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链霉菌I06A-02832产生的VEGFR2-CD拮抗剂发现研究

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中国抗生素杂志 2014年第6期39卷 408-412,421页

作者：蒋忠科张洋郭连宏姜蓉孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

目的分离鉴定链霉菌I06A-02832发酵液中具血管内皮细胞生长因子受体-2酪氨酸激酶(VEGFR2-CD)抑制活性的次生代谢产物。方法采用大孔吸附树脂、Se phadex LH-20、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化;通过质谱(MS)、核磁共振波谱(N... 详细信息

目的分离鉴定链霉菌I06A-02832发酵液中具血管内皮细胞生长因子受体-2酪氨酸激酶(VEGFR2-CD)抑制活性的次生代谢产物。方法采用大孔吸附树脂、Se phadex LH-20、HPLC等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化;通过质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)对其结构进行鉴定,以ELISA法检测其次生代谢产物对VEGFR2-CD的拮抗活性。结果分离得到两个环二肽类次生代谢产物:2832B和2832C;化合物2832B的化学结构与环(脯氨酸-酪氨酸)一致,化合物2832C的化学结构与环(苯丙氨酸-甘氨酸)一致,均对VEGFR2-CD表现出一定的抑制活性。结论化合物2832B和2832C是具有VEGFR2-CD活性的环二肽类次生代谢产物,本研究首次报道它们具有VEGFR2-CD抑制活性。

关键词： VEGFR2-CD 链霉菌环二肽拮抗剂

河北九莲城淖尔可培养放线菌多样性及抗菌活性筛选

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微生物学通报 2016年第7期43卷 1473-1484页

作者：李小俊吴越张伟铭李静刘少伟蒋忠科黄大林孙承航河北北方学院医学检验学院河北张家口075000 北京协和医学院&中国医学科学院医药生物技术研究所北京100050 桂林医学院基础医学院广西桂林541004

【目的】勘探干涸的九莲城淖尔土壤放线菌多样性并进行活性筛选,以期发现药用微生物资源,为新抗生素的发现奠定基础。【方法】采用15种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S rRNA基因序列同源性分析放线菌多样性;发酵... 详细信息

【目的】勘探干涸的九莲城淖尔土壤放线菌多样性并进行活性筛选,以期发现药用微生物资源,为新抗生素的发现奠定基础。【方法】采用15种分离培养基,以稀释涂布法分离放线菌;根据分离菌株的16S rRNA基因序列同源性分析放线菌多样性;发酵液经乙酸乙酯萃取,菌丝体经丙酮浸提,获得提取浓缩物样品;样品通过纸片扩散法进行抗菌活性初筛;抗菌阳性菌株采用PCR技术进行Ⅰ型聚酮合酶(PKS I)KS域、Ⅱ型聚酮合酶(PKS II)KS域和非核糖体多肽合成酶(NRPS)A结构域抗生素生物合成基因的检测。【结果】从11份盐湖土壤样品中分离纯化到251株放线菌,其分布于放线菌纲的10个目15个科31个属,其中优势菌属为链霉菌属和拟诺卡氏菌属;251株放线菌中包括57株耐(嗜)盐放线菌,其优势菌属为拟诺卡氏菌属(22株)和涅斯捷连科氏菌属(15株)。基于16S r RNA基因序列的系统发育分析显示,菌株J11Y309为糖霉菌科潜在新属,菌株J12GA03为分枝杆菌科潜在新种。96株放线菌活性检测结果显示,56株至少对1株检定菌具有抗菌活性,阳性率为58.3%;56株有活性的放线菌中,47株至少含有1种抗生素生物合成基因,其中17株同时具有3种抗生素生物合成基因。【结论】干涸的九莲城淖尔土壤中含有较为丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力。

关键词：盐湖放线菌多样性抗菌活性耐药菌

海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性及其抗菌活性

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微生物学通报 2016年第8期43卷 1753-1765页

作者：李静戴素娟庹利蒋忠科刘少伟姜明国姜蓉孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 广西民族大学广西高校微生物与植物资源利用重点实验室广西南宁530006

【目的】勘探海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性,为发现放线菌新物种和新抗生素奠定基础。【方法】样品经表面消毒后粉碎,用10种不同培养基分离放线菌;通过PCR扩增、测定并比对16S r RNA基因序列,开展放线菌多样性分析;通过发酵、... 详细信息

【目的】勘探海南东寨港真红树植物内生放线菌多样性,为发现放线菌新物种和新抗生素奠定基础。【方法】样品经表面消毒后粉碎,用10种不同培养基分离放线菌;通过PCR扩增、测定并比对16S r RNA基因序列,开展放线菌多样性分析;通过发酵、萃取等处理方法得到四类样品,包括发酵原液、乙酸乙酯提取液及水层和菌体的丙酮浸泡提取液;采用纸片扩散法对样品进行抗菌活性筛选;基于PCR的基因筛选技术探测活性菌株可能存在的NRPS、PKS I、PKS II抗生素生物合成基因。【结果】经形态特征排重,从14种真红树植物样品中共得到放线菌146株,16S r RNA基因序列比对表明它们分布于13个科18个属,其中链霉菌属为优势菌属,菌株S3Cf-2和S3Af-1的16S r RNA基因序列分别与有效发表菌株Couchioplanes caeruleus DSM44103T(X93202)和Microlunatus terrae BS6T(JF806519)的相似率最高,分别为97.45%和97.43%,可能为新物种。对其中46株放线菌发酵样品的抗菌活性检测表明,40株具有抗菌活性,总阳性率为86.96%;活性菌株中,38株菌存在至少一种所探测的生物合成基因簇,阳性率为95%,其中14株同时具有所探测的3种抗生素生物合成基因簇。【结论】海南东寨港真红树植物中存在多样性丰富的药用放线菌资源,具有从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。

关键词：红树林内生放线菌耐药菌生物合成基因簇

链霉菌2754发酵产物的分离提取及结构鉴定

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中国抗生素杂志 2011年第6期36卷 412-415页

作者：刘祺蒋忠科郭连宏张洋吴剑波姜蓉中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术所北京100050

目的从链霉菌2754中提取分离和纯化小分子VEGF受体抑制剂,并进行结构鉴定。方法以酪氨酸酶活性测定方法(ELISA法)为活性跟踪方法,利用大孔吸附树脂反相HPLC等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果分离纯化到两个七尾霉素... 详细信息

目的从链霉菌2754中提取分离和纯化小分子VEGF受体抑制剂,并进行结构鉴定。方法以酪氨酸酶活性测定方法(ELISA法)为活性跟踪方法,利用大孔吸附树脂反相HPLC等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果分离纯化到两个七尾霉素类化合物nanaomycinαA和nanaomycinαA并具有相关活性。结论 NanaomycinαA和nanaomycinαA为已知化合物,首次报道该化合物具VEGFR拮抗活性。

关键词： VEGFR C2754 分离纯化结构鉴定

放线菌R2A14A-1的活性代谢产物分离及菌株鉴定

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中国抗生素杂志 2014年第10期39卷 721-728页

作者：王飞飞庹利刘佳萌刘少伟董艳萍蒋忠科夏曼李小俊陈川戴素娟许敏姜蓉孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 河北北方学院医学检验学院张家口075000 桂林医学院桂林541004

目的抗金黄色葡萄球菌化合物FFF-13的分离鉴定及其塔克拉玛干沙漠南麓来源产生菌R2A14A-1的初步鉴别。方法以琼脂平板扩散法和化合物紫外特征追踪R2A14A-1发酵液中抗金黄色葡萄球菌的amicoumacin类化合物,通过大孔吸附树脂和高效液相等... 详细信息

目的抗金黄色葡萄球菌化合物FFF-13的分离鉴定及其塔克拉玛干沙漠南麓来源产生菌R2A14A-1的初步鉴别。方法以琼脂平板扩散法和化合物紫外特征追踪R2A14A-1发酵液中抗金黄色葡萄球菌的amicoumacin类化合物,通过大孔吸附树脂和高效液相等色谱法建立空白培养基与菌株发酵液比对指纹图谱,通过比对分离获得活性次级代谢产物FFF-13,根据高分辨质谱、核磁共振氢谱和碳谱数据并结合文献确定化合物FFF-13的结构;综合菌株R2A14A-1的形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对菌株R2A14A-1进行初步鉴定。结果化合物FFF-13为amicoumacin B,菌株R2A14A-1为拟诺卡菌属放线菌。结论菌株R2A14A-1为首个发现产生amicoumacin类抗生素的拟诺卡菌株。

关键词：拟诺卡菌 Amicoumacin B 16S rRNA 鉴别

芽孢杆菌XZ7产生的amicoumacin类抗生素

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中国抗生素杂志 2014年第11期39卷 801-807页

作者：夏曼刘少伟周忠会庹利凌冰郭琳董艳萍王飞飞蒋忠科李小俊张玉彬孙承航中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 西藏职业技术学院拉萨850030 桂林医学院桂林541004 河北北方学院医学检验学院张家口075000

目的发现芽孢杆菌菌株XZ7次级代谢产物中amicoumacin类化合物。方法 16S r RNA鉴定菌株XZ7;菌株XZ7液体发酵,溶剂萃取,UPLC-DAD-MS分析amicoumacin类化合物;中压液相和高压液相色谱对化合物389-1和389-2进行分离纯化;根据核磁共振波谱... 详细信息

目的发现芽孢杆菌菌株XZ7次级代谢产物中amicoumacin类化合物。方法 16S r RNA鉴定菌株XZ7;菌株XZ7液体发酵,溶剂萃取,UPLC-DAD-MS分析amicoumacin类化合物;中压液相和高压液相色谱对化合物389-1和389-2进行分离纯化;根据核磁共振波谱和高分辨质谱数据对化合物389-1和389-2进行化合物结构鉴定。结果芽孢杆菌XZ7产生的amicoumacin类化合物389-1和389-2为已知化合物AI-77-F和AI-77-H。结论菌株XZ7为潜在新amicoumacin类抗生素的产生菌。

关键词： Amicoumacin类抗生素 MRSA 芽孢杆菌 AI-77-F AI-77-H

西藏芽孢杆菌XZ7中Amicoumacin类抗生素的分离鉴定与生物活性研究

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天然产物研究与开发 2016年第1期28卷 5-10,64页

作者：刘少伟夏曼高强蒋忠科胡辛欣何琪杨游雪甫张玉彬孙承航中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

采用UPLC-DAD-MS分析发现西藏当雄土壤来源芽孢杆菌XZ7发酵液中的Amicoumacin类化合物,并利用反相柱层析和高效液相色谱对发现的3个Amicoumacin类化合物进行分离纯化;根据紫外光谱、高分辨质谱和核磁共振波谱数据及文献比对,鉴定3个化... 详细信息

采用UPLC-DAD-MS分析发现西藏当雄土壤来源芽孢杆菌XZ7发酵液中的Amicoumacin类化合物,并利用反相柱层析和高效液相色谱对发现的3个Amicoumacin类化合物进行分离纯化;根据紫外光谱、高分辨质谱和核磁共振波谱数据及文献比对,鉴定3个化合物分别为：Bacilosarcin A（1）、Bacilosarcin B（2）和Bacilosarcin C（3）。抑菌实验结果表明化合物2对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制活性（MIC=4-16μg/m L）;细胞毒性测试结果表明化合物1和2对HepG2肿瘤细胞具有较高的抑制作用,其中化合物2抑制作用最强,IC_（50）值为2.8μM。同时,化合物2对MCF-7和He La肿瘤细胞也有较强的细胞毒作用,IC（50）值分别为6.2μM和4.0μM。

关键词： Amicoumacin 芽孢杆菌 Bacilosarcin 葡萄球菌细胞毒活性

常压室温等离子体-紫外复合诱变选育新硫肽类抗生素166A高产菌株

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中国抗生素杂志 2022年第5期47卷 514-520页

作者：李艳青戴剑漉蒋忠科罗辉孙承航广东医科大学南方海洋科学与工程广东省实验室湛江524023 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学研究室北京100050 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050

目的通过对新硫肽类抗生素166A产生菌小单孢菌TMD166进行诱变选育研究,以期获得产166A的高产菌株。方法使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system,MPMS)对出发菌株TMD166的孢子进行等离子体-紫外(MPMS-UV... 详细信息

目的通过对新硫肽类抗生素166A产生菌小单孢菌TMD166进行诱变选育研究,以期获得产166A的高产菌株。方法使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system,MPMS)对出发菌株TMD166的孢子进行等离子体-紫外(MPMS-UV)复合诱变,单孢子悬液经照射处理、涂布培养后获得单菌落,并以牛津杯固体发酵高通量筛选方法对菌株进行初筛,之后对高产菌株进行摇瓶复筛,利用突变株摇瓶发酵的化学效价筛选出正突变菌株。结果对比MPMS-UV不同诱变剂量发现,MPMS105s-UV60s复合诱变剂量获得的正突变率最高,达到41.43%,相应致死率为99.88%。最终筛选出一株166A高产突变株TMD166-MU1,在培养温度为28℃、210 r/min的条件下,经过96~120 h培养后,166A产量相比出发菌株提高了7.47倍。结论采用MPMS-UV复合诱变方式,再结合牛津杯固体发酵高通量筛选方法和摇瓶复筛,可高效筛选获得166A高产菌株。

关键词：新硫肽类抗生素166A 多功能等离子体诱变系统复合诱变选育高产菌株

塔克拉玛干沙生植物来源放线菌抗铜绿假单胞菌活性的筛选及菌株38-7L-1活性产物的研究

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中国抗生素杂志 2015年第2期40卷 81-87,115页

作者：陈川刘佳萌蒋忠科李小俊刘少伟庹利戴素娟杨桂柳王飞飞黄大林姜明国孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 河北北方学院医学检验学院张家口075000 广西民族大学海洋与生物技术学院广西高校微生物与植物资源利用重点实验室南宁530008 桂林医学院桂林541004

目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-... 详细信息

目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-7L-1进行初步分类鉴定;基于菌株38-7L-1 PKS I基因的KS域序列分析结果 ,结合活性峰的液-质联用数据,比对微生物天然产物数据库,预测活性化合物201的结构;通过色谱方法纯化化合物201;结合光谱数据分析及文献比对,确定和验证化合物201的结构。结果从81株沙生植物内生放线菌中获得7株活性菌株,包括链霉菌属菌株4株、考克菌属菌株1株、多形孢菌属菌株1株和拟诺卡菌属菌株1株。其中菌株38-7L-1活性最强并具有I型聚酮合酶基因,16S r RNA基因序列分析表明该菌株与Nocardiopsis alba DSM 43377T(X97883)的相似率为100%。菌株3 8-7L-1抗铜绿假单胞菌活性次级代谢产物,化合物201为十六元大环内酯类化合物,蔷薇霉素。结论首次从拟诺卡菌中分离到常见于小单孢菌的蔷薇霉素,多策略组合对次级代谢产物结构预测具有指导意义。

关键词：塔克拉玛干沙漠植物内生放线菌铜绿假单胞菌拟诺卡菌属蔷薇霉素