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糖丝菌属放线菌研究进展

微生物学报 2022年第5期62卷 1600-1612页

作者：张娅曹成亮李荣鹏蒋继宏江苏师范大学生命科学学院江苏省药用植物生物技术重点实验室江苏徐州221116

1984年美国著名放线菌分类学家Labeda建立的糖丝菌属(Saccharothrix),是典型的丝状稀有放线菌重要类群之一。糖丝菌的气生菌丝在孢子形成过程中通常呈现锯齿状形态,细胞壁含meso-二氨基庚二酸,磷酸类脂主要包括磷脂酰乙醇胺,优势甲基萘... 详细信息

1984年美国著名放线菌分类学家Labeda建立的糖丝菌属(Saccharothrix),是典型的丝状稀有放线菌重要类群之一。糖丝菌的气生菌丝在孢子形成过程中通常呈现锯齿状形态,细胞壁含meso-二氨基庚二酸,磷酸类脂主要包括磷脂酰乙醇胺,优势甲基萘醌是MK-9(H4)和MK-10(H4),基因组中16S rRNA基因的特异性诊断核苷酸序列为CAC(607–609)和GTG(617–619)。近年来基因组学研究证实,糖丝菌基因组中存在丰富的聚酮合成酶、非核糖体多肽合成酶等基因簇,具有生物合成化学结构新颖、生物活性多样的次生代谢物与酶产物的潜能,且研究证实糖丝菌能够代谢产生已知抗生素的衍生物或新骨架结构的抗生素,如二硫吡咯酮类、内酰胺类、蒽环类和氯霉素等新抗生素,在抗病毒、抑菌和抗肿瘤等方面具有巨大的医药价值。同时,糖丝菌也是工业酶制剂生产菌种资源的新成员,在酶制剂应用方面具有较强的开发潜力,其代谢产生的几丁质酶、纤维素酶等新型活性酶在现代农业以及轻工业等领域有着广泛应用。另外,糖丝菌凭借自身独特的遗传代谢多样性在土壤有机污染物降解和重金属污染修复中扮演着重要角色。结合近期本实验室发表的一株糖丝菌新种,查阅相关文献资料,本文从糖丝菌属的分类学典型特征、基因组学、次级代谢产物生物合成以及产酶应用开发进行了综述,以期为进一步挖掘糖丝菌的应用潜力提供理论基础。

关键词：糖丝菌属基因组挖掘次级代谢产物酶活性

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桦纤孔菌有性生殖相关特征及交配型位点分析

菌物学报 2023年第2期42卷 520-529页

作者：孙勇张艺嘉曹小迎周降生蒋继宏江苏师范大学生命科学学院、江苏省药食植物生物技术国家重点实验室(培育) 江苏徐州221116

对桦纤孔菌菌株MDJCBS88的显微形态、菌丝及担孢子核相进行了观察。采用棉籽壳培养基对担孢子萌发形成的菌株进行栽培试验,筛选出不形成子实体或子实体发育不完整的菌株,将这些菌株在平板上进行了亲和试验,分析桦纤孔菌的有性生殖方式;... 详细信息

对桦纤孔菌菌株MDJCBS88的显微形态、菌丝及担孢子核相进行了观察。采用棉籽壳培养基对担孢子萌发形成的菌株进行栽培试验,筛选出不形成子实体或子实体发育不完整的菌株,将这些菌株在平板上进行了亲和试验,分析桦纤孔菌的有性生殖方式;并基于基因组序列进行交配型基因克隆验证,分析桦纤孔菌的交配型位点结构。显微观察发现,桦纤孔菌菌丝没有锁状联合结构,菌丝细胞无核到多核;子实层担孢子可含0–4个不等的细胞核,不同时期弹射的担孢子含有的细胞核数量不同。桦纤孔菌担孢子萌发率极低,能萌发的担孢子多为早期弹射的担孢子;培养基也影响担孢子的萌发率,与PDA培养基和CYM培养基相比,桦木屑培养基最适合桦纤孔菌担孢子萌发,萌发率为4.55%。从担孢子萌发的96个菌株中获得了2个不结实菌株和9个结实不产孢菌株,占11.5%,这些菌株间亲和试验出现不同的表现特征,包括形成产孢子实体,产生菌丝纽结,相互融合和相互拮抗等现象,认为桦纤孔菌的有性生殖以次级同宗结合为主,并受交配型基因控制。交配型位点克隆测序后分析发现,桦纤孔菌交配型A位点共14034bp,含有一个MIP基因和两组HD1和HD2基因;交配型B位点包含3个疑似信息素受体基因和1个信息素前体编码基因。

关键词：桦纤孔菌显微观察核相有性生殖交配型位点

南方红豆杉内生真菌多样性及内生真菌对紫杉醇和中间产物含量的影响

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植物资源与环境学报 2022年第4期31卷 50-56页

作者：徐玲霞柳巧王景仪董蒙蒙蒋继宏曹小迎江苏师范大学生命科学学院江苏省药用植物生物技术重点实验室江苏徐州221116

使用5种分离培养基分离南方红豆杉〔Taxus wallichiana ***(Lemée et H.Lév.)*** et ***〕根、枝和叶中的内生真菌,并对分离的菌株进行分子鉴定;采用HPLC技术分析不同内生真菌处理组南方红豆杉叶中紫杉醇及中间产物巴卡亭Ⅲ和10-去乙... 详细信息

使用5种分离培养基分离南方红豆杉〔Taxus wallichiana ***(Lemée et H.Lév.)*** et ***〕根、枝和叶中的内生真菌,并对分离的菌株进行分子鉴定;采用HPLC技术分析不同内生真菌处理组南方红豆杉叶中紫杉醇及中间产物巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)的含量差异。结果表明:在南方红豆杉的根、枝和叶中共分离到69株内生真菌,隶属于26属36种;Muyocopron Speg.属有15株内生真菌,占分离的内生真菌菌株总数的21.7%,为南方红豆杉内生真菌的优势属。在19个内生真菌处理组南方红豆杉的叶中可同时检测到紫杉醇、巴卡亭Ⅲ和10-DAB,且这些处理组的巴卡亭Ⅲ和10-DAB含量均低于对照组(未喷洒内生真菌诱导子溶液),而紫杉醇含量却存在明显差异。其中,10个内生真菌处理组的紫杉醇含量高于对照组,以Pseudodidymocyrtis lobariellae Flakus,*** et Etayo处理组的紫杉醇含量最高(0.228 mg·g^(-1)),Gymnopilus luteofolius(Peck)Singer和Coniochaeta hoffmannii(***)***,Genéet Guarro处理组的紫杉醇含量也较高(分别为0.180和0.139 mg·g^(-1))。重复验证结果表明:与对照组相比,***处理组南方红豆杉叶中紫杉醇含量显著升高,但巴卡亭Ⅲ和10-DAB含量明显下降。研究结果显示:南方红豆杉内生真菌多样性较高,部分内生真菌能够促进南方红豆杉叶中紫杉醇的合成,其中,***、***和***可作为调控南方红豆杉紫杉醇积累的候选菌。

关键词：南方红豆杉内生真菌紫杉醇中间产物候选菌

SPE-pECE联动快速测定甘薯中常见的3种链格孢霉菌毒素

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SPE-pECE联动快速测定甘薯中常见的3种链格孢霉菌毒素

内生真菌KLBMP0506对拟南芥的促生作用

中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会

作者：袁博薛羚伟丁盼蒋继宏江苏省药用植物生物技术重点实验室

以侵染链格孢菌的甘薯为材料,建立同时检测链格孢酚甲基乙醚(AME)、链格孢酚(AOH)和链格孢毒素(ALT)3种链格孢霉菌毒素的SPE-pCEC快速检测方法。待测样品通过乙腈提取,无水MgSO和NaCl脱水盐析,CSPE萃取净化,以C18毛细管色谱柱为分离柱,... 详细信息

以侵染链格孢菌的甘薯为材料,建立同时检测链格孢酚甲基乙醚(AME)、链格孢酚(AOH)和链格孢毒素(ALT)3种链格孢霉菌毒素的SPE-pCEC快速检测方法。待测样品通过乙腈提取,无水MgSO和NaCl脱水盐析,CSPE萃取净化,以C18毛细管色谱柱为分离柱,以含0.1%甲酸的乙腈为流动相进行梯度洗脱,利用荧光检测器进行检测。该方法在2.0μg～200μg/L范围内线性关系良好,相关系数R2≥0.9915,检出限为0.1～0.9μg/kg。结果表明,该方法快速、准确、灵敏,适用于甘薯中常见的3中链格孢霉毒素的快速确认检测。

关键词：加压毛细管电色谱固相萃取链格孢霉毒素

来源： cnki会议评论

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微生物学报 2023年第10期63卷 4051-4063页

作者：陈雨杰蒋侄丽柳巧徐欢吕梦娇蒋继宏李露丹江苏师范大学生命科学学院江苏省药食植物生物技术国家重点实验室(培育)江苏徐州221116

【目的】研究植物内生菌Wickerhamomyces ***0506对拟南芥(Arabidopsis thaliana)的促生作用及潜在的促生机制。【方法】本研究以野生型拟南芥为试验材料,将其与菌株KLBMP0506进行平板共培养及盆栽接种试验,并测定拟南芥鲜重、干重、主... 详细信息

【目的】研究植物内生菌Wickerhamomyces ***0506对拟南芥(Arabidopsis thaliana)的促生作用及潜在的促生机制。【方法】本研究以野生型拟南芥为试验材料,将其与菌株KLBMP0506进行平板共培养及盆栽接种试验,并测定拟南芥鲜重、干重、主根长、侧根数、叶绿素含量和可溶性糖含量等生长、生理指标,同时对筛选的与拟南芥侧根、主根形成及生长素合成和运输相关的11个基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)分析。【结果】接种目的菌株KLBMP0506后,平板试验的拟南芥鲜重及侧根、盆栽试验的拟南芥鲜重、干重、茎长、叶绿素含量和可溶性糖含量均有一定程度的增加;分隔平板试验及菌株KLBMP0506发酵液中促生活性物质分析显示,该菌株产生的挥发性有机物质及其发酵液中的正丁醇和乙酸乙酯提取物均对拟南芥有明显的促生作用;此外,qRT-PCR分析显示KLBMP0506处理后,拟南芥中与侧根形成相关基因ABI4、FLA1的表达出现不同程度的下调,与生长素合成、运输相关基因AUX1、EIR1、YUC4的表达整体呈上调趋势,表明菌株KLBMP0506可能通过调控拟南芥中与侧根形成以及与生长素合成和运输相关基因的表达,而实现对拟南芥的促生作用。【结论】本研究明确了菌株KLBMP0506对模式植物拟南芥的促生作用,为其开发成为微生物菌肥提供理论依据。

关键词：拟南芥内生真菌促生作用 qRT-PCR

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柱塞泵壳体注塑模具的设计

中国塑料 1998年第6期12卷 90-93页

作者：蒋继宏江西农业药械厂

介绍了柱塞式液压泵塑料壳体注塑成型模具的结构设计和工作原理，该模具具有简单合理、动作可靠等特点。

关键词：塑料泵壳体注塑模具结构设计柱塞泵

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响应面法优化南方红豆杉干细胞培养体系

生物学杂志 2022年第5期39卷 108-115页

作者：徐玲霞王景仪蒋继宏曹小迎江苏师范大学生命科学学院江苏省药用植物生物技术重点实验室徐州221116

红豆杉细胞培养是生产紫杉醇的有效途径之一,而干细胞的生长速度及紫杉醇的诱导生产要优于普通细胞。以南方红豆杉为材料,在单因素试验的基础上应用响应面法研究不同质量浓度的GA、柠檬酸、抗坏血酸、活性炭对红豆杉干细胞的生长和褐化... 详细信息

红豆杉细胞培养是生产紫杉醇的有效途径之一,而干细胞的生长速度及紫杉醇的诱导生产要优于普通细胞。以南方红豆杉为材料,在单因素试验的基础上应用响应面法研究不同质量浓度的GA、柠檬酸、抗坏血酸、活性炭对红豆杉干细胞的生长和褐化率的影响。响应面法分析表明:在干细胞基础培养基中,添加GA0.5 mg/L、柠檬酸150 mg/L、抗坏血酸100 mg/L和活性炭100 mg/L为促进南方红豆杉干细胞增殖、抑制褐化的最佳复配质量浓度。研究为南方红豆杉干细胞培养生产紫杉醇奠定基础。

关键词：南方红豆杉干细胞培养培养基响应面分析

黔中白云岩风化壳稀土层可培养放线菌多样性及吸附La(Ⅲ)特性研究

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环境科学学报 2022年第11期42卷 245-256页

作者：高源张娅刘凌霄姚家祺曹成亮李荣鹏蒋继宏江苏师范大学生命科学学院江苏省药用植物生物技术重点实验室徐州221116 江苏师范大学生命科学学院徐州市微生物资源前期开发重点实验室徐州221116

微生物在风化壳稀土元素迁移、富集过程中一直扮演着重要角色.前期研究采用宏基因组技术分析黔中地区白云岩风化壳稀土富集层微生物多样性时,发现放线菌门为主要优势类群之一.本实验采用纯培养技术研究贵州喀斯特稀土层可培养放线菌生... 详细信息

微生物在风化壳稀土元素迁移、富集过程中一直扮演着重要角色.前期研究采用宏基因组技术分析黔中地区白云岩风化壳稀土富集层微生物多样性时,发现放线菌门为主要优势类群之一.本实验采用纯培养技术研究贵州喀斯特稀土层可培养放线菌生物多样性,并初步研究了放线菌对稀土La^(3+)的吸附过程,以阐明微生物与稀土离子的相互作用机制,完善稀土元素的生物地球化学循环过程.实验采用选择性培养技术共获得190株纯培养物,分别归属于放线菌门19个属,其中,优势菌属有链霉菌属(Streptomyces)、诺卡氏菌属(Nocardia)和小单孢菌属(Micromonospora),分别占总分离菌株的62.1%、12.6%和11.1%.稀土耐受性能较好的菌株Micromonospora aurantiaca KLBMP9018、Streptomyces mirabilis KLBMP8969和Nocardia ***9014在La^(3+)浓度为20 mg·L^(-1)的20 mL溶液中最大吸附量(干重,m/m)分别达到24.32、25.37和20.74 mg·g^(-1).动力学方程拟合结果显示,3株放线菌对La^(3+)的生物吸附过程均遵循拟二级动力学方程,表明吸附过程是一个物理和化学共同作用的结果.同时,Langmuir等温吸附平衡模型能更好地拟合3种放线菌对La^(3+)的吸附过程,表明菌体细胞表面为单分子层吸附.XPS结果显示,吸附在菌体细胞表面的是La^(3+),没有发生还原反应.而FRIR分析表明,菌体细胞壁的氨基、羟基和羧基官能团参与了La^(3+)的吸附过程.这些结果进一步证实黔中地区白云岩风化壳稀土富集层中栖息着丰富多样的放线菌类群,且这些放线菌的生长代谢活动对稀土元素La的地球化学循环过程具有重要作用.

关键词：放线菌多样性白云岩风化壳生物吸附稀土元素 La^(3+) 吸附动力学等温吸附模型黔中地区

Logistic方程在蜡蚧轮枝菌液体发酵中的应用

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南京林业大学学报（自然科学版） 2004年第6期28卷 73-75页

作者：李锋殷华蒋继宏徐州师范大学江苏省药用植物生物技术重点实验室江苏徐州221116

分析了蜡蚧轮枝菌Verticilliumlecanii(Zimmermann)Viegas在19L发酵罐液体发酵培养过程中的菌体生长和产孢量增长变化趋势,提出可以应用Logistic方程模拟该增长变化趋势,运用实验数据计算出方程的参数,建立了蜡蚧轮枝菌液体分批发酵中... 详细信息

分析了蜡蚧轮枝菌Verticilliumlecanii(Zimmermann)Viegas在19L发酵罐液体发酵培养过程中的菌体生长和产孢量增长变化趋势,提出可以应用Logistic方程模拟该增长变化趋势,运用实验数据计算出方程的参数,建立了蜡蚧轮枝菌液体分批发酵中生物量和产孢量的动态变化模型。仿真计算结果表明:Logistic模型预测值与实验数据拟合度较好,能很好的反映蜡蚧轮枝菌液体分批发酵的过程。

关键词： Logistic方程蜡蚧轮枝菌液体分批发酵拟合