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草珊瑚内生真菌的抑菌活性及活性物质研究

草珊瑚内生真菌的抑菌活性及活性物质研究

作者：蒙思妤广西师范大学

学位级别：硕士

草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)是我国传统药用植物,具有抗病毒、抑菌、抗癌以及对血小板减少症的治疗等作用。在长期协同进化过程中,植物内生真菌能产生与寄主植物相同或相似的活性物质。基于草珊瑚具有公认的抑菌活性,本文旨... 详细信息

草珊瑚(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)是我国传统药用植物,具有抗病毒、抑菌、抗癌以及对血小板减少症的治疗等作用。在长期协同进化过程中,植物内生真菌能产生与寄主植物相同或相似的活性物质。基于草珊瑚具有公认的抑菌活性,本文旨在从其内生真菌中寻找抗菌活性物质,对研发绿色高效的植物源抗菌剂具有重要意义。本研究从广西贺州市富川县采集健康草珊瑚植株,从中分离纯化出内生真菌,并初步测定各菌株的抑菌活性。选取抑菌活性强的内生真菌进行发酵,从发酵产物中分离纯化出抑菌活性物质,初步研究其抑菌作用机理。主要研究结果如下:1.采用组织块分离法从采自广西贺州市富川县的草珊瑚植株中分离出61株内生真菌,其中从根部分离得到10株内生真菌(编号为G-1～G-10),茎部分离得到36株内生真菌(编号为J-1～J-36),叶部分离得到15株内生真菌(编号为Y-1～Y-15)。2.采用平板对峙法,以罗汉果白绢病菌和根腐病菌为指示菌株,测定了61株草珊瑚内生真菌对两株指示菌的抗菌活性。发现菌株J-9、J-10和G-4对罗汉果白绢病菌和根腐病菌的菌丝生长有较强的抑制作用。3.采用菌丝生长速率法,测定了J-9、J-10、J-12、J-20、G-4、G-5和Y-8 7株内生真菌发酵产物对罗汉果白绢病菌和根腐病菌的抑菌活性。发现菌株J-10发酵产物的抑菌活性最好,在浓度为2 mg/m L时,发酵产物的乙酸乙酯萃取物和菌丝体甲醇提取物对罗汉果白绢病菌的抑菌率均为100%,对罗汉果根腐病菌的抑菌率分别为为88.51%和85.17%。4.进一步测定了J-10菌株发酵产物对玉米大斑病菌、茶轮斑病菌、辣椒炭疽病菌、贡柑链格孢菌、甘蓝黑斑病菌、甘蔗凤梨病菌、罗汉果根腐病菌和罗汉果白绢病菌8种植物致病真菌的毒力。结果表明,J-10发酵产物的乙酸乙酯萃取物对8种病原真菌的EC值为0.1995 mg/m L～1.1722 mg/m L,其中对玉米大斑病菌的毒力最强,对罗汉果根腐病菌的毒力最弱;J-10菌丝体甲醇提取物对8种病原真菌的EC值为0.1088 mg/m L～9.4687 mg/m L,对罗汉果白绢病菌的毒力最强,对罗汉果根腐病菌的毒力最弱。5.采用最低浓度抑制法测定了内生真菌J-10发酵产物的乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和菌丝体甲醇提取物对普通变形杆菌、大肠杆菌、溶壁微球菌、乙型副伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、炭疽杆菌、藤黄微球菌和金黄色葡萄球菌10种动物致病细菌的最低抑制浓度(MIC)。结果显示,菌丝体甲醇提取物和乙酸乙酯萃取物的抑菌作用较强,MIC值分别为0.125 mg/m L～5 mg/m L和0.125 mg/m L～2.5 mg/m L;正丁醇萃取物的抑菌作用较差。6.采用硅胶柱层析、薄层层析等分离技术,结合活性追踪,从J-10菌丝体甲醇提取物中分离得到1个抑菌活性化合物。通过对化合物的核磁共振波谱测定和解析,鉴定该化合物为毛色二孢霉素(lasiodiplodin)。7.测定了毛色二孢霉素对8种植物致病真菌和10种动物致病细菌的毒力,发现毛色二孢霉素对8种植物致病真菌的EC值为0.0155 mg/m L～0.2491 mg/m L,其中对玉米大斑病菌的毒力最强,对罗汉果根腐病菌的毒力最弱;毛色二孢霉素对普通变形杆菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和蜡样芽胞杆菌的MIC均为0.25 mg/m L,对其余6种动物致病细菌的MIC值均大于4 mg/m L。8.对毛色二孢霉素的抑菌作用机理进行了初步探究,发现其对玉米大斑病菌的菌丝体形态结构有影响,破坏细胞结构,使菌丝体细胞的孢内物质外泄,并导致菌丝体内可溶性蛋白质含量降低。9.通过形态学观察和分子鉴定,确定草珊瑚内生真菌J-10为拟可可毛球二孢菌(Lasiodiplodia pseudotheobromae)。通过对其生物学特性的观察,发现该内生真菌适合在光照、温度30℃和p H5.5的环境下生长。10.以毛色二孢霉素产量为考察指标,初步探究拟可可毛球二孢菌的发酵条件。结果表明,发酵温度为28℃,p H为7,发酵时间为20 d,装液量为300 m L,碳氮比为(蔗糖/酵母浸膏)1/0时,其发酵产物中毛色二孢霉素的产量最高。本文从草珊瑚内生真菌中筛选具有抑菌活性的菌株,并研究其抑菌活性物质的实验结果,为开发相关微生物源抗菌剂提供了依据。

关键词：草珊瑚内生真菌抑菌活性拟可可毛球二孢菌毛色二孢霉素发酵条件

拟可可毛球二孢菌等7种草珊瑚内生真菌发酵产物的抑菌活性研究

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福建农业学报 2022年第8期37卷 1056-1066页

作者：蒙思妤邓业成廖金梅韦坚芬邓志勇骆海玉珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室/广西师范大学生命科学学院广西桂林541006

【目的】从7种草珊瑚内生真菌中筛选出具有广谱抑菌活性的菌株。【方法】采用菌丝生长速率法和最低抑制浓度法对7种草珊瑚内生真菌的发酵产物进行抑菌活性测定。【结果】7株草珊瑚内生真菌中,J-10较其余菌株不同溶剂萃取层对供试致病菌... 详细信息

【目的】从7种草珊瑚内生真菌中筛选出具有广谱抑菌活性的菌株。【方法】采用菌丝生长速率法和最低抑制浓度法对7种草珊瑚内生真菌的发酵产物进行抑菌活性测定。【结果】7株草珊瑚内生真菌中,J-10较其余菌株不同溶剂萃取层对供试致病菌株表现出广谱的抑菌活性,其甲醇和乙酸乙酯萃取物在质量浓度为2 mg·mL^(-1)时对罗汉果根腐病菌和甘蔗凤梨病菌抑菌率介于84.84%~88.51%。J-10为拟可可毛球二孢菌,其发酵产物的乙酸乙酯萃取物抑菌活性最为显著,对7种病原真菌的EC_(50)值介于0.1995~1.1722 mg·mL^(-1),其中对玉米大斑病菌的毒力最强,对罗汉果根腐病菌的毒力最弱;J-10菌丝体甲醇提取物对7种病原真菌的EC50值介于0.1255~9.4687 mg·mL^(-1),对茶轮斑病菌的毒力最强,对罗汉果根腐病菌的毒力最弱。同时,其乙酸乙酯萃取物对普通变形杆菌、伤寒沙门氏菌、罗汉果青枯菌、大肠杆菌、溶壁微球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌11种致病细菌的抑菌效果优于甲醇和正丁醇萃取物,经24 h处理后的MIC介于0.125~2.5 mg·mL^(-1)。【结论】拟可可毛球二孢菌具有抑菌广谱性,活性物质主要集中于乙酸乙酯萃取物中,属于中等极性。

关键词：草珊瑚内生真菌拟可可毛球二孢菌代谢产物抗菌活性

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黄皮等23种植物提取物的抑菌活性研究

河南农业科学 2022年第5期51卷 84-95页

作者：廖金梅邓业成邓志勇蒙思妤韦坚芬黄玲玉徐紫薇骆海玉珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室/广西师范大学生命科学学院广西桂林541006

采用带毒平板法及生长速率法研究了黄皮等23种植物甲醇提取物对8种植物病原真菌和9种动物病原细菌的抑制作用,旨在为开发植物源抑菌剂提供科学依据。结果表明,质量浓度为10 mg/mL时,黄皮、杨梅、五爪金龙、苏门白酒草、假臭草、商陆6种... 详细信息

采用带毒平板法及生长速率法研究了黄皮等23种植物甲醇提取物对8种植物病原真菌和9种动物病原细菌的抑制作用,旨在为开发植物源抑菌剂提供科学依据。结果表明,质量浓度为10 mg/mL时,黄皮、杨梅、五爪金龙、苏门白酒草、假臭草、商陆6种植物的甲醇提取物对植物病原真菌具有较好的抑菌活性,黄皮叶甲醇提取物对8种植物病原真菌的抑菌率均在60%以上,有效抑制中质量浓度(EC50)为0.033 2~5.172 7 mg/mL。黄皮、杨梅、五爪金龙、苏门白酒草、假臭草、蟛蜞菊等15种植物甲醇提取物对至少1种动物病原细菌具有较好的抑菌活性,最低抑制质量浓度(MIC)为0.625~10 mg/mL,其中黄皮叶甲醇提取物的抑菌活性优于其他植物提取物。黄皮叶甲醇提取物经液-液萃取分离得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和萃余物,当质量浓度为5 mg/mL时,其石油醚萃取物对8种植物病原真菌的抑菌活性显著优于其余3种萃取物,抑菌率为65.14%~88.67%。黄皮叶甲醇提取物的石油醚萃取物对9种动物病原细菌的MIC为0.156 3~1.250 0 mg/mL,其抑菌效果优于其余3种萃取物。可见,黄皮叶在植物源抑菌剂方面具有较好的开发应用价值,抑菌活性成分主要存在于石油醚萃取物中。

关键词：黄皮植物提取物抑菌活性萃取最低抑制质量浓度

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手机丢了后……

小学生作文辅导（作文与阅读版） 2014年第5期 28-29页

作者：蒙思妤江西省赣州市章贡区西津路小学六(1)班

前几天，我坐班车从赣州去妈妈在南康所开的店里。一到南康，刚下车的我有些头晕，就去附近的便利店买了一包梅子，边吃边朝妈妈店里走去。走到半路，我忽然想起应该给妈妈打个电话，告诉她到了，我这才发现——我的手机不见了!

关键词：手机妈妈便利店电话

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袋子长“脚”后……

少年大世界（小学4－6年级） 2014年第3期 28-29页

作者：蒙思妤江西省赣州市章贡区西津路小学六(1)班

曲圣文老师点评作文曲圣文老师，中国散文学会会员、《海燕》文学月刊副主编、编审、作家。他熟悉中小学语文教材，熟知学生心理，擅将文学写作与应试技巧融为一体。经他指导的学生，作文成绩都有大幅提高。

关键词：小学语文教材学生心理文学月刊《海燕》文学写作副主编作文老师

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那一刻,保持镇定

课堂内外（创新作文）（小学版） 2014年第7期 34-35页

作者：蒙思妤熊饼子江西省赣州市章贡区西津路小学六(1)班

前几天，我坐班车从赣州去南康找妈妈。到了南康后，因为坐了较长时间的车，我有些头晕，就去附近的便利店买了一包梅子，边吃边朝妈妈工作的店里走去。走到半路，我忽然想起应该给妈妈打个电话报平安。这时我才发现——手机不见了!一... 详细信息

前几天，我坐班车从赣州去南康找妈妈。到了南康后，因为坐了较长时间的车，我有些头晕，就去附近的便利店买了一包梅子，边吃边朝妈妈工作的店里走去。走到半路，我忽然想起应该给妈妈打个电话报平安。这时我才发现——手机不见了!一回想，手机应该落在便利店里了，因为付钱时手机把钱给压住了，我把手机拿出来放在了店里的柜台上。我赶紧往回跑。

关键词：便利店手机妈妈柜台

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袋子“长腿”后

小学生作文辅导(上旬) 2014年第3期 6-6页

作者：蒙思妤江西省赣州市章贡区西津路小学六(1)班

星期天下午,我和黄湘惠一起去"好街坊"糕点店吃东西。一进店,我随手把带来的袋子放在店里的餐桌上,然后就和黄湘惠去点东西了。点好东西后,我们就坐在椅子上等美食上桌了。我们在这边等,谁知服务员却把我们所点的糕点全放到另一张桌子... 详细信息

星期天下午,我和黄湘惠一起去"好街坊"糕点店吃东西。一进店,我随手把带来的袋子放在店里的餐桌上,然后就和黄湘惠去点东西了。点好东西后,我们就坐在椅子上等美食上桌了。我们在这边等,谁知服务员却把我们所点的糕点全放到另一张桌子上了。一开始我们不明所以,低头一看才知道,"哦!原来桌子很脏,我们刚才怎么没发现呢!"美食上桌,我们两个"吃货"就什么也不顾,直奔美食而去了!在另一桌兴高采烈地吃完"山珍海味",擦擦嘴

关键词：服务员

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袋子长“腿”后

创新作文(小学版) 2014年第12期 14-14页

作者：蒙思妤江西赣州市章贡区西津路小学六(1)班

报道亮点:题目别致有趣哈皮审核:报道的题目让人眼前一亮:袋子怎么能长"腿"?长"腿"后发生了什么事?瞬间抓住读者的眼球,真是高手啊!此外,报道事例叙述生动,趣味性强,语言通俗却不失风趣。最后,作者简单的一句感慨,发自肺腑,也让人宽慰... 详细信息

报道亮点:题目别致有趣哈皮审核:报道的题目让人眼前一亮:袋子怎么能长"腿"?长"腿"后发生了什么事?瞬间抓住读者的眼球,真是高手啊!此外,报道事例叙述生动,趣味性强,语言通俗却不失风趣。最后,作者简单的一句感慨,发自肺腑,也让人宽慰。看了这篇报道,哈哈店长的口头禅都变霸气了。之前是"钥匙、钥匙快回来",现在是"钥匙都长‘腿’了,回来就给它动手

关键词：服务员

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袋子长“腿”后

快乐作文（高年级版） 2014年第4期 31-31页

作者：蒙思妤江西省赣州市西津路小学六年级

星期天下午，我和黄湘惠一起去“好。街坊”糕点店吃东西。一进店，我随手把带来的袋子放在店里的餐桌上，然后就和黄湘惠去点东西了。点好东西后，我们就坐在椅子上等美食上桌了。我们在这边等，谁知服务员却子呢？

关键词：小学生作文语文学习阅读知识