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NaCl浓度对金黄色葡萄球菌核酸酶酸变性态结构的影响

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中国科学（B辑） 1995年第1期25卷 60-65页

作者：毕喜平蒋美岩静国忠中国科学院生物物理研究所北京100101

金黄色葡萄球菌核酸酶类似物(SNaseR)的酸变性态(U_A)在较高NaCl浓度下可转变为另一种稳定的酸变性态(A态),即U_A→***谱测定结果表明A态结构中具有大量二级结构.体积排除色谱测定表明A态具有接近于天然态的堆积密度.A态可与疏水性荧光... 详细信息

金黄色葡萄球菌核酸酶类似物(SNaseR)的酸变性态(U_A)在较高NaCl浓度下可转变为另一种稳定的酸变性态(A态),即U_A→***谱测定结果表明A态结构中具有大量二级结构.体积排除色谱测定表明A态具有接近于天然态的堆积密度.A态可与疏水性荧光探针ANS结合.A态的这些特征表明其结构类似于熔球态.NaCl和HCl诱寻的U_A→A构象转变曲线相互重合,表明U_A→A转变是由C1^-与A态酶分子结合所引起的.C1^-结合到A态酶分子上稳定了该酶的α螺旋结构.盐酸胍可使A态发生变性.

关键词：葡萄球菌核酸酶熔球态酸变性态氯化钠球蛋白

在金黄色葡萄球菌核酸酶测活体系中Ca^(2+)与底物DNA的结合

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生物物理学报 1992年第3期8卷 384-389页

作者：蒋美岩静国忠刘利军邹强中国科学院生物物理研究北京100101

将携带金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)基因的质粒pFOG405转化到大肠杆菌SE6004中,获得分泌表达的SNase,在该酶的测活体系中,观察到激活剂Ca^(2+)与底物DNA微弱结合,引起底物DNA的UV光谱在260nm附近明显下降。在Ca^(2+)浓度为10mM时,底物DN... 详细信息

将携带金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)基因的质粒pFOG405转化到大肠杆菌SE6004中,获得分泌表达的SNase,在该酶的测活体系中,观察到激活剂Ca^(2+)与底物DNA微弱结合,引起底物DNA的UV光谱在260nm附近明显下降。在Ca^(2+)浓度为10mM时,底物DNA紫外区CD光谱在270—280nm和210—230nm处〔θ〕值减少,〔θ〕值为零的点从260nm移至257nm。这一结果表明,Ca^(2+)与底物DNA在缺少SNase的情况下仍能结合,引起DNA分子构象变化。

关键词：葡萄球菌核酸酶

金黄色葡萄球菌核酸酶基因的片段缺失与定点突变

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生物物理学报 1992年第3期8卷 455-462页

作者：刘利军静国忠蒋美岩刘志革邹强中国科学院生物物理研究所北京100101

金黄色葡萄球菌核酸酶R(SNase R)是金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase A)的一种类似物,具有与SNaseA相同的酶活性,与SNase A唯一不同之处是在N端多出6个氨基酸残基。为了得到完整的SNase基因并使其在***中表达,我们利用单链U模板—单引物突变... 详细信息

金黄色葡萄球菌核酸酶R(SNase R)是金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase A)的一种类似物,具有与SNaseA相同的酶活性,与SNase A唯一不同之处是在N端多出6个氨基酸残基。为了得到完整的SNase基因并使其在***中表达,我们利用单链U模板—单引物突变法,将为6个额外氨基酸残基编码的18个氨基酸残基删除,其突变率可达90％。进而,完整的SNase A基因被重组入表达载体pBV221。细菌表达产物的PAGE分析结果指出,SNase A在***中得到高效表达。与此同时,我们利用两个不同的引物在单链U模板上同时介导两种不同类型的突变(片段缺失、碱基取代)其突变率可达83％以上,这为进行多种类型的高效突变提供一个有用的方法。本文也对影响突变率的某些实验因素进行了讨论。

关键词：核酸酶R 葡萄球菌片断缺失

大肠杆菌碱性磷酸酶(PhoA)基因启动子及信号肽核苷酸顺序测定与解析

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生物化学与生物物理进展 1991年第6期18卷 439-442页

作者：静国忠刘莉军蒋美岩中国科学院生物物理研究所北京100012

在pFOG405重组质粒中的大肠杆菌碱性磷酸酶基因(PhoA)的启动子及信号肽区的核苷酸顺序被测定并同Kikuchi等人在pYK190重组质粒中所报道的顺序进行了比较。结果指出,包含有PhoA基因启动子及信号肽的PvuⅡ-HpaⅠ片段对于调控外源基因的表... 详细信息

在pFOG405重组质粒中的大肠杆菌碱性磷酸酶基因(PhoA)的启动子及信号肽区的核苷酸顺序被测定并同Kikuchi等人在pYK190重组质粒中所报道的顺序进行了比较。结果指出,包含有PhoA基因启动子及信号肽的PvuⅡ-HpaⅠ片段对于调控外源基因的表达是足够的;启动子5’-端的二元对称结构(26bp)的缺失并不影响外源基因的表达水平。由于pYK190及pFOG405中PhoA基因启动子的上游区核苷酸顺序的不同源性,说明此上游区顺序与PhoA启动子调控下的外源基因表达无关。这一分析为我们利用PvuⅡ-HpaⅡ片段组建高效分泌表达载体及研究基因表达调控提供了有用信息。

关键词：大肠杆菌碱性磷酸酶顺序分析

NaCl-induced conformational transition of the acid-unfolded state of staphylococcal nuclease

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Science China Chemistry 1995年第10期38卷 1222-1229页

作者：毕喜平蒋美岩静国忠 Institute of Biophysics Chinese Academy of SciencesBeijing 100101China

The acid-unfolded state(U_A)of staphylococcal nuclease(SNase)can fold into a state(Astate)in acidic solution of high NaCl concentration,that is,U_A→*** transition curve of U_A→A inducedby the increasing of NaCl concentration was superimposed with that induced by the increasing of HClconcentration,indicating that the U_A → A transition is induced by the chloride anion being inclined to bind onsome parts of SNase molecules in A *** dichroism(CD)spectra showed that A state hassubstantial secondary *** exclusion chromatography measurement indicated that A state is compact *** A state can bind with 1-anilino-naphthalene-8-sulfonate(ANS),a fluorescent probe *** results indicated that A state of SNaseR is a molten globule-like ***,ourresults showed that A state can be unfolded by guanidine hydrochloride(Gu · HCl),implying that thehydrophobic interaction between side chains in A state is responsible to its stabilization.

关键词： staphylococcal nuclease molten globular state acid-unfolded state

RNA重组实验——将poly(A)引入Qβ噬菌体

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中国科学(B辑化学生物学农学医学地学) 1982年第2期 130-138页

作者：申同健蒋美岩中国科学院生物物理研究所中国科学院生物物理研究所北京

本文将poly(A)连接在两个部分降解的Qβ RNA分子中间,然后感染***原生质体,得到了含有poly(A)的重组噬菌体,这些噬菌菌体可以感染*** Hfr H,并携带引入的poly(A)分子进行繁殖,对其中的一株——907噬菌体的RNA分析表明,它所携带的poly(A... 详细信息

本文将poly(A)连接在两个部分降解的Qβ RNA分子中间,然后感染***原生质体,得到了含有poly(A)的重组噬菌体,这些噬菌菌体可以感染*** Hfr H,并携带引入的poly(A)分子进行繁殖,对其中的一株——907噬菌体的RNA分析表明,它所携带的poly(A)链长约为40。

关键词：噬菌体柱层析裂解液 poly RNA

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ST-Ⅱ信号肽基因的化学合成及克隆

生物工程学报 1991年第4期7卷 378-381页

作者：静国忠张广法蒋美岩刘利军中国科学院生物物理研究所

外源基因在原核细胞中的分泌表达仍然是很活跃的研究领域。Fujimoto等系统地分析比较了大肠杆菌内毒素ST-Ⅰ、ST-Ⅱ、LT-A、LT-B信号肽在人表皮生长因子(hEGF)分泌表达中的作用指出,由ST-Ⅱ信号肽组成的表达载体在大肠杆菌中能精确加工... 详细信息

外源基因在原核细胞中的分泌表达仍然是很活跃的研究领域。Fujimoto等系统地分析比较了大肠杆菌内毒素ST-Ⅰ、ST-Ⅱ、LT-A、LT-B信号肽在人表皮生长因子(hEGF)分泌表达中的作用指出,由ST-Ⅱ信号肽组成的表达载体在大肠杆菌中能精确加工并使hEGF这样小的多肽成功地分泌到细胞周质及培养基中。

关键词：信号肽基因化学合成克隆

RNA RECOMBINATION——INTRODUCING POLY(A) INTO Qβ PHAGE

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Science in China,Ser.B 1982年第5期25卷 485-495页

作者：申同健蒋美岩 The Second Loboratory Institute of Biophysics Academia Sinica

Poly(A) molecule is inserted between two QβRNA molecules which have been partiallydegraded, one from the 3’-end and another from the 5’-end. E. coli HfrH is infected with thesemosaic RNA molecules and a few recombinated phages carrying poly(A) are obtained. Analysisof the RNA of 907 phage (one of these recombination phages) shows that the chain lengthof the poly(A) it contained is about 40.

关键词： RNA RECOMBINATION INTO Q INTRODUCING POLY PHAGE

金黄色葡萄球菌核酸酶去C-末端肽段在***中的高效表达

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自然科学进展（国家重点实验室通讯） 1995年第5期5卷 569-575页

作者：静国忠刘利军刘志革邹强蒋美岩中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

报道了7个金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)C-末端缺失突变体在E. coli细胞中的高效表达,其表达量可占细胞总蛋白量的16.90％～57.7％,即使仅由52个残基组成的小肽段,也能在细胞中稳定积累,然而,SNase的C-末端缺失明显地影响到肽段的分泌表... 详细信息

报道了7个金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)C-末端缺失突变体在E. coli细胞中的高效表达,其表达量可占细胞总蛋白量的16.90％～57.7％,即使仅由52个残基组成的小肽段,也能在细胞中稳定积累,然而,SNase的C-末端缺失明显地影响到肽段的分泌表达水平乃至越膜分泌。实验指出,7个肽段都能同抗SNase多克隆抗体呈特异性免疫反应,较长的肽段仍保留着不同程度的SNase的催化活性。

关键词：葡萄球菌核酸酶去C-末端肽段蛋白质肽