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重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1体外转染大鼠BMSCs研究

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中国修复重建外科杂志 2013年第5期27卷 529-534页

作者：杜超蒋明德曾维政郑淑梅魏晓龙第三军医大学研究生管理大队重庆400038 成都军区总医院消化内科

目的利用重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1(human matrix metalloproteinase 1,hMMP-1)体外转染大鼠BMSCs,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定实验基础。方法取2～3周龄SD大鼠骨髓采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,传至第3代并进... 详细信息

目的利用重组腺病毒Ad-人基质金属蛋白酶1(human matrix metalloproteinase 1,hMMP-1)体外转染大鼠BMSCs,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定实验基础。方法取2～3周龄SD大鼠骨髓采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,传至第3代并进行鉴定;用携带增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的重组腺病毒Ad-hMMP-1-EGFP体外转染第3代BMSCs,荧光显微镜下观察转染情况,流式细胞仪检测转染效率并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。实验分为未转染BMSCs组(A组)、Ad-EGFP转染BMSCs组(B组)及Ad-hMMP-1-EGFP转染BMSCs组(C组),采用MTT法检测转染后细胞增殖情况,RT-PCR及Western blot分别检测转染后各组细胞内hMMP-1基因和蛋白表达情况,ELISA法检测上清中蛋白hMMP-1分泌水平,hMMP-1酶活性荧光定量试剂盒测定其活性。结果重组腺病毒转染BMSCs后24 h可见绿色荧光表达,72 h时荧光强度最高,最佳MOI为200。MTT检测示3组细胞均于培养3 d进入对数生长期,6 d后进入平台期;各时间点3组间细胞吸光度(A)值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、Western blot及ELISA检测示,A、B组均无hMMP-1基因和蛋白表达,C组hMMP-1基因和蛋白均高效表达。荧光定量试剂盒测定A、B组均未检测到hMMP-1酶活性,C组hMMP-1酶活性为1.24 nmol/(mg.min)。结论利用重组腺病毒Ad-hMMP-1成功将外源基因导入大鼠BMSCs并高效表达,为BMSCs联合hMMP-1基因移植治疗肝纤维化奠定了实验基础。

关键词： BMSCs 重组腺病毒基质金属蛋白酶1 基因治疗大鼠

sp600125对乙醛刺激的HSC—T6细胞株的影响

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中华肝脏病杂志 2009年第10期17卷 792-793页

作者：唐文蒋明德李小安成都军区总医院感染科 610083 成都军区总医院消化内科 610083

肝星状细胞（HSC）的增殖与凋亡在肝纤维化的形成中起作十分重要的作用。乙醛刺激的HSC增殖是导致酒精性肝纤维化发生的关键因素。丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）包括细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38，是HSC激活、增殖并导致... 详细信息

肝星状细胞（HSC）的增殖与凋亡在肝纤维化的形成中起作十分重要的作用。乙醛刺激的HSC增殖是导致酒精性肝纤维化发生的关键因素。丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）包括细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38，是HSC激活、增殖并导致肝纤维化发牛的主要信号传导通路之一，其中，JNK信号传导通路参与了细胞增殖、分化以及凋亡的调控。我们既往对肝纤维化发病机制的研究结果证实，乙醛刺激的HSC中，p-JNK水平随JNK信号传导通路特异阻断剂sp600125浓度增加而减少。

关键词：肝星状细胞胶原细胞凋亡细胞增殖 sp600125

^131I标记单克隆抗体在荷人胃癌裸鼠及胃癌患者体内的定位及免...

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中华消化杂志 1990年第5期10卷 262-265页

作者：邓敬兰蒋明德第四军医大学西京医院

本文报告131I标记的4种鼠单克隆抗体(McAb)在13只荷胃癌裸鼠及60例胃癌患者的定位分布及放射免疫显象结果。胃癌移植片能优先浓集4种McAb,其肿瘤与非肿溜的浓集比值为2.9－4.9,显著高于对照抗体(1.3)。MG7-McAb或其F(ab')2对29例和8例... 详细信息

本文报告131I标记的4种鼠单克隆抗体(McAb)在13只荷胃癌裸鼠及60例胃癌患者的定位分布及放射免疫显象结果。胃癌移植片能优先浓集4种McAb,其肿瘤与非肿溜的浓集比值为2.9－4.9,显著高于对照抗体(1.3)。MG7-McAb或其F(ab')2对29例和8例胃癌的阳性显象率分别为75.9%和87.5%。结果提示McAb具有作为放射免疫治疗载体的潜力。

关键词：胃肿瘤单克隆抗体放射免疫显象

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肝纤维化相关因素的研究现状及进展

新医学 2008年第12期39卷 829-831页

作者：叶平蒋明德成都军区总医院消化内科 610083

肝纤维化是多种慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段,其中肝星状细胞在肝纤维化的发生和发展中起主导作用。该文综述了肝纤维化的病因、发病机制等,重点介绍通过抑制炎症反应,对抗氧化应激,调节相关细胞因子的活性,干扰细胞因子信号转导可... 详细信息

肝纤维化是多种慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段,其中肝星状细胞在肝纤维化的发生和发展中起主导作用。该文综述了肝纤维化的病因、发病机制等,重点介绍通过抑制炎症反应,对抗氧化应激,调节相关细胞因子的活性,干扰细胞因子信号转导可以抑制肝星状细胞活化、增殖,诱导凋亡,具有较好的抗纤维化效果。

关键词：肝纤维化发病机制肝硬化细胞外基质肝星状细胞

肝静脉压力梯度在门静脉高压相关疾病中应用的研究进展

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中华肝脏病杂志 2014年第7期22卷 555-557页

作者：汤善宏秦建平蒋明德曾维政成都军区总医院消化内科 610083

失代偿期肝硬化患者常并发门静脉高压,当门静脉压力达到一定程度时,可导致许多并发症,如上消化道静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等,因此测定门静脉压力对于指导肝硬化患者治疗具有重要意义.由于门静脉系统解剖特点,直接测定门静脉... 详细信息

失代偿期肝硬化患者常并发门静脉高压,当门静脉压力达到一定程度时,可导致许多并发症,如上消化道静脉曲张及破裂出血、腹水、肝性脑病等,因此测定门静脉压力对于指导肝硬化患者治疗具有重要意义.由于门静脉系统解剖特点,直接测定门静脉压力困难较大,而测定肝静脉压力梯度（hepatic venous pressure gradient,HVPG）相对容易,后者间接反映门静脉压力最佳指标,临床上通过测定HVPG来反映门静脉压力.目前测定HVPG途径有两种,即用球囊导管通过颈静脉或股静脉通路到右肝静脉,其数值为扩张球囊后测定的压力即肝静脉楔压减去肝静脉入下腔静脉口的压力即肝静脉自由压力的差值.本文将对HVPG在门静脉高压相关疾病中应用研究进展做一综述.

关键词：肝静脉疾病肝静脉压力梯度门静脉高压

P38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

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吉林大学学报（医学版） 2011年第4期37卷 587-590页

作者：卓强蒋明德梅浙川重庆医科大学附属第二医院消化内科重庆400016 成都军区总医院消化内科四川成都610083

目的:探讨P38MAPK信号传导通路在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)凋亡过程中的作用及P38蛋白表达的变化,为肝纤维化的临床治疗提供依据。方法:实验设阴性对照组(HSC-T6加含10%小牛血清的DMEM培养液)、乙醛组(对照组基础上加乙醛)和... 详细信息

目的:探讨P38MAPK信号传导通路在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)凋亡过程中的作用及P38蛋白表达的变化,为肝纤维化的临床治疗提供依据。方法:实验设阴性对照组(HSC-T6加含10%小牛血清的DMEM培养液)、乙醛组(对照组基础上加乙醛)和实验组(乙醛组基础上加P38MAPK抑制剂SB203580,使其终浓度为4、8、16μmol.L-1),流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;Western blotting法检测磷酸化P38MAPK表达水平,SABC法检测caspase-3蛋白表达。结果:与对照组比较,乙醛组HSC-T6的凋亡率和caspase-3蛋白阳性表达率均降低(P<0.05或P<0.01),P38MAPK磷酸化水平表达增高(P<0.01)。抑制剂SB203580作用后,细胞凋亡率逐渐增高(P<0.01);P38MAPK磷酸化水平降低(P<0.01);caspase-3蛋白水平升高(P<0.01);且随剂量的增加,磷酸化水平不断降低,蛋白表达水平不断升高。结论:P38MAPK抑制剂SB203580能促使乙醛刺激的HSC-T6凋亡,且凋亡的发生可能与SB203580抑制P38MAPK的磷酸化途径和caspase-3的活化有关。

关键词： SB203580 caspase一3 细胞凋亡 P38MAPK 信号传导

动脉-静脉系统异常分流致门静脉高压的诊断与治疗

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中华肝脏病杂志 2015年第8期23卷 638-640页

作者：汤善宏曾维政秦建平蒋明德成都军区总医院消化内科成都610083

肝前性门静脉高压是由于先天或后天因素引起动脉-门静脉系统瘘、门静脉系统畸形、血栓形成或外源性压迫等导致的门静脉或局部门静脉压增高，而肝静脉嵌塞压和肝静脉游离压正常的一种罕见疾病，其诊断困难，一旦得到准确诊断，一般情况... 详细信息

肝前性门静脉高压是由于先天或后天因素引起动脉-门静脉系统瘘、门静脉系统畸形、血栓形成或外源性压迫等导致的门静脉或局部门静脉压增高，而肝静脉嵌塞压和肝静脉游离压正常的一种罕见疾病，其诊断困难，一旦得到准确诊断，一般情况下血管介入或手术方法治疗效果较好。本文将对动脉-门静脉系统瘘导致的肝前性门静脉高压原因、诊断及治疗进行综述。

关键词：高血压,门静脉诊断介^疗法动静脉瘘

HGF及G-CSF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

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基础医学与临床 2013年第8期33卷 1043-1049页

作者：高勇梅浙川蒋明德重庆医科大学附属第二医院消化内科重庆400016 成都军区总医院消化内科四川成都610083

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)以及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可否诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)分化为肝样细胞。方法以贴壁法分离、培养大鼠BM-MSCs,流式细胞术鉴定表面标志。实验分为:对照组(10%FBS),0.1μmol/L G-CSF干预组,20 ... 详细信息

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)以及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可否诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)分化为肝样细胞。方法以贴壁法分离、培养大鼠BM-MSCs,流式细胞术鉴定表面标志。实验分为:对照组(10%FBS),0.1μmol/L G-CSF干预组,20 ng/mL HGF干预组,HGF联合G-CSF共同干预组(0.1μmol/LG-CSF+20 ng/mL HGF),诱导后第7天、14天和21天提取细胞总RNA以及总蛋白后进行RT-PCR和Western blot检测白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录和蛋白水平。结果 20 ng/mL HGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组P3代BM-MSCs诱导后细胞形态似肝样细胞。BM-MSCs表面标志物:CD34-PE 0.3%,CD45-FITC0.1%,CD90-FITC 99.6%,CD105-PE 99.8%。20 ng/mL HGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组检测到白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录水平及蛋白水平表达。在第7、14、21天,随时间增加ALB表达量递增、而AFP表达量递减,且同一时间两组表达量均有差异(P<0.05)。结论 HGF能诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞,G-CSF对HGF诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞有协同作用。

关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞生长因子粒细胞集落刺激因子肝样细胞

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去甲肾上腺素治疗肝肾综合征126例

广东医学 2010年第21期31卷 2856-2858页

作者：唐文蒋明德徐辉秦建平中国人民解放军成都军区总医院消化内科成都610083

目的探讨肝肾综合征(HRS)的发病原因及临床指标变化,观察去甲肾上腺素治疗Ⅰ型、Ⅱ型HRS患者的疗效,以提高对该病的整体诊疗水平。方法回顾性分析收治HRS住院患者共126例(其中Ⅰ型24例,Ⅱ型102例),分为对照组和观察组,分析HRS患者的病... 详细信息

目的探讨肝肾综合征(HRS)的发病原因及临床指标变化,观察去甲肾上腺素治疗Ⅰ型、Ⅱ型HRS患者的疗效,以提高对该病的整体诊疗水平。方法回顾性分析收治HRS住院患者共126例(其中Ⅰ型24例,Ⅱ型102例),分为对照组和观察组,分析HRS患者的病因、肝肾功能、MELD评分、尿量变化以及住院病死率等。结果 HRS发生于晚期肝硬化124例,其他2例,出现腹水104例、自发性腹膜炎86例、肝性脑病43例、消化道出血38例。去甲肾上腺素治疗Ⅰ型HRS后,患者尿量增加,肌酐水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),但与对照组住院病死率(84.6%vs90.9%)比较,差异无统计学意义。Ⅱ型HRS治疗后,患者尿量增加、肌酐水平降低,差异有统计学意义,与对照组住院病死率(16.1%vs35.0%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论去甲肾上腺素有利于HRS患者肾功能恢复,对HRS患者预后有一定的积极作用。

关键词：肝肾综合征 MELD评分去甲肾上腺素