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高分辨率磁共振淋巴管造影评价兔肢体淋巴水肿淋巴管功能

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中华实验外科杂志 2009年第3期26卷 303-305页

作者：蒋朝华路青胡学庆刘宁飞上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 200011

目的探讨磁共振（MR）淋巴管造影在评价兔肢体淋巴水肿的淋巴管形态和功能方面的诊断价值。方法新西兰大白兔一侧后肢制备淋巴水肿模型6只，另一侧作为对照。模型成功4周后，双侧后肢趾蹼皮内注射钆贝葡胺注射液各0．6ml进行MR造影检查... 详细信息

目的探讨磁共振（MR）淋巴管造影在评价兔肢体淋巴水肿的淋巴管形态和功能方面的诊断价值。方法新西兰大白兔一侧后肢制备淋巴水肿模型6只，另一侧作为对照。模型成功4周后，双侧后肢趾蹼皮内注射钆贝葡胺注射液各0．6ml进行MR造影检查，3d后行淋巴闪烁造影（LAS）检查作为对照。结果成功构建6只兔后肢淋巴水肿模型。MR淋巴造影显示阻塞区远端淋巴管典型阻塞征象，皮下毛细淋巴管呈不规则的网状结构，侧支淋巴管随造影时间延长呈明显增多趋势。患侧淋巴回流功能较差，阻塞处造影剂影像强度随时间延长而增强，消失缓慢。而健侧造影剂显像后很快消失，反应淋巴回流功能良好，两者间强化曲线呈现明显差异。结论MR淋巴管造影较LAS更能准确定位淋巴管阻塞部位，清楚反映淋巴管的形态及阻塞程度。造影剂在阻塞部位信号强度随时间逐渐增强而消失缓慢，健侧则显影后很快消失，对量化评价淋巴管功能更具有优势。

关键词：淋巴水肿磁共振成像淋巴造影功能

VEGF-C局部注射治疗阻塞性淋巴水肿的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第3期24卷 207-211页

作者：胡学庆蒋朝华刘宁飞浙江大学医学院附属二院整形外科杭州310009 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科

目的研究血管内皮生长因子C（VEGF-C）局部注射对治疗小鼠尾部阻塞性淋巴水肿的作用，探讨治疗淋巴水肿的新方法。方法应用RT-PCR、免疫荧光和Western Blot方法检测重组pcDNA3．1-VEGF-C质粒在成纤维细胞和COS细胞中表达和蛋白分泌情况... 详细信息

目的研究血管内皮生长因子C（VEGF-C）局部注射对治疗小鼠尾部阻塞性淋巴水肿的作用，探讨治疗淋巴水肿的新方法。方法应用RT-PCR、免疫荧光和Western Blot方法检测重组pcDNA3．1-VEGF-C质粒在成纤维细胞和COS细胞中表达和蛋白分泌情况；通过手术方法建立小鼠尾部慢性阻塞性淋巴水肿模型；pCDNA3．1-VEGF-C质粒尾部注射，测量鼠尾直径、鼠尾淋巴管显影、组织学检测及LYVE-1免疫组织化学淋巴管计数，结果进行t检验的统计学分析。结果重组pcDNA3．1-VEGF-C质粒所携带的目的基因人VEGF-C能够在细胞中表达，而且还能够分泌到细胞外；成功建立了小鼠尾部慢性阻塞性淋巴水肿模型；VEGF-C局部注射后，鼠尾直径变小、淋巴管的数目增多，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VEGF-C转基因通过促进淋巴管的再生可以缓解淋巴水肿。

关键词：血管内皮生长因子C 淋巴管水肿

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人真皮淋巴管内皮细胞的分离及冷冻保存

上海交通大学学报（医学版） 2007年第9期27卷 1092-1095页

作者：蒋朝华胡学庆刘宁飞上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海200011 浙江大学医学院附属第二医院整形外科杭州310006

目的建立分离培养人真皮淋巴管内皮细胞(LECs)及其冷冻保存技术。方法采用中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠方法,分选CD34-/CD31+细胞。所获内皮细胞进行体外培养,经免疫荧光染色、RT-PCR鉴定证实为LECs。采用梯度降温法冻存内皮细胞... 详细信息

目的建立分离培养人真皮淋巴管内皮细胞(LECs)及其冷冻保存技术。方法采用中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠方法,分选CD34-/CD31+细胞。所获内皮细胞进行体外培养,经免疫荧光染色、RT-PCR鉴定证实为LECs。采用梯度降温法冻存内皮细胞,经复苏后进行形态学观察,以台酚蓝试验、MTT试验、流式细胞术细胞检测等方法鉴定细胞生物学特性。结果中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠分选,可从真皮组织获取高纯度的LECs。与新鲜细胞相比,复苏的内皮细胞活力保持在92%以上。复苏后的内皮细胞形态学、生物学特性及生长曲线与新鲜细胞差异无统计学意义。冻存内皮细胞的凋亡率较新鲜内皮细胞高,为(9.15±0.34)%vs(5.31±0.23)%,但无统计学差异(P>0.05)。结论中性蛋白酶及胶原酶消化结合免疫磁珠分选,可获取足够数量及纯度的LECs;冻存的内皮细胞复苏后无明显形态学改变,并保持较高的活力及体外增殖能力;可作为种子细胞来源,为淋巴管系统发育和新生研究提供方便。

关键词：淋巴管内皮细胞细胞培养细胞冻存细胞凋亡流式细胞术

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人真皮微淋巴管内皮细胞的分离培养和鉴定

中华实验外科杂志 2007年第3期24卷 336-338页

作者：胡学庆蒋朝华刘宁飞上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 200011

目的建立人真皮来源淋巴管内皮细胞（LECs）分离和培养的方法。方法采用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠从真皮组织分选CD34^-／CD31^＋细胞。免疫细胞化学、免疫荧光及逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测LECs特异标志的... 详细信息

目的建立人真皮来源淋巴管内皮细胞（LECs）分离和培养的方法。方法采用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠从真皮组织分选CD34^-／CD31^＋细胞。免疫细胞化学、免疫荧光及逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测LECs特异标志的表达，噻唑蓝（MTT）比色试验测定多种与内皮细胞增殖相关的细胞因子和低氧条件对其增殖的影响。结果CD34^-／CD31^＋细胞在单层细胞培养时形成内皮细胞典型的铺路石样外观，而在胶原凝胶三维培养时形成管状结构。CD34^-／CD31^＋细胞表达淋巴管内皮细胞特异性标志，包括LYVE-1，VEGFR-3和Prox-1。RT-PCR显示Prox1和VEGFR-3mRNA在CD34^-／CD31^＋细胞中特异性表达。特异作用于淋巴管内皮细胞的VEGF-C对LECs的促增殖作用明显（P〈0．01）。低氧条件和Ang2在体外未显示对LECs有促进增殖的作用。结论应用中性蛋白酶及胶原酶消化方法结合免疫磁珠分选可以成功分离获取人真皮LECs。

关键词：淋巴管内皮细胞细胞培养