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克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统的研制与效果评价

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微生物学通报 2024年第8期51卷 3165-3178页

作者：曹璐璐万强金乐萱吴毓薇赵昕宇高宝曲晓莹蒋富凤叶青华吴清平广东环凯生物科技有限公司广东肇庆526238 广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室国家卫健委微生物食品营养与安全科技创新平台广东广州510070 合肥工业大学食品与生物工程学院安徽合肥230009

【背景】克罗诺杆菌属(Cronobacter)细菌的分离鉴定是临床医学中精准治疗的理论基础,然而,目前的生化鉴定方法仅可将其鉴定至属水平。【目的】开发一种简便、可靠的克罗诺杆菌属生化分种鉴定方法,建立克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统并对... 详细信息

【背景】克罗诺杆菌属(Cronobacter)细菌的分离鉴定是临床医学中精准治疗的理论基础,然而,目前的生化鉴定方法仅可将其鉴定至属水平。【目的】开发一种简便、可靠的克罗诺杆菌属生化分种鉴定方法,建立克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统并对其鉴定性能进行评价。【方法】将鉴定系统所需的生化反应配方浓缩整合到一组注塑件中制得鉴定条,辅以数值鉴定理论构建克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统,利用克罗诺杆菌属标准株及分离株对其鉴定准确度进行验证。分离株的鉴定以fusA基因序列分析方法的鉴定结果作为参考标准,与数值鉴定法的检测结果进行比较。【结果】创建了用于鉴别克罗诺杆菌属内9个种/亚种的生化反应阳性概率数据库,同时确定了数值法中的计算方法和结果评价标准,并完成了数值鉴定系统软件的开发。5株克罗诺杆菌属标准株通过细菌数值鉴定系统均得到了正确鉴定,结果评价为极好的鉴定结果;其中,DSM 18707被准确鉴定为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(*** ***)。测试集的84株克罗诺杆菌属分离株的数值鉴定法与fusA基因测序法的总鉴定一致率为100%;除*** IV型(1株)及*** III型(1株)的数值鉴定为不可接受的鉴定结果外,其余菌株均得到了明确的鉴定。【结论】本研究开发的克罗诺杆菌属细菌数值鉴定系统操作简便、价格低廉、准确率高,可为临床诊断及相关食品安全检测提供实验依据,具有良好的应用推广前景。

关键词：克罗诺杆菌属生化鉴定数值鉴定系统微生物安全

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vp0610对副溶血性弧菌生物被膜形成调控机制的初步研究

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vp0610对副溶血性弧菌生物被膜形成调控机制的初步研究

作者：蒋富凤陕西科技大学

学位级别：硕士

副溶血性弧菌是一种广泛存在于温暖沿海水域的革兰氏阴性细菌,该菌可以通过不同途径感染人类,主要与食用被污染的海鲜食品有关。在海鲜等水产品的养殖过程中,通常伴随着各种抗生素和杀菌剂的使用,但是副溶血性弧菌仍然能够被检出,生物... 详细信息

副溶血性弧菌是一种广泛存在于温暖沿海水域的革兰氏阴性细菌,该菌可以通过不同途径感染人类,主要与食用被污染的海鲜食品有关。在海鲜等水产品的养殖过程中,通常伴随着各种抗生素和杀菌剂的使用,但是副溶血性弧菌仍然能够被检出,生物被膜被认为在水产品感染中发挥着重要作用。生物被膜能附着在生物及非生物介质表面,从而引起交叉感染。同时副溶血性弧菌形成生物被膜后具有较强抗逆性,使其具有一定程度的抗消杀能力,进而继续污染食品和食品加工设备。研究副溶血性弧菌生物被膜形成过程,为后续研究基于通路阻断的防控方法提供理论支撑,而目前关于副溶血性弧菌生物被膜形成的研究较少。因此,本研究对课题组前期通过蛋白质组学筛选出的生物被膜相关基因vp0610进行基因敲除以验证该基因功能,并结合pull down蛋白互作技术以及转录组学分析进一步挖掘vp0610在副溶血性弧菌生物被膜形成中的功能。主要研究结果如下:（1）生物信息学分析结果显示VP0610被注释为一个假定蛋白,由204个氨基酸组成,分子量为22.3 kDa,属于YfgM家族蛋白,目前在弧菌中均未发现该家族蛋白的任何报道。利用同源重组技术对vp0610进行基因敲除以及基因回补,并经测序验证成功获得vp0610的敲除株和回补株。结晶紫染色法定量分析表明:24 h前敲除株的生物被膜形成速度大于野生株,但24 h后敲除株的生物被膜形成量不再增加,而野生株的生物被膜形成快速增加,到72 h时,三者的形成量几乎一致,说明vp0610对早期生物被膜形成具有一定的抑制作用。激光共聚焦显微镜和扫描电子显微镜对24 h的生物被膜形成做了进一步观察,证明敲除株的生物被膜形成量高于野生株。（2）通过测定影响生物被膜形成相关因素所对应表型以探究vp0610的作用途径发现:敲除株的游动能力明显大于野生株,说明vp0610对极鞭毛介导的游动能力具有抑制作用,当把vp0610敲除后,这种抑制作用被解除,极鞭毛的运动增加了菌株接触表面的可能性,使得生物被膜形成增加,但爬动能力没有明显差异;敲除株的可溶性多糖含量低于野生株,不可溶性多糖含量显著高于野生株。可溶性多糖通常充当能量物质,表明敲除株的生物被膜中菌体量大说明对能量的消耗也大,不可溶性多糖作为生物被膜的结构物质,其含量与生物被膜测定结果保持一致;c-di-GMP测定结果显示:vp0610对12 h的c-di-GMP产生没有显著影响,但是24 h后敲除株的c-di-GMP产生量显著降低,这解释了 24 h后敲除株的生物被膜形成缓慢增加甚至不再增加的原因。（3）找到VP0610在生物被膜形成中的功能后,本试验继续从蛋白层面研究VP0610的互作蛋白。Pull-down结果显示:VP0610能与180个蛋白发生相互作用,这180个蛋白的GO富集分析发现它们主要参与RNA降解、代谢途径、核黄素代谢、次级代谢产物的生物合成、抗生素的生物合成,其中与生物被膜形成相关的互作蛋白主要涉及群体感应和PTS系统的组分。因此,初步认为VP0610主要通过这两条途径影响生物被膜形成。（4）通过RNA-Seq分析vp0610缺失后对基因转录调控的影响范围,发现12 h时敲除株与野生株相比有598个基因上调,639个基因下调,24h时有197个基因上调,115个基因下调。对这些差异基因进行GO功能富集分析发现:12 h时,显著富集到20个GO Term,主要涉及氧化还原过程、细胞氨基酸的生物合成过程、有机酸的生物合成过程、碳水化合物代谢及运输电子转移以及PTS系统等,PTS是生物被膜调控网络中的重要结构,该系统能够影响弧菌多糖、胞外多糖、c-di-GMP产生和降解以及Ⅳ型菌毛蛋白的表达;24 h时,虽然没有显著富集的GO Term,但是也能够富集到鞭毛依赖性细胞运动。鞭毛在生物被膜初期介导黏附定植,成熟期充当生物被膜支架。KEGG通路分析发现:12 h时显著富集的通路有11条,主要包含群体感应、果糖和甘露糖代谢、脂肪酸降解、碳源代谢和次级代谢产物的生物合成等,而碳源代谢使得胞外的可溶性多糖和不可溶性多糖增加;24 h时显著富集的通路有5条,主要包括缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸的降解、丙酸酯代谢、淀粉和蔗糖代谢、脂肪酸代谢和精氨酸生物合成。综上所述,VP0610能够通过作用于磷酸转移酶系统、群体感应系统等通路去影响副溶血性弧菌运动能力、胞外多糖和c-di-GMP产生等,进而负调控早期生物被膜形成。

关键词：副溶血性弧菌生物被膜形成 vp0610 pull-down 转录组测序分析

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基于全局注意力的正交融合图像描述符

图学学报 2024年第3期45卷 472-481页

作者：艾列富陶勇蒋常玉安庆师范大学计算机与信息学院安徽安庆246133 安徽三联学院智慧交通现代产业学院安徽合肥230601

图像描述符是计算机视觉任务重要研究对象,被广泛应用于图像分类、分割、识别与检索等领域。深度图像描述符在局部特征提取分支缺少高维特征的空间与通道信息的关联性,导致局部特征表达的信息不充分。为此,提出一种融合局部、全局特征... 详细信息

图像描述符是计算机视觉任务重要研究对象,被广泛应用于图像分类、分割、识别与检索等领域。深度图像描述符在局部特征提取分支缺少高维特征的空间与通道信息的关联性,导致局部特征表达的信息不充分。为此,提出一种融合局部、全局特征的图像描述符,在局部特征提取分支进行膨胀卷积提取多尺度特征图,输出的特征拼接后经过含有多层感知器的全局注意力机制捕捉具有关联性的通道-空间信息,再加工后输出最终的局部特征;高维的全局分支经过全局池化和全卷积生成全局特征向量;提取局部特征在全局特征向量上的正交值与全局特征串联后聚合形成最终的描述符。同时,在特征约束方面,使用包含子类心的角域度损失函数增大模型在大规模数据集的鲁棒性。在国际公开数据集Roxford5k和Rparis6k上进行实验,所提出描述符的平均检索精度在medium和hard模式分别为81.87%和59.74%以及91.61%和79.12%,比深度正交融合描述符分别提升了1.70%,1.56%,2.00%和1.83%,较其他图像描述符具有更好的检索精度。

关键词：图像描述符膨胀卷积全局注意力特征融合子类心角度域损失

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副溶血性弧菌生物被膜形成及其调控机制研究进展

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微生物学报 2020年第11期60卷 2381-2390页

作者：蒋富凤雷涛吴清平张菊梅庞锐陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安710021 广东省微生物研究所广东省科学院华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室广东广州510070

副溶血性弧菌是一种广泛存在于海产品中并可引起人类急性肠胃炎的食源性致病菌。该菌形成的生物被膜能够增强体外环境中的存活率,促进对宿主的定殖和感染,还会导致被污染的加工设备与食物之间发生交叉感染。深入了解生物被膜形成背后的... 详细信息

副溶血性弧菌是一种广泛存在于海产品中并可引起人类急性肠胃炎的食源性致病菌。该菌形成的生物被膜能够增强体外环境中的存活率,促进对宿主的定殖和感染,还会导致被污染的加工设备与食物之间发生交叉感染。深入了解生物被膜形成背后的调控机制,有助于制定有针对性的策略,干扰其适应环境变化的过程,从而降低副溶血性弧菌对人类的危害。本文主要综述了鞭毛、菌毛和胞外的多糖等基质组分在生物被膜形成中的作用以及c-di-GMP和群体感应对生物被膜形成的调控。

关键词：副溶血性弧菌生物被膜调控机制

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GF增强PA6渔网再生料性能研究

现代塑料加工应用 2024年第3期36卷 12-15页

作者：刘双仕蒋廷凤蒋廷佳广西鑫深科技有限公司广西柳州545007 广西鸿泰防护设备检测有限公司广西柳州545026

对废旧尼龙6(PA6)渔网进行分级回收,采用玻璃纤维(GF)、马来酸酐接枝乙烯-辛烯共聚物(POE-g-MAH)和硅烷偶联剂(KH550)对其进行改性。结果表明:加入GF可以提升再生料的缺口冲击强度、弯曲模量等力学性能,但会降低其熔体流动速率(MFR);当G... 详细信息

对废旧尼龙6(PA6)渔网进行分级回收,采用玻璃纤维(GF)、马来酸酐接枝乙烯-辛烯共聚物(POE-g-MAH)和硅烷偶联剂(KH550)对其进行改性。结果表明:加入GF可以提升再生料的缺口冲击强度、弯曲模量等力学性能,但会降低其熔体流动速率(MFR);当GF质量分数为30.00%时,随着POE-g-MAH用量的增加,3种再生料的缺口冲击强度均逐渐升高,弯曲模量均先升高后降低,均在POE-g-MAH质量分数为5.00%时达到最大值;当GF,POE-g-MAH,KH550的质量分数分别为30.00%,5.00%,0.25%时,一级品和二级品的再生料的焊接强度均超过54.0 MPa,满足制品焊接要求。

关键词：尼龙6 渔网玻璃纤维增韧相容剂偶联剂增强

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数字金融如何影响绿色发展福利:机制与检验

郑州大学学报（哲学社会科学版） 2024年第2期57卷 87-94页

作者：陆凤芝叶柔光陶志富安徽大学大数据与统计学院安徽合肥230039

基于2011~2020年中国281个城市的面板数据,采用双向固定效应模型、调节效应模型与面板门槛回归模型,实证研究数字金融对绿色发展福利的影响效应及作用机制。研究发现,数字金融能显著促进绿色发展福利提升。异质性分析表明,数字金融对绿... 详细信息

基于2011~2020年中国281个城市的面板数据,采用双向固定效应模型、调节效应模型与面板门槛回归模型,实证研究数字金融对绿色发展福利的影响效应及作用机制。研究发现,数字金融能显著促进绿色发展福利提升。异质性分析表明,数字金融对绿色发展福利的影响存在区域、城市行政级别和时间的异质性。同时,技术创新和人力资本在数字金融提升绿色发展福利的过程中具有显著正向调节作用。数字金融对绿色发展福利的提升作用具有双门槛效应,随门槛变量技术创新和人力资本的提高逐渐增加。本研究为推进数字金融发展和提升绿色发展福利提供了可靠的经验证据和决策依据。

关键词：数字金融绿色发展福利作用机制异质性分析

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家校共育下的小学语文项目式学习开展策略

当代家庭教育 2024年第3期 101-103页

作者：蒋富景甘肃省兰州市榆中县定远镇蒋家营小学

随着教学理念的更新,当下的教学需要培养学生的自主学习意识,提高学生自主学习的能力。基于这样的教学要求,教师需调整教学方法,优化教学模式,引导学生进行自主学习。项目式学习法就是基于这样的教学需要而提出的,在西方的教学实践中取... 详细信息

随着教学理念的更新,当下的教学需要培养学生的自主学习意识,提高学生自主学习的能力。基于这样的教学要求,教师需调整教学方法,优化教学模式,引导学生进行自主学习。项目式学习法就是基于这样的教学需要而提出的,在西方的教学实践中取得了不错的教学效果,但在我国的教学体系中出现较晚,各学科、各阶段的教师还处在摸索阶段。本文主要分析家校共育下如何在小学语文的教学中落实好项目式学习法。

关键词：家校共育小学语文项目式学习综合能力

糖尿病患者空腹血糖与血尿酸对糖尿病视网膜病变的交互作用分析

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眼科新进展 2024年第2期44卷 143-148页

作者：谢连凤刘琳琳蒋贻平谭述香赣南医学院第一附属医院眼科江西省赣州市341000

目的探讨空腹血糖(FBG)与血尿酸(SUA)的交互作用对糖尿病(DM)患者视网膜病变(DR)的影响。方法选取2019年1月至2021年1月于赣南医学院第一附属医院确诊的并接受全面眼科检查的DM患者306例。依据有无DR将所有患者分为DR组(178例)和NDR组(... 详细信息

目的探讨空腹血糖(FBG)与血尿酸(SUA)的交互作用对糖尿病(DM)患者视网膜病变(DR)的影响。方法选取2019年1月至2021年1月于赣南医学院第一附属医院确诊的并接受全面眼科检查的DM患者306例。依据有无DR将所有患者分为DR组(178例)和NDR组(128例)。比较两组患者的一般临床资料,采用最小绝对收缩和选择栓子(LASSO)回归法和多因素Logistic回归分析筛选DM患者发生DR的独立影响因素,并计算危险因素比值比,使用E值法对结果进行敏感性分析。通过相加交互模型分析FBG、SUA对DM患者发生DR的交互作用。构建DM患者发生DR的Nomogram模型并进行内部验证。采用受试者工作特征曲线(ROC)对FBG、SUA及其交互作用对DM患者发生DR的影响进行评估。结果与NDR组患者相比,DR组患者的DM病程较长,有口服药物治疗史比例较低,有胰岛素治疗史患者比例较高,总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血尿素氮、血肌酐、SUA和FBG水平均明显较高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。胰岛素治疗史、DM病程≥9.66年、甘油三酯≥2.07 mmol•L^(-1)、SUA≥297.73μmol•L^(-1)、FBG≥8.92 mmol•L^(-1)是影响DM患者发生DR的危险因素,口服药物治疗史是影响DM患者发生DR的保护因素。利用以上独立危险因素构建的Nomogram模型在预测DM患者发生DR准确性良好。SUA和FBG对DM患者发生DR具有交互作用。SUA和FBG交互作用对DR的诊断价值大于二者单独对DR的诊断价值。结论SUA≥297.73μmol•L^(-1)及FBG≥8.92 mmol•L^(-1)是影响DM患者发生DR的危险因素。FBG、SUA二者协同交互作用对DM伴DR的诊断价值大于二者单独存在对DR的诊断价值。

关键词：空腹血糖血尿酸交互作用糖尿病视网膜病变

安胃汤含药血清调控NLRP3-Caspase-1-IL-1β信号轴促进MC细胞焦亡机制研究

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中华中医药学刊 2024年

作者：韦维陈丽谭程匀蒋婳影卜磊甘秀凤刘熙荣广西中医药大学广西中医药大学第一附属医院

目的：探究安胃汤含药血清对MC（MNNG诱导GES-1恶性转化）细胞NLRP3-Caspase-1-IL-1β信号通路相关因子及细胞焦亡的影响，揭示安胃汤抗慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis， CAG）作用机制。方法：将MC细胞分为空白组、安胃... 详细信息

目的：探究安胃汤含药血清对MC（MNNG诱导GES-1恶性转化）细胞NLRP3-Caspase-1-IL-1β信号通路相关因子及细胞焦亡的影响，揭示安胃汤抗慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis， CAG）作用机制。方法：将MC细胞分为空白组、安胃汤组、安胃汤+Z-YVVD-FMK（阻断剂）组、Z-YVVD-FMK（阻断剂）组4组；CCK8分别检测12h、24h、48h时间点细胞增殖情况，确定最佳检测时间点及含药血清比例；检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性；AO-EB染色法检测细胞膜的完整性及胞核形态；ELISA检测血清白介素-18（Interleukin-18 ， IL-18）、白介素-1β（Interleukin-β，IL-1β）水平；Real-time PCR检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)炎性小体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins 3 inflammasome， NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（cysteine-requiring aspartate protease-1，Caspase-1）、消皮素D（Gasdermin D， GSDMD）、IL-18、IL-1β基因的表达；Western-blot检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果：选用48h时间点、10%含药血清比例加入后续实验；与其余3组比较，安胃汤组LDH活性增高（P＜0.01）；给药组AO-EB染色均可见胞膜肿胀变形以及细胞核形态改变；ELISA结果提示：与空白组比较，安胃汤组IL-18、IL-1β均见升高（P＜0.01），Z-YVVD-FMK组IL-18、IL-1β均见下降（P＜0.01），差异具有统计学意义；Real-time PCR检测提示：与空白组比较，安胃汤组NLRP3mRNA、Caspase-1mRNA、GSDMDmRNA、IL-18mRNA、IL-1βmRNA表达水平均见升高（P＜0.01，P＜0.05），Z-YVVD-FMK组GSDMDmRNA、IL-18mRNA、IL-1βmRNA表达水平均见降低（P＜0.01），差异具有统计学意义；Western-blot结果提示：与空白组比较，安胃汤组NLRP3/Actin、GSDMD/Actin表达下降（P＜0.01），Z-YVVD-FMK组比较，Caspase-1/Actin表达量减少（P＜0.01）。结论：安胃汤抗CAG可能与其通过调控NLRP3-Caspase-1-IL-1β信号传导通路诱导胃黏膜细胞焦亡逆转CAG病理状态有关。

关键词：安胃汤 MC细胞 NLRP3-Caspase-1-IL-1β 细胞焦亡