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微丝骨架通过调控线粒体膜透性影响拟南芥耐盐性

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植物生理学报 2012年第8期48卷 759-766页

作者：潘振蒋湘宁盖颖北京林业大学生命科学与技术学院北京100083

植物微丝参与了许多重要的细胞生理活动,与植物耐盐性有密切的联系。在微丝解聚剂Latrunculin B(LatB)存在的情况下,拟南芥会表现出盐胁迫敏感。本研究结果表明盐胁迫下LatB可增加拟南芥线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeabilit... 详细信息

植物微丝参与了许多重要的细胞生理活动,与植物耐盐性有密切的联系。在微丝解聚剂Latrunculin B(LatB)存在的情况下,拟南芥会表现出盐胁迫敏感。本研究结果表明盐胁迫下LatB可增加拟南芥线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放度,导致线粒体膜电势下降和细胞色素C的释放。而加入MPTP抑制剂环孢素A(CsA)后,膜电势下降程度降低,细胞色素C释放减少,解聚微丝造成的盐敏感表型得到一定程度恢复。

关键词：盐胁迫线粒体细胞骨架微丝解聚

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胡杨细胞和组织结构与其耐盐性关系的研究

Acta Botanica Sinica 1999年第6期41卷 576-579页

作者：谷瑞升蒋湘宁郭仲琛北京林业大学森林生物学中心中国科学院植物研究所

利用电子显微镜和光学显微镜中相差和微分干涉等技术对胡杨（ＰｏｐｕｌｕｓｅｕｐｈｒａｔｉｃａＯｌｉｖ．）悬浮培养的细胞和试管苗的组织和细胞结构以及盐胁迫对其结构影响进行了研究。与毛白杨（Ｐ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａＣａｒ．）... 详细信息

利用电子显微镜和光学显微镜中相差和微分干涉等技术对胡杨（ＰｏｐｕｌｕｓｅｕｐｈｒａｔｉｃａＯｌｉｖ．）悬浮培养的细胞和试管苗的组织和细胞结构以及盐胁迫对其结构影响进行了研究。与毛白杨（Ｐ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａＣａｒ．）相比，胡杨存在与耐盐相关的结构，如根尖具有较发达的表皮和外皮层，根毛着生靠近根端；叶片输导组织不发达；细胞中线粒体和质体较丰富。盐胁迫和渗透胁迫可使胡杨细胞质中的线粒体和质体变得更为丰富，质体中内含体增多，在细胞质中和液泡内缘出现明显的嗜锇物质，在悬浮培养的细胞内表现出明显的丝状结构，细胞核变大，核仁明显。受到８ｇ／ＬＮａＣｌ胁迫的胡杨根尖分生细胞仍可维持正常的结构。在超微结构研究中还发现，胡杨细胞膜与细胞壁之间呈齿状结合，说明了膜与壁之间结合的牢固性和稳定性，解释了胡杨细胞在胁迫中不易发生质壁分离的原因。

关键词：胡杨盐胁迫渗透胁迫细胞结构组织结构

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胡杨离体器官发生及试管无性系的建立

Acta Botanica Sinica 1999年第1期41卷 29-33页

作者：蒋湘宁谷瑞升郭仲琛北京林业大学森林生物学中心北京100083 中国科学院植物研究所北京100093

研究了离体条件下胡杨（Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｅｕｐｈｒａｔｉｃａ　Ｏｌｉｖｅｒ）茎段、叶片及愈伤组织的器官发生和植株再生技术。离体培养以ＭＳ为基本培养基并附加４０ｍｇ／Ｌ腺嘌呤和５００ｍｇ／Ｌ水解乳蛋白。离体叶片和茎段在Ｂ... 详细信息

研究了离体条件下胡杨（Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｅｕｐｈｒａｔｉｃａ　Ｏｌｉｖｅｒ）茎段、叶片及愈伤组织的器官发生和植株再生技术。离体培养以ＭＳ为基本培养基并附加４０ｍｇ／Ｌ腺嘌呤和５００ｍｇ／Ｌ水解乳蛋白。离体叶片和茎段在ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织，并在含０．２５ｍｇ／ＬＢＡ和０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上继代增殖。ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．１ｍｇ／Ｌ可诱导叶片和愈伤组织发生不定芽，诱导频率分别为１００％和８２．９％，对于茎段，ＢＡ和ＮＡＡ分别为０．１ｍｇ／Ｌ和０．０１ｍｇ／Ｌ时诱导不定芽频率可达８３％。试管苗在大量元素减半并附加０．０１５ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上诱导生根，生根率达８６．２％。

关键词：胡杨器官发生再生植株

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基于D0L系统的树木三维可视化模型研究

北京林业大学学报 2003年第3期25卷 64-67页

作者：魏琼蒋湘宁北京林业大学生物科学与技术学院

对树木的形态进行三维模拟 ,以D0L为基本算法 ,运用VC和OpenGL将抽象算法三维可视化 ,从而得到形象逼真的立体树木形态模型 ,并且利用该模型计算出树木的叶面积指数和光斑密度 .结果表明 ,运用D0L系统得到的模型具有一定的形态逼真性和... 详细信息

对树木的形态进行三维模拟 ,以D0L为基本算法 ,运用VC和OpenGL将抽象算法三维可视化 ,从而得到形象逼真的立体树木形态模型 ,并且利用该模型计算出树木的叶面积指数和光斑密度 .结果表明 ,运用D0L系统得到的模型具有一定的形态逼真性和运用价值 ,经扩充后还可用于植物理论生物学和实验观测生物学的仿真研究 .

关键词： DOL系统三维可视化模型植物形态生理生态

一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法

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北京林业大学学报 2006年第1期28卷 103-106页

作者：盖颖王文棋蒋湘宁北京林业大学生物科学与技术学院

SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较... 详细信息

SDSPAGE电泳是蛋白质分析和研究中的重要高效手段.由于分离胶、浓缩胶与电泳缓冲液以及空气都是无色透明的物质,在胶的制作和点样过程中仅仅通过浓缩胶相与缓冲液水相或空气相对光的折射来准确判断点样孔的位置并进行点样操作,因而比较困难.该文介绍1种在浓缩胶中添加颜色染料,使浓缩胶显现颜色,以此可视化区分浓缩胶中点样孔(井)位置的方法,可以准确而高效完成点样操作,使传统的SDSPAGE点样过程通过折光性来判断变为可视化准确判断,提高点样效率和电泳质量.

关键词：蛋白质分析双色可视化上样 SDS-PAGE电泳

日本落叶松LkF3H2基因克隆及调控类黄酮代谢功能研究

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生物技术通报 2024年第2期40卷 245-252页

作者：李灿蒋湘宁盖颖林木遗传育种全国重点实验室北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 树木花卉育种生物工程国家林业和草原局重点实验室北京100083

【目的】日本落叶松黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase 2,LkF3H2)基因在类黄酮生物合成过程中发挥着重要的调控功能。探究LkF3H2基因在日本落叶松中发挥的具体功能和植物类黄酮生物代谢过程。【方法】根据实验室前期转录组数据克... 详细信息

【目的】日本落叶松黄烷酮3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase 2,LkF3H2)基因在类黄酮生物合成过程中发挥着重要的调控功能。探究LkF3H2基因在日本落叶松中发挥的具体功能和植物类黄酮生物代谢过程。【方法】根据实验室前期转录组数据克隆日本落叶松LkF3H2基因并进行生物信息学分析及组织表达分析。随后将该基因转化烟草进行转基因烟草组织表达分析及类黄酮含量测定,以探究基因表达量与类黄酮含量之间的关系。【结果】LkF3H2基因cDNA序列长度为1074 bp,其蛋白编码358个氨基酸,分子式C_(1785)H_(2807)N_(481)O_(541)S_(18),分子量为40.24 kD,该蛋白是不稳定的亲水性蛋白且不含信号肽;同时系统进化分析得出日本落叶松LkF3H2与火炬松、辐射松、白云杉和欧洲云杉F3H亲缘关系较近并且该蛋白含有保守结构域2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase superfamily,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族。另外组织表达分析显示LkF3H2基因在一月龄日本落叶松幼苗叶中表达量最高,在一年生日本落叶松幼苗茎中表达量最高,并且在转基因烟草叶中也显示了最高的表达量。值得一提的是,转基因烟草叶中的类黄酮含量也是最高的,其次为茎和根,转基因烟草中类黄酮含量与LkF3H2基因表达量呈正相关关系。【结论】日本落叶松LkF3H2基因属于2-酮戊二酸依赖性双加氧家族并且在类黄酮生物合成过程中发挥着重要功能。

关键词：黄烷酮3-羟化酶基因转基因烟草组织表达类黄酮

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毛白杨融合基因4CL1-CCR对烟草木质素沉积的影响

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林业科学 2020年第10期56卷 63-69页

作者：胡嘉祺齐芪蒋湘宁盖颖北京林业大学生物科学与技术学院北京100083 中国农业大学园艺学院北京100193

【目的】将毛白杨编码4CL1(4-香豆酸辅酶A连接酶)和CCR(香豆酰辅酶A还原酶)的基因连接在一起形成融合基因4CL1-CCR,在体外对其编码的融合酶4CL1-CCR进行活性分析,发现此融合酶具有4CL1和CCR的催化活性,并在大肠杆菌体内证明4CL1-CCR可... 详细信息

【目的】将毛白杨编码4CL1(4-香豆酸辅酶A连接酶)和CCR(香豆酰辅酶A还原酶)的基因连接在一起形成融合基因4CL1-CCR,在体外对其编码的融合酶4CL1-CCR进行活性分析,发现此融合酶具有4CL1和CCR的催化活性,并在大肠杆菌体内证明4CL1-CCR可以高效催化香豆酸等酚酸生成相应的醛。在前期研究基础上,本研究将融合基因转化烟草,对转基因烟草植株的木质素各单体的组成和木质部形态进行分析,以揭示融合基因在植物体内的功能。【方法】用硫酸解法结合GC-MS分析烟草茎中各个单体的含量;间苯三酚染色法和木质素由紫外激发荧光法用于观测细胞的木质化状态;并通过半定量PCR法对转基因烟草中参与木质素合成关键基因的表达进行分析。【结果】与野生型烟草相比,转基因烟草茎中木质素G+S总量增加10.89%~36.44%;其中转基因烟草中G型木质素单体含量显著增多,S型单体含量无明显变化。显微结构观察可见,转基因烟草木质部宽度增加,细胞壁显著增厚,木质素沉积状态没有变化,表现为高密度木质素区域仍然为细胞角隅和复合胞间层,而低密度区域为次生细胞壁。半定量PCR分析显示在转基因烟草中C3H、CAD和COMT的表达量较野生型烟草均有不同程度的提高,而由G型木质素单体向S型木质素单体转化的关键基因F5H的表达没有显著变化。【结论】人工融合基因4CL1-CCR可以在植物中表达并发挥其功能,在未改变木质素密度分布的前提下,增加烟草茎细胞中木质部细胞数量和木质素的含量,并使细胞壁增厚。

关键词： 4CL1 CCR 融合基因木质素

外源激素对日本落叶松体细胞胚发生不同阶段的影响

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林业科学 2021年第1期57卷 30-39页

作者：吴晓雪张艾婧盖颖蒋湘宁北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

【目的】探究外源激素对日本落叶松体细胞胚发生不同培养阶段的影响,优化日本落叶松的体细胞胚发生条件并提高体细胞胚的质量,为研究外源激素调控落叶松体细胞胚发生的生理机制提供数据支持,为落叶松的规模化繁育和遗传改良奠定基础。... 详细信息

【目的】探究外源激素对日本落叶松体细胞胚发生不同培养阶段的影响,优化日本落叶松的体细胞胚发生条件并提高体细胞胚的质量,为研究外源激素调控落叶松体细胞胚发生的生理机制提供数据支持,为落叶松的规模化繁育和遗传改良奠定基础。【方法】首先确定生长曲线的延迟期、对数期和平台期,然后根据生长曲线,采用正交设计研究胚性胚柄团在2,4-D 0.15、0.30、0.50 mg·L^(-1)、6-BA 0、0.15、0.30 mg·L^(-1)和ABA 0、0.50、1.00 mg·L^(-1)浓度下培养7天、14天、21天的鲜质量增长情况和14天的体胚发生能力,采用析因设计研究悬浮细胞在2,4-D 0.15、0.30、0.50 mg·L^(-1)和6-BA 0、0.15、0.30 mg·L^(-1)浓度下培养7天、14天、21天的细胞鲜质量增长情况和14天的体胚发生能力,结合鲜质量增长和体胚发生能力2种结果确定胚性胚柄团增殖和悬浮细胞生长的最佳激素浓度。最后,以不含GA3、IAA的体细胞胚诱导培养基为对照,分别研究了GA3和IAA 0、10、20、30、40 mg·L^(-1)对体细胞胚发生的影响。【结果】7、14、21天分别处于日本落叶松胚性胚柄团增殖和悬浮细胞生长的延迟期、对数期和平台期。在胚性愈伤组织增殖阶段,2,4-D、6-BA、ABA对胚性胚柄团增殖和体胚发生能力的影响显著(P<0.05),最佳的激素浓度是2,4-D 0.15 mg·L^(-1)+ABA0.50 mg·L^(-1);在悬浮培养阶段,2,4-D、6-BA组合对悬浮细胞生长和体胚发生能力的影响显著(P<0.05),最佳激素浓度是2,4-D 0.15 mg·L^(-1)+6-BA 0.15 mg·L^(-1);GA3、IAA对成熟子叶胚的数量的影响均显著(P<0.05),10~20 mg·L^(-1) GA3或IAA时成熟子叶胚数量显著升高,而更高的GA3或IAA浓度将会抑制体胚发生。【结论】外源激素可有效调控日本落叶松的体细胞胚发生,适宜增殖阶段胚性胚柄团增殖和体胚发生能力保持的激素组合为2,4-D 0.15 mg·L^(-1)+ABA 0.50 mg·L^(-1),适宜悬浮培养阶段细胞生长和体胚发生能力保持的激素组合为2,4-D 0.15 mg·L^(-1)+6-BA 0.15 mg·L^(-1),添加GA3或IAA 10~20 mg·L^(-1)可以显著提高成熟子叶胚的数量。

关键词：日本落叶松胚性胚柄团体细胞胚发生细胞增殖外源激素

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^(32)P后标记法测DNA加合物

环境化学 1994年第3期13卷 272-278页

作者：刘淑芬蒋湘宁中国科学院生态环境研究中心北京100085

^(32)P后标记方法测DNA-致癌物的加合物(in vitro,in vivo,in human样品)过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将DNA及加合物酶解成2’-脱氧核苷3’-单磷酸(3’-dNmP+3’-dxmP),以它为底物,用T_4多核苷酸激酶催化,使γ^(32)P ATP的放射^(32)... 详细信息

^(32)P后标记方法测DNA-致癌物的加合物(in vitro,in vivo,in human样品)过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将DNA及加合物酶解成2’-脱氧核苷3’-单磷酸(3’-dNmP+3’-dxmP),以它为底物,用T_4多核苷酸激酶催化,使γ^(32)P ATP的放射^(32)P转移反应到底物上,形成2’-脱氧核苷3’5’-二磷酸(3’5’dNDP+3’5’dxDP),用ODS-TLC和PEI-TLC结合将标记过的二磷酸分离分辨,用自显影制成加合物的指纹图.液闪计数法计算出加合物浓度,灵敏度可达1加合物/10^(10)正常核酸.

关键词：磷32后标记法 DNA加合物测定