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Rno-miR-29b-3p/MMP2参与调控大鼠动脉钙化的研究

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Rno-miR-29b-3p/MMP2参与调控大鼠动脉钙化的研究

作者：蒋汶洪广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分miRNA-29b-3p靶向抑制MMP2的表达参与动脉钙化的调控目的:探讨miRNA-29b-3p对MMP2表达和动脉钙化的影响。材料和方法:20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、钙化模型组,每组各10只。钙化模型组采用大剂量维生素D3 60万U/kg/天在... 详细信息

第一部分miRNA-29b-3p靶向抑制MMP2的表达参与动脉钙化的调控目的:探讨miRNA-29b-3p对MMP2表达和动脉钙化的影响。材料和方法:20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、钙化模型组,每组各10只。钙化模型组采用大剂量维生素D3 60万U/kg/天在大鼠背部皮下注射诱导钙化,正常对照组在大鼠背部皮下注射等剂量生理盐水,连续3天。10天后处死全部大鼠,立即分离大鼠胸腹主动脉,部分置于4%多聚甲醛保存,用于制作动脉组织病理切片,部分保存于液氮。苏木精-伊红(HE)染色观察两组大鼠动脉组织病理切片组织结构变化,钙盐(Von Kossa)染色观察两组大鼠动脉组织病理切片钙盐沉积情况。运用miRNA-29b-3p mimics和inhibitors瞬时转染A7R5大鼠血管平滑肌细胞系过表达和沉默miRNA-29b-3p。q RT-PCR和Western Blot分别检测动脉组织和细胞中miRNA-29b-3p、MMP2 m RNA和蛋白表达水平。Pearson相关系数法分析miRNA-29b-3p与动脉组织中MMP2 m RNA和蛋白表达水平的相关性。应用生物信息学预测miRNA-29b-3p靶基因。双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-29b-3p对MMP2表达的直接影响。结果:HE染色结果显示:钙化模型组主动脉壁结构破坏、弹性纤维降解、排列紊乱,正常对照组主动脉壁结构完整。Von Kossa染色结果显示:钙化模型组主动脉中层沿着弹性纤维出现明显的黑色钙盐沉积,正常对照组未见钙盐沉积。q RT-PCR结果证实钙化动脉组织中miRNA-29b-3p表达水平明显低于正常动脉组织(P=0.0035),而MMP2 m RNA表达水平明显高于正常动脉组织(P<0.0001)。Western Blot结果证实钙化动脉组织中MMP2蛋白表达水平也明显高于正常动脉组织(P<0.0001)。Pearson相关系数法结果显示动脉组织中miRNA-29b-3p与MMP2 m RNA(P=0.0014,R2=0.481)和蛋白(P=0.0026,R2=0.443)表达负相关。miRNA-29b-3p mimics和inhibitors瞬时转染结果显示miRNA-29b-3p表达增加或减少能分别减少或增加MMP2蛋白表达水平(P<0.05)。生物信息学靶基因预测显示MMP2可能是miRNA-29b-3p的靶基因。双荧光素酶报告实验证明miRNA-29b-3P对MMP2有直接调控作用。结论:1.维生素D3诱导的大鼠动脉钙化模型中miRNA-29b-3p表达降低,MMP2表达升高;***2是miRNA-29b-3p靶基因;3、miRNA-29b-3P可能通过抑制MMP2的表达参与动脉钙化的调控。第二部分miRNA-29b-3p/MMP2抑制血管平滑肌细胞向成骨细胞样分化和钙化目的:探讨miRNA-29b-3p/MMP2对血管平滑肌细胞表型转化和钙化的影响。材料和方法:应用慢病毒包装质粒PRSV、PMDLG、PMD2和miRNA-29b-3p过表达质粒或沉默质粒或空白质粒共转染293T细胞,利用细胞产生的病毒液感染大鼠VSMCs构建miRNA-29b-3p过表达和沉默的稳转株。荧光显微镜下观察质粒共转染293T细胞和病毒感染VSMCs情况。含beta-甘油磷酸钠钙化培养基诱导VSMCs钙化,分为正常组、钙化组、miRNA-29b-3p过表达组、miRNA-29b-3p沉默组、空白对照组,培养10天。VSMCs茜素红S染色和邻甲酚酞络合酮比色法检测各组VSMC钙化情况。q RT-PCR检测miRNA-29b-3p、MMP2和Runx2、Msx2 m RNA表达水平,Western Blot检测MMP2蛋白水平。结果:成功构建miRNA-29b-3p过表达和沉默的VSMCs稳转株。miRNA-29b-3p过表达和沉默后,MMP2表达分别下降和上调(p<0.05)。与钙化诱导的空白对照组相比,miRNA-29b-3p过表达的VCMCs稳转株钙含量沉积和成骨分化标志基因Runx2、Msx2表达被抑制(P<0.05),而miRNA-29b-3p沉默后增加了VSMCs钙盐沉积和Runx2、Msx2表达(P<0.05)。结论:miRNA-29b-3p/MMP2抑制beta-甘油磷酸钠钙化环境中VSMCs生骨分化和钙化。

关键词：动脉钙化 miRNA-29b-3p 基质金属蛋白酶2 血管平滑肌细胞基因干扰

动脉钙化大鼠动脉组织TGF-β、MMPs表达变化及意义

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山东医药 2015年第14期55卷 16-18页

作者：韦肖敏覃晓卢海林蒋汶洪广西医科大学第一附属医院南宁530021

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)和基质金属蛋白酶(MMPs)在动脉钙化发生、发展中的作用。方法60只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组各30只。实验组连续3 d皮下注射维生素D3注射液50万U/(kg·d)制备动脉钙化模型,对照组同时注射等量葡... 详细信息

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)和基质金属蛋白酶(MMPs)在动脉钙化发生、发展中的作用。方法60只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组各30只。实验组连续3 d皮下注射维生素D3注射液50万U/(kg·d)制备动脉钙化模型,对照组同时注射等量葡萄糖注射液。两组同时间皮下注射同等剂量的不含维生素D3的5%葡萄糖注射液。采用Von Kossa染色法观察动脉钙化程度;实时荧光定量PCR法测定动脉组织TGF-βmRNA和MMPs mRNA表达量。结果实验组动脉钙化程度、TGF-βmRNA和MMPs mRNA表达量均明显高于对照组(P均<0.05)。结论 TGF-β和MMPs可促进动脉硬化的形成。

关键词：动脉钙化,大鼠基质金属蛋白酶转化生长因子β

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利用基因芯片筛选动脉钙化大鼠差异表达基因

广东医学 2016年第2期37卷 178-182页

作者：卢海林韦肖敏蒋汶洪胡明杨晗覃晓广西医科大学第一附属医院血管外科南宁530021

目的利用基因芯片技术筛选正常大鼠和动脉钙化大鼠腹主动脉组织中差异表达基因及检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达量,以探讨动脉钙化发病的可能机制。方法通过皮下注射大剂量维生... 详细信息

目的利用基因芯片技术筛选正常大鼠和动脉钙化大鼠腹主动脉组织中差异表达基因及检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达量,以探讨动脉钙化发病的可能机制。方法通过皮下注射大剂量维生素D_3建立大鼠动脉钙化模型,采用Von Kossa染色观察动脉钙化程度,基因芯片技术筛选两组大鼠差异表达基因及检测TGF-β、MMP-2和MMP-9的表达量。结果与对照组相比,模型组差异表达的基因有710条,其中上调基因344条,下调基因366条。模型组TGF-β1、TGF-β3和MMP-2的表达均明显上调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论动脉钙化的形成是多基因共同作用的结果,其中TGF-β、MMP-2和MMP-9对动脉钙化的发生发展起着至关重要的作用,其机制还有待进一步研究。

关键词：基因芯片动脉钙化转化生长因子β 基质金属蛋白酶

强力霉素对大鼠血管钙化模型转化生长因子β表达的影响

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中国血管外科杂志（电子版） 2015年第4期7卷 272-276页

作者：卢海林蒋汶洪覃晓广西医科大学第一附属医院血管外科南宁530021

目的观察强力霉素对大鼠血管钙化形成及转化生长因子β表达的影响,期望为血管钙化提供新的预防和治疗线索。方法 45只大鼠随机分为对照组(A组,只给予生理盐水皮下注射),模型组(B组)和药物干预组(C组),均用大剂量维生素D_360万U/(kg·d)... 详细信息

目的观察强力霉素对大鼠血管钙化形成及转化生长因子β表达的影响,期望为血管钙化提供新的预防和治疗线索。方法 45只大鼠随机分为对照组(A组,只给予生理盐水皮下注射),模型组(B组)和药物干预组(C组),均用大剂量维生素D_360万U/(kg·d)皮下注射,连续3天,建立血管钙化模型,C组造模同时给予强力霉素60 mg/(kg·d)皮下注射,连续给药14天。运用Von Kossa染色判断血管钙化程度,采用RT-qPCR检测转化生长因子β mRNA的表达,免疫组化检测转化生长因子β蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠主动脉von Kossa染色有大量棕黑色颗粒沉积,转化生长因子β表达量显著增加(P<0.05),经强力霉素干预后,血管钙化程度减轻,转化生长因子β mRNA和蛋白表达量比模型组明显降低(P<0.05)。结论强力霉素能抑制血管钙化,其机制可能与转化生长因子β表达量下调有关。

关键词：强力霉素血管钙化转化生长因子β

软坚护肝片的药理学作用及其在肝脏疾病治疗中的实验和临床应用研究概述

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内科 2020年第5期15卷 568-570页

作者：梁雪婧梁水庭蒋汶洪杨晗覃晓广西医科大学第一附属医院南宁市530021

肝脏是人体内最大的内脏器官,具有复杂的结构和生理功能。肝炎会导致肝脏慢性损伤并逐渐演变为肝纤维化、肝硬化、肝癌甚至危及患者生命,其中肝纤维化是肝硬化发生发展的必经病理过程,预防和抑制肝纤维化的进展是延缓肝硬化和肝癌患者... 详细信息

肝脏是人体内最大的内脏器官,具有复杂的结构和生理功能。肝炎会导致肝脏慢性损伤并逐渐演变为肝纤维化、肝硬化、肝癌甚至危及患者生命,其中肝纤维化是肝硬化发生发展的必经病理过程,预防和抑制肝纤维化的进展是延缓肝硬化和肝癌患者病情发展、延长患者生存时间和改善患者生活质量的有效方法。软坚护肝片是运用现代技术制成的复方中药制剂,它具有良好的抗肝纤维化作用,本文就软坚护肝片的药理学作用及其在肝病治疗中的实验研究和临床应用概况进行了综述。

关键词：软坚护肝片肝脏疾病临床应用综述

动脉钙化大鼠转化生长因子β1、基质金属蛋白酶2及组织金属蛋白酶抑制剂1表达水平的改变和强力霉素的保护作用

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中华血管外科杂志 2016年第2期1卷 -页

作者：卢海林蒋汶洪胡明蒙元彪杨晗林秋宁覃晓广西医科大学第一附属医院血管外科南宁530021

目的：观察强力霉素（DOX）对转化生长因子β1（TGF－β1）、基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和组织金属蛋白酶抑制剂－1（TIMP－1）表达水平的影响，并探讨DOX对大鼠动脉钙化的干预作用及可能机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组... 详细信息

目的：观察强力霉素（DOX）对转化生长因子β1（TGF－β1）、基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和组织金属蛋白酶抑制剂－1（TIMP－1）表达水平的影响，并探讨DOX对大鼠动脉钙化的干预作用及可能机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、DOX 60 mg／kg、120 mg／kg干预组，除对照组外均采用维生素D360万U／（kg·d）皮下注射，连续3天，诱导动脉钙化模型，干预组每天还分别给予DOX 60 mg／kg、120 mg／kg皮下注射，连续14天。使用苏木素－伊红染色（HE）观察各组大鼠动脉组织的病理变化，运用von Kossa染色判断动脉钙化程度，使用邻甲酚酞络合酮比色法测定主动脉钙含量，分别采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测动脉组织TGF－β1、MMP－2以及TIMP－1 mRNA和蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比，模型组大鼠动脉组织HE染色可见中层血管平滑肌细胞排列紊乱，弹力纤维断裂，von Kossa染色显示有大量黑色颗粒沉积在动脉中层，主动脉钙含量，TGF－β1、MMP－2以及TIMP－1 mRNA和蛋白表达量显著增加（P＜0．05），而DOX干预能改善弹力纤维层的排列紊乱，减少主动脉钙沉积和钙含量，并降低TGF－β1、MMP－2但增加TIMP－1的mRNA和蛋白表达水平，且剂量越大，效果越明显。结论 TGF－β1、MMP－2和TIMP－1在动脉钙化的发生过程中扮演着重要角色，DOX可通过降低TGF－β1、MMP－2，增加TIMP－1的表达而起减轻动脉钙化的作用。

关键词：动脉钙化强力霉素转化生长因子β 基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制剂

K_Ka频段MMIC宽带无源混频器芯片的设计

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电子技术（上海） 2024年第8期53卷 53-55页

作者：廖学介王测天刘莹羊洪轮王为邓春蒋汶兵成都嘉纳海威科技有限责任公司四川610220 电子科技大学电子科学与工程学院四川611731

阐述一款K_Ka频段MMIC宽带无源混频器芯片的设计。芯片采用无源双平衡混频器结构,本振和射频的巴伦为螺旋Marchand巴伦。关键技术指标表现出色,芯片尺寸仅为1.15mm×0.8mm×0.1mm,实现了小型化。通过精心设计与优化,该混频器芯片在宽频... 详细信息

阐述一款K_Ka频段MMIC宽带无源混频器芯片的设计。芯片采用无源双平衡混频器结构,本振和射频的巴伦为螺旋Marchand巴伦。关键技术指标表现出色,芯片尺寸仅为1.15mm×0.8mm×0.1mm,实现了小型化。通过精心设计与优化,该混频器芯片在宽频段内展现出低损耗、高隔离度和高线性度等优良性能,能有效满足现代通信和雷达系统对高性能射频器件的需求。

关键词：电路设计 MMIC 宽带无源双平衡混频器螺旋Marchand巴伦