍县鼓城乡元山村位于巍峨的米仓山下,几株巨大的核桃树旁,一小块稻田里,水稻正在抽穗生长。＂元山村的面积40多平方公里,最高的... 详细信息

所谓＂轻农业＂,是指生产规模较小、产品质量较高、劳动力投入强度不大、对交通依赖程度较低的农业产业旺苍县鼓城乡元山村位于巍峨的米仓山下,几株巨大的核桃树旁,一小块稻田里,水稻正在抽穗生长。＂元山村的面积40多平方公里,最高的光头山海拔超过2000米,最低的河谷地带只有七八百米,以水稻为例,全村能种水稻的就只有这么五六亩土地。＂如同大巴山区多数村庄一样,年轻人纷纷出去打工,留在村里的多是老人和劳动力缺乏的妇孺。

关键词：农业产业山村试验扶贫生产规模产品质量投入强度依赖程度