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黑龙江畜牧兽医 2024年

作者：陈振鹏刘瑞莉张文琦董雅娟柏学进青岛农业大学动物科技学院黑牛种业技术创新中心

为了探究胎盘印记和营养转运基因与新生牛初生重的相关性,以鉴定新生牛生长发育候选标记基因,试验选取初生重为26.5～31.5 kg和32.0～36.0 kg的新生健康布莱凯特黑牛各3头,分别记为低初生重组(LW组)和高初生重组(HW组),采集两组的胎盘... 详细信息

为了探究胎盘印记和营养转运基因与新生牛初生重的相关性,以鉴定新生牛生长发育候选标记基因,试验选取初生重为26.5～31.5 kg和32.0～36.0 kg的新生健康布莱凯特黑牛各3头,分别记为低初生重组(LW组)和高初生重组(HW组),采集两组的胎盘组织并提取RNA,利用实时荧光定量PCR分析两组胎盘中印记基因[水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)、小核核糖核蛋白多肽N(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide N,SNRPN)、致命-3恶性脑肿瘤样蛋白1(lethal-3 malignant brain tumor-like protein 1,L3MBTL1)、pleckstring同源性样结构域家族A成员2(pleckstring homology-like domain family A member 2,PHLDA2)、胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor 2,IGF2)、生长因子受体结合蛋白10(growth factor receptor bound protein 10,GRB10)]和营养转运基因[溶质载体家族38成员10(solute carrier family 38 member 10,SLC38A10)、葡萄糖转运蛋白家族2成员1(solute carrier family 2 member 1,SLC2A1)、葡萄糖转运家族2蛋白2(solute carrier family 2 member 2,SLC2A2)、脂肪酸转运蛋白家族27成员1(solute carrier family 27 member 1,SLC27A1,也称FATP1)、质子依赖性胃肠肽转运蛋白1(proton-dependent gastrointestinal peptide transporter 1,PEPT1,也称SLC15A1)、脂肪酸转运蛋白家族27成员4(solute carrier family 27 member 4,SLC27A4,也称FATP4)、钠依赖型葡萄糖转运载体1(Na+/glucose cotransporter 1,SGLT1,也称SLC5A1)、白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)]的m RNA表达水平差异,并分析上述基因表达量与初生重间的相关性,最后对上述基因进行生物信息学分析。结果表明:LW组平均初生重[(30.00±0.87)kg]和HW组[(34.17±1.17)kg]差异显著(P<0.05);胎盘印记基因AQP1、SNRPN、L3MBTL1、PHLDA2、IGF2、GRB10在HW组和LW组胎盘中均有表达,其中HW组AQP1、SNRPN、L3MBTL1、PHLDA2基因m RNA相对表达量显著高于LW组(P<0.05),IGF2、GRB10基因显著低于LW组(P<0.05)。胎盘营养转运基因SLC38A10、PEPT1、SGLT1、SLC2A1、SLC2A2、CD36、FATP1、FATP4在HW组和LW组胎盘中均有表达,其中HW组SLC2A2、FATP1基因m RNA相对表达量显著高于LW组(P<0.05);HW组SLC38A10、PEPT1、CD36、FATP4基因m RNA相对表达量则显著低于LW组(P<0.05);SLC2A2基因m RNA相对表达量在HW组和LW组胎盘中均最高,然后依次为CD36、FATP1基因,SLC2A1基因最低。AQP1、SNRPN、L3MBTL1、SLC2A2和FATP1基因表达量与初生重呈正相关,相关系数分别为0.671,0.858,0.779,0.704,0.492,其中印记基因SNRPN的相关系数最高,表明其与新生牛初生重相关性最高;GRB10、SLC38A10、FATP4、PEPT1、CD36基因表达量与初生重呈现较强负相关,相关系数分别为-0.857,-0.896,-0.961,-0.989,-0.819。AQP1蛋白位于蛋白互作网络中心,与SNRPN、SLC2A2、SLC2A1、IGF2等蛋白的相互作用较强。14个印记和营养转运基因分别注释到碳水化合物跨膜转运、葡萄糖跨膜转运、长链脂肪酸导入细胞等生物学过程条目,顶端质膜、基质膜等细胞组分条目,碳水化合物跨膜转运蛋白活性、葡萄糖跨膜转运蛋白活性等分子功能条目;注释到碳水化合物的消化和吸收、脂肪细胞因子信号通路等通路。说明AQP1、SNRPN、SLC2A2、CD36等胎盘印记和营养转运基因可能通过调控胎盘发育及葡萄糖转运影响新生牛发育。

关键词：布莱凯特黑牛胎盘印记基因营养转运基因新生牛初生重

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基于转录组测序技术挖掘影响布莱凯特黑牛睾丸大小的功能基因

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华北农学报 2024年第1期39卷 191-200页

作者：梅艳芳刘瑞莉韩明轩张文琦陈振鹏王秀源苗秀萍肖超柱张任政董雅娟柏学进青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 黑牛种业技术创新中心山东青岛266109 山东兆福科技股份有限公司山东淄博256306

旨在通过对布莱凯特黑牛大小睾丸转录组数据进行分析,挖掘影响睾丸生殖功能的关键候选基因,探究睾丸大小对牛生殖功能维持的分子机制。采集12月龄布莱凯特黑牛睾丸,根据质量、长径和短径将其分为2组(大小睾丸组各3头)进行高通量转录组测... 详细信息

旨在通过对布莱凯特黑牛大小睾丸转录组数据进行分析,挖掘影响睾丸生殖功能的关键候选基因,探究睾丸大小对牛生殖功能维持的分子机制。采集12月龄布莱凯特黑牛睾丸,根据质量、长径和短径将其分为2组(大小睾丸组各3头)进行高通量转录组测序;以|log2(Fold Change)|≥1且P-value≤0.01为阈值筛选差异基因,对差异基因进行GO和KEGG功能富集分析,筛选出影响睾丸生殖功能的关键基因;对其进行CDS区克隆测序,并运用qRT-PCR、Western Blot、免疫组化等方法进行进一步研究。结果显示,差异表达基因共353个,其中114个基因在小睾丸中表达上调,239个基因表达下调。GO功能注释表明,差异基因参与代谢、发育、生殖等过程;KEGG富集分析显示,差异基因主要富集在Wnt信号传导、PI3K-Akt信号通路等与睾丸生殖功能相关的途径。最终筛选出睾丸生殖功能基因CCN4进行进一步研究。qRT-PCR和Western Blot结果显示,CCN4基因和蛋白在大睾丸中表达量显著低于小睾丸。免疫组化结果显示,CCN4蛋白主要在精细胞外的区域(特别是支持细胞)中表达,且大睾丸中的相对表达量显著低于小睾丸,推测其高表达会抑制支持细胞发育,从而影响睾丸生殖功能。综上,研究结果可为深入开展牛睾丸大小对生殖功能影响的分子机制研究提供基础资料。

关键词：牛大小睾丸转录组差异基因 CCN4

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布莱凯特黑牛大、小睾丸转录组分析及繁殖相关基因筛选

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1821-1835页

作者：王秀源刘瑞莉韩明轩张文琦陈振鹏梅艳芳苗秀萍肖超柱张任政董雅娟柏学进青岛农业大学动物科技学院黑牛种业技术创新中心山东兆福牧业科技有限公司

哺乳动物睾丸大小与精液品质及精子数量显著相关，根据成年时期的睾丸大小能够推测雄性繁殖力。为挖掘睾丸大小影响公牛繁殖力的关键候选基因，本研究采集12月龄布莱凯特黑牛(Bos taurus)外周血和睾丸，依据睾丸重量、长径和短径分为大... 详细信息

哺乳动物睾丸大小与精液品质及精子数量显著相关，根据成年时期的睾丸大小能够推测雄性繁殖力。为挖掘睾丸大小影响公牛繁殖力的关键候选基因，本研究采集12月龄布莱凯特黑牛(Bos taurus)外周血和睾丸，依据睾丸重量、长径和短径分为大睾丸和小睾丸2组，进行激素测定、睾丸组织学观察和转录组测序，以|log2Fold Change|≥1和P-value≤0.01为阈值筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)，并对其进行基因本体论(Gene Ontology, GO)和KEGG富集分析；使用克隆、q PCR、Western blot和免疫组化方法对候选基因进行检测与定位。结果显示，大睾丸中间质细胞更多，生精小管发育更好；生殖激素睾酮和雌二醇浓度在大睾丸组中显著高于小睾丸组(P<0.05)。转录组结果显示，大、小睾丸中共有1 006个DEGs，在小睾丸中297个基因表达上调，709个基因表达下调。功能分析显示，DEGs富集于cAMP和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路，并在繁殖和发育过程中起作用；共筛选到双特异性蛋白磷酸酶4 (dual specificity phosphatase 4, DUSP4)、70 kD热休克蛋白1样蛋白(heat shock 70 kD protein 1-like, HSPA1L)和丝裂原激活蛋白激酶4 (mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4, MAP4K4)等9个繁殖相关候选基因。对MAP4K4基因及其蛋白进一步研究发现其在大睾丸中的表达量显著低于在小睾丸中(P<0.05)。免疫组化(immunohistochemistry, IHC)结果发现，MAP4K4蛋白在精子细胞和精母细胞的细胞质中高表达。抑制MAP4K4表达可能促进精母细胞增殖并有利于精子细胞存活。本研究可为深入了解牛睾丸大小与生殖功能的关系提供参考。

关键词：牛睾丸大小生殖转录组丝裂原激活蛋白激酶4 (MAP4K4)

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bta-miR-145通过负调控MYO5A参与布莱凯特黑牛骨骼肌发育的机制研究

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中国畜牧杂志 2023年第2期59卷 139-146页

作者：韩明轩刘瑞莉于堃柏学进董雅娟青岛农业大学动物科技学院(草业学院) 山东青岛266109 山东省黑牛繁育工程技术研究中心山东青岛266109 山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司山东淄博256306

骨骼肌的发育是畜禽生长过程中的重要阶段,miRNA作为肌肉生成和骨骼肌再生的基本调节因子具有重要作用,本研究旨在探究bta-miR-145参与调控布莱凯特黑牛背最长肌发育的分子机制。采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛背最长肌进行sRNA建库,通过G... 详细信息

骨骼肌的发育是畜禽生长过程中的重要阶段,miRNA作为肌肉生成和骨骼肌再生的基本调节因子具有重要作用,本研究旨在探究bta-miR-145参与调控布莱凯特黑牛背最长肌发育的分子机制。采集布莱凯特黑牛和鲁西黄牛背最长肌进行sRNA建库,通过GO功能注释和KEGG富集分析筛选与骨骼肌功能相关的bta-miR-145,生信分析进行保守性分析及预测其靶基因;以布莱凯特黑牛骨骼肌细胞为细胞模型,转染btamiR-145 mimic和inhibitor,48 h后2%马血清诱导并观察分化过程,CCK-8试验和EdU染色法检测细胞增殖率;qRT-PCR检测靶基因MYO5A以及增殖分化标志基因(PCNA、CDK2、Myf5、Myh1)的表达量。结果表明,转染bta-miR-145 mimic可降低布莱凯特黑牛骨骼肌细胞分化(Myf5、Myh1)和增殖(PCNA、CDK2)标记基因的表达(P<0.01),抑制MYO5A的表达(P<0.01),转染bta-miR-145 inhibitor则促进骨骼肌细胞分化和增殖标记基因的表达(P<0.05),促进MYO5A的表达(P<0.01)。综上,bta-miR-145通过负调控靶基因MYO5A抑制牛骨骼肌细胞的增殖和分化而参与骨骼肌的发育过程。

关键词： bta-miR-145 布莱凯特黑牛骨骼肌细胞 MYO5A 增殖分化

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布莱凯特黑牛MYPN基因克隆测序及表达分析

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中国畜牧杂志 2022年第7期58卷 184-189页

作者：韩明轩刘瑞莉于堃柏学进董雅娟青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 山东省黑牛繁育工程技术研究中心山东青岛266109 山东布莱凯特黑牛科技股份有限公司山东淄博256306

实验旨在研究布莱凯特黑牛MYPN基因CDS区序列和表达情况,探讨MYPN基因理化性质及表达规律,为探究其与肌肉生长发育关系奠定基础。克隆结果表明:MYPN基因CDS区全长2 841 bp;进化树结果显示:布莱凯特黑牛MYPN基因与牛(100%)、绵羊(97.57%... 详细信息

实验旨在研究布莱凯特黑牛MYPN基因CDS区序列和表达情况,探讨MYPN基因理化性质及表达规律,为探究其与肌肉生长发育关系奠定基础。克隆结果表明:MYPN基因CDS区全长2 841 bp;进化树结果显示:布莱凯特黑牛MYPN基因与牛(100%)、绵羊(97.57%)、山羊(97.50%)同源性高;生物信息学分析表明:MYPN编码946个氨基酸,为亲水性不稳定碱性蛋白;qRT-PCR结果显示:MYPN在背最长肌中表达量最高;免疫组化显示:MYPN主要在肌浆内的肌原纤维中表达;Western Blot结果显示:MYPN蛋白在肌肉中表达量最高。综上,MYPN参与肉牛肌肉生长发育的调节,可作为肉质性状辅助标记基因。

关键词：布莱凯特黑牛 MYPN 生物信息学分析 qRT-PCR 免疫组化免疫印迹

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内部审计工作助力钢铁企业发展的实践

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山东冶金 2022年第2期44卷 81-82页

作者：董雅娟山东钢铁集团审计中心山东济南250101

以山钢集团为例,在新旧动能转换背景下,探讨内部审计如何发挥审计的监管效能,如何实现审计监管体系的日常化,制度化和规范化,建立健全风险识别、监控、分析和预警机制,及时为企业防范风险、锁定风险、化解风险,同时努力提高企业的盈利... 详细信息

以山钢集团为例,在新旧动能转换背景下,探讨内部审计如何发挥审计的监管效能,如何实现审计监管体系的日常化,制度化和规范化,建立健全风险识别、监控、分析和预警机制,及时为企业防范风险、锁定风险、化解风险,同时努力提高企业的盈利能力和经济效益,更好地助力企业高质量发展。

关键词：新旧动能转换钢铁企业内部审计

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碱地黑牛FADS1基因克隆测序及表达分析

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中国畜牧杂志 2023年第5期59卷 92-98页

作者：陈振鹏刘瑞莉王胜韩明轩于堃张文琦柏学进董雅娟青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 黑牛种业技术创新中心山东青岛266109 山东胜伟牧业有限公司山东潍坊261108

实验旨在研究碱地黑牛脂肪酸脱氢酶1基因(FADS1)CDS区序列和表达情况,并探讨FADS1基因理化性质及表达规律。本研究通过克隆测序构建FADS1的系统进化树并进行生物信息学分析,用免疫组化技术对FADS1蛋白进行定位分析,免疫印迹检测FADS1蛋... 详细信息

实验旨在研究碱地黑牛脂肪酸脱氢酶1基因(FADS1)CDS区序列和表达情况,并探讨FADS1基因理化性质及表达规律。本研究通过克隆测序构建FADS1的系统进化树并进行生物信息学分析,用免疫组化技术对FADS1蛋白进行定位分析,免疫印迹检测FADS1蛋白在实验组织的表达情况。生物信息学结果显示碱地黑牛FADS1 CDS区长1083 bp,编码360个氨基酸。FADS1不存在信号肽。FADS1进化树显示碱地黑牛FADS1与牛的遗传距离较近(99.9%),与鸡的遗传距离较远(80.0%)。结构预测表明FADS1中α螺旋占48.61%,β折叠占3.61%,延长链占13.06%,无规则卷曲占34.72%,4个α螺旋构成四螺旋束并在螺旋肽段之间形成一个疏水性的空腔,整体呈中空的桶状。互作网络解析显示:FADS1与ACSL1、ACSL3、ELOVL2、ELOVL5、PTPLA、PTPLB、ACOX1、ACOX2、ACADM、FASN、TECR等蛋白互作,参与FADS1-ELOVL5-HSD17B12-ACADM-ACOX1、FADS1-FASN-ACADVL-ACOX2等脂肪酸合成、代谢、脂滴生成相关过程的调控网络。亚细胞定位预测表明:FADS1在内质网、线粒体及分泌系统小泡中表达。免疫组化显示FADS1于胞内细胞器表达明显,局限性的分布在胞膜一侧。荧光定量及免疫印迹显示肝中丰度最高(P<0.01),心脏次之,脂肪最低。综上推测,FADS1基因参与促进碱地黑牛肝脏脂肪酸合成过程,对调控脂质代谢、沉积发挥着重要作用。

关键词： FADS1基因生物信息学碱地黑牛免疫组化免疫印迹

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碱地黑牛ELOVL2和ELOVL5基因的克隆测序及表达分析研究

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中国畜牧杂志 2023年第3期59卷 148-154页

作者：张文琦刘瑞莉王胜于堃韩明轩陈振鹏柏学进董雅娟青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 黑牛种业技术创新中心山东青岛266109 山东胜伟牧业有限公司山东潍坊261108

超长链脂肪酸延长酶(Elongation of Very Long Chain Fatty Acids,ELOVLs)是合成脂肪酸过程中的关键酶,与脂类的合成以及脂肪酸的代谢密切相关。本实验旨在研究碱地黑牛ELOVL2、ELOVL5基因CDS区序列及其在机体各组织中的表达情况,探讨EL... 详细信息

超长链脂肪酸延长酶(Elongation of Very Long Chain Fatty Acids,ELOVLs)是合成脂肪酸过程中的关键酶,与脂类的合成以及脂肪酸的代谢密切相关。本实验旨在研究碱地黑牛ELOVL2、ELOVL5基因CDS区序列及其在机体各组织中的表达情况,探讨ELOVL2、ELOVL5基因理化性质及表达规律。通过克隆获得的碱地黑牛ELOVL2和ELOVL5基因CDS区分别为885、900 bp,编码294、299个氨基酸,均为疏水性蛋白;进化树显示碱地黑牛ELOVL2、ELOVL5基因与牛、山羊、绵羊同源性最高。α-螺旋和无规则卷曲是主要的二级结构,对二者三级结构及氨基酸序列进行对比,发现ELOVL2氨基酸序列中第234位的半胱氨酸等同于ELOVL5中第231位的色氨酸,ELOVL2 C234和ELOVL5等效位置的W231对底物结合的特异性有影响,若将ELOVL5 W231替换到ELOVL2中的等效位置,ELOVL2将DPA转化为24:5n-3的能力丧失。亚细胞定位结果显示ELOVL2、ELOVL5蛋白主要定位在内质网上,荧光定量PCR实验结果显示二者均在肝脏中表达量最高。综上,ELOVL2、ELOVL5基因在促进脂肪酸合成过程中发挥着重要的作用。

关键词：碱地黑牛 ELOVL2 ELOVL5 生物信息学分析 qRT-PCR

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言语行为技巧在商务谈判中的应用

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中国商贸 2011年第12X期 230-231页

作者：董雅娟吉林农业大学外国语学院

本文通过对商务谈判及商务谈判中语言的特点进行总结,并为谈判者提供一些可以借鉴的语言行为上的技巧,以期望能帮助谈判者在谈判过程中对所碰到的一些问题进行正确合理的陈述、提问、答复以及说服对方,对谈判的成功起到一定的帮助作用。

关键词：言语行为技巧商务谈判

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大功率全方位反射镜发光二极管性能研究

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物理学报 2011年第7期60卷 749-755页

作者：董雅娟张俊兵陈海涛曾祥华扬州大学物理科学与技术学院扬州225002

在现有工艺条件下通过简单工艺实现大功率GaN基多量子阱全方位反射镜(ODR)发光二极管(LED)的研制,并对试制LED样品进行了光学、电学和色参数三个方面性能测试.测试结果发现,ODR芯片比普通芯片的光强提高了244mcd,极大提高了发光强度;ODR... 详细信息

在现有工艺条件下通过简单工艺实现大功率GaN基多量子阱全方位反射镜(ODR)发光二极管(LED)的研制,并对试制LED样品进行了光学、电学和色参数三个方面性能测试.测试结果发现,ODR芯片比普通芯片的光强提高了244mcd,极大提高了发光强度;ODRLED光通量、光效、色纯度比普通LED分别提高了6.04%,5.74%,78.64%.ODRLED具有绝对优势是其色温要比普通LED的色温低1804K,明显改善大功率LED的色温缺陷.

关键词：发光二极管 ODR 色温

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