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内毒素耐受对急性肝功能衰竭大鼠肝脏CXCR7表达的影响

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中华急诊医学杂志 2013年第4期22卷 390-394页

作者：洪巧王柯尹施春玮董进中林镯卢明芹陈永平温州医学院附属第一医院感染内科浙江省温州325000

目的通过研究内毒素耐受（endotoxin tolerance，ETT）对急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）大鼠肝组织中趋化因子受体7（chemokine receptor7，CXCR7）表达变化的影响，探讨E1Tr发生的可能机制。方法雄性sD大鼠随机（随机数... 详细信息

目的通过研究内毒素耐受（endotoxin tolerance，ETT）对急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）大鼠肝组织中趋化因子受体7（chemokine receptor7，CXCR7）表达变化的影响，探讨E1Tr发生的可能机制。方法雄性sD大鼠随机（随机数字法）分为健康对照组（N组）、急性肝功能衰竭组（ALF组）和内毒素耐受组（ETT组）。ErIT组和ALF组先分别以0．1mg／kg脂多糖（1ipopoIysaccharide，LPS）和生理盐水腹腔注射，每日1次，于第5次注射24h后同时腹腔注射D-氨基半乳糖（D—galactosamine，D-GalN）（800mg／kg）和LPS（8μg/只），分别在注射后2、6、12、24、48h时间点留取大鼠血及肝脏标本。RT—PCR法检测肝组织中CXCR7mRNA表达；Westernblot法检测CXCR7蛋白表达。统计处理采用LSD检验、Dunnet’st检验。结果E，兀’组大鼠肝组织病理改变较ALF组明显减轻；ETT组肝组织CXCR7mRNA表达水平虽高于正常组，但却明显低于ALF组，与ALF组比较，差异均具有统计学意义（2、6、12、24、48h时间点比较，F值分别为29．222、166．892、38．975、34．603、18．929，均P〈0．01）。ETT组、ALF组CXCR7蛋白的表达24h时均达峰值，但ETT、组CXCR7蛋白的表达较ALF组明显下降（2、6、12h时的F值分别为11．155、42．553、17．082，均P〈***；24h时的F值7．242，P〈0．05）。结论内毒素耐受时，大剂量LPS和D—GalN能减轻肝脏损害，明显下调CXCR7mRNA和CXCR7蛋白表达，提示CXCR7在内毒素耐受的形成机制中可能发挥重要作用。

关键词：内毒素肝功能衰竭趋化因子受体7

其刺激分子OX40在内毒素耐受大鼠肝组织中的表达及意义

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中华传染病杂志 2013年第1期31卷 7-11页

作者：王柯尹洪巧董进中施春玮林镯卢明芹陈永平温州医学院附属第一医院感染科 325000

目的观察内毒素耐受（ETT）及正常大鼠接受D-氨基半乳糖（D—GalN）／脂多糖（LPS）注射后肝组织其刺激分子OX40表达的变化，探讨ETT发生的可能机制。方法雄性SD大鼠54只，按随机数字表法分为正常对照组6只、急性肝功能衰竭（ALF）组和... 详细信息

目的观察内毒素耐受（ETT）及正常大鼠接受D-氨基半乳糖（D—GalN）／脂多糖（LPS）注射后肝组织其刺激分子OX40表达的变化，探讨ETT发生的可能机制。方法雄性SD大鼠54只，按随机数字表法分为正常对照组6只、急性肝功能衰竭（ALF）组和ETT组各24只。ETT组及ALF组先分别以0．1mg／kgLPS和0．9％NaCl溶液腹腔注射，每日1次，连续5次，于第6天同时腹腔注射D-GalN 800mg／kg和LPS8μg／只，分别在注射后6、12、24和48h4个时间点留取大鼠血液及肝脏标本。RT—PCR检测大鼠肝组织OX40mRNA表达，Western印迹法测定肝组织OX40蛋白表达，ELISA检测血清TNF-α、IL-6水平。数据分析采用单因素方差分析、LSD法、Dunnett T3检验。结果ETT组大鼠血清TNF-α、IL-6水平虽高于正常对照组，但明显低于ALF组。ALF组大鼠肝组织OX40 mRNA表达上升，于造模后12h升高最明显，之后逐渐下降。ETT组大鼠肝组织0X40 mRNA表达水平虽高于正常对照组，但明显低于ALE组，与ALF组相比，差异有统计学意义（6、24、48h时间点比较，F值分别为5．027、5．539、5．011，均P〈0．05；12hF值为36．688，P〈0．01）。ALF组OX40蛋白的表达12h达峰值，24h开始下降。ETT组OX40蛋白的表达较ALF组明显下降（6hF值为8．658，P〈0．05；12、24、48hF值分别为34．611、28．176、16．747，均P〈0．01）。结论ALF组大鼠肝组织OX40表达水平升高，ETT组大鼠出现OX40的抑制，TNF-α、IL-6释放减少，提示OX40在ETT过程中可能发挥重要作用。

关键词：膜糖蛋白类内毒素类肝大鼠,Sprague-Dawley 肝功能衰竭,急性细胞因子类

非ST段抬高型急性冠状动脉综合征相关基因的生物信息学分析

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现代实用医学 2021年第9期33卷 1146-1148,I0002页

作者：李丹辉董进中陈国栋朱建华宁波市第一医院宁波315010

目的对非ST段抬高型急性冠状动脉综合征(NSTE-ACS)相关的表达基因进行筛选及功能分析,为筛选NSTE-ACS发病机制相关的分子标志物提供理论基础。方法从高通量基因表达(GEO)数据库中选取GSE60993;并通过GEO2R进行生物信息学分析,筛选出差... 详细信息

目的对非ST段抬高型急性冠状动脉综合征(NSTE-ACS)相关的表达基因进行筛选及功能分析,为筛选NSTE-ACS发病机制相关的分子标志物提供理论基础。方法从高通量基因表达(GEO)数据库中选取GSE60993;并通过GEO2R进行生物信息学分析,筛选出差异表达基因;利用DAVID对差异表达基因进行基因本体(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;通过STRING数据库和Cytoscape软件构建差异表达基因对应的蛋白质相互作用网络,并利用MCC算法获取具有高度连接性的关键基因。结果通过对NSTE-ACS差异表达基因的筛选,共获得327个差异表达基因,包括上调基因190个、下调基因137个。差异表达基因主要涉及核糖体、哮喘、抗原处理和呈递、同种异体移植排斥反应、病毒性心肌炎等相关信号通路,并通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络和Cytoscape软件筛选出10个具有高度连接性的关键基因,包括核糖体蛋白S6(RPS6)、X连锁核糖体蛋白S4(RPS4X)、核糖体蛋白L13A(RPL13A)、核糖体蛋白L18(RPL18)、核糖体蛋白L14(RPL14)、核糖体蛋白L24(RPL24)、核糖体蛋白L17(RPL17)、Aurora激酶B(NSA2)、核糖体蛋白37A(RPL37A)、核糖体蛋白S13(RPS13)。结论 NSTE-ACS差异基因可能主要通过核糖体通路、抗原处理和呈递通路及病毒性心肌炎等相关信号通路来发挥相关其作用。

关键词：心肌梗塞,非ST段抬高型急性冠状动脉综合征基因芯片生物信息学

肝星状细胞差异表达基因的筛选及生物信息学分析

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浙江医学 2020年第12期42卷 1259-1263,I0003页

作者：王丽萍董进中王志宇宁波市第一医院感染内科 315000 宁波市第一医院重症医学科 315000

目的对肝星状细胞(HSC)差异表达基因进行筛选及功能分析,为肝纤维化发病机制相关的分子标志物及药物靶点提供理论基础。方法从高通量基因表达(GEO)数据库中选取GSE11954,利用GEO2R进行生物信息学分析,筛选差异表达基因,并利用DAVID对差... 详细信息

目的对肝星状细胞(HSC)差异表达基因进行筛选及功能分析,为肝纤维化发病机制相关的分子标志物及药物靶点提供理论基础。方法从高通量基因表达(GEO)数据库中选取GSE11954,利用GEO2R进行生物信息学分析,筛选差异表达基因,并利用DAVID对差异表达基因进行基因本体(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;通过STRING数据库和Cytos c a p e软件构建差异表达基因对应的蛋白质相互作用网络,利用MCC算法获取具有高度连接性的关键基因。结果对HSC活化组与抑制组数据的差异表达基因进行筛选,共获得1176个差异表达基因,包括上调基因616个、下调基因560个。差异表达基因主要涉及细胞外基质-受体相互作用,细胞周期、p53信号通路及黏着斑等信号通路,通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络和Cytoscape软件筛选出10个具有高度连接性的关键基因,包括有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B(BUB1B)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDKl)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)、有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)、细胞周期蛋白B2(CCNB2)、有丝分裂检查点丝氨酸/苏氨酸激酶(BUB1)、细胞分裂周期蛋白8(CDCA8)、Aurora激酶B(AURKB)、Ndc80复合体(NUF2)、驱动蛋白家族成员2C(KIF2C)。结论HSC差异表达基因可能主要通过ECM受体相互作用通路、黏着斑信号通路、细胞周期通路、p53信号通路来调控肝纤维化的发生、发展。

关键词：肝星状细胞肝纤维化基因芯片生物信息学

骨形成蛋白-7对肝纤维化表皮生长因子受体表达的影响

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中华传染病杂志 2014年第2期32卷 89-93页

作者：王丽萍董进中曹肃婷张赛男林镯王晓东陈永平温州医科大学附属第一医院感染科 325000

目的观察肝纤维化小鼠模型中表皮生长因子受体（EGFR）的动态表达，以及骨形成蛋白-7（BMP-7）对其表达的影响，探讨治疗纤维化的新靶点。方法30只健康雄性ICR小鼠随机数字表法分为正常对照组（6只）、肝纤维化模型组（18只，包括4、8... 详细信息

目的观察肝纤维化小鼠模型中表皮生长因子受体（EGFR）的动态表达，以及骨形成蛋白-7（BMP-7）对其表达的影响，探讨治疗纤维化的新靶点。方法30只健康雄性ICR小鼠随机数字表法分为正常对照组（6只）、肝纤维化模型组（18只，包括4、8、12周3个亚组）和BMP-7干预组（6只），皮下注射四氯化碳制备肝纤维化小鼠模型，BMP-7干预组注射四氯化碳8周后腹腔注射人重组BMP-7，持续4周。采用HE和Manson染色观察肝组织病理变化，并进行肝纤维化半定量评分；下腔静脉采血检测ALT、AST和白蛋白；采用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测各组TGF-β1 mRNA和TGF-β1、EGFR、pEGFR蛋白表达情况。计量资料比较采用方差分析，相关性采用Pearson相关分析。结果成功建立小鼠肝纤维化模型，肝纤维化模型组血清ALT、AST均逐渐升高，12周时最高，白蛋白逐渐降低，12周时最低，BMP-7干预组各指标均有所缓解[ALT：（153．9±18．1）U／L比（191．3±24．5）U／L；AST：（177．8±19．2）U／L比（206．6±25．0）U／L；白蛋白：（25．4±0．9）g／L比（22．2±1．2）g／L；均P〈0．053。肝纤维化组随着纤维化的进展，TGF-β1、EGFR及pEGFR的蛋白表达量均逐渐升高，于12周时达到高峰，BMP-7干预后，上述3种蛋白的表达水平均明显降低（TGF-β1：0．256士0．006比0．287±0．014；EGFR：1．061±0．017比1．094±0．014；pEGFR：0．855±0．053比1．007±0．063；均P〈0．05）。直线相关分析显示，TGF-β1与EGFR及pEGFR表达量均呈正相关（rs值分别为0．895、0．859，均P〈0．05）。结论BMP-7能改善小鼠肝纤维化，其作用机制可能是调节EGFR和TGF-β1的表达。

关键词：肝硬化骨形态发生蛋白质类受体,表皮生长因子转化生长因子B1 疾病模型,动物

内毒素耐受小鼠脾脏CD11C^lowCD45RB^high树突状细胞对急性肝功能衰竭锌指蛋白A20表达的影响

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中华传染病杂志 2015年第6期33卷 351-357页

作者：董进中王丽萍张赛男施春玮杨乃彬倪顺兰卢明芹宁波市第一医院重症监护病房 315000 宁波市第一医院感染科 315000 杭州市萧山区第一人民医院感染科温州医科大学附属第一医院感染科

目的观察内毒素耐受CD11C^lowCD45RB^highDC对急性肝功能衰竭小鼠锌指蛋白A20表达的影响，探讨其在急性肝功能衰竭治疗中的作用及可能机制。方法建立内毒素耐受小鼠模型，经免疫磁珠法分选正常小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC和内... 详细信息

目的观察内毒素耐受CD11C^lowCD45RB^highDC对急性肝功能衰竭小鼠锌指蛋白A20表达的影响，探讨其在急性肝功能衰竭治疗中的作用及可能机制。方法建立内毒素耐受小鼠模型，经免疫磁珠法分选正常小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC和内毒素耐受小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC。选取健康雄性BALB／c小鼠126只，随机分为正常对照组（A组6只）、急性肝功能衰竭组（B组40只）、正常小鼠脾脏CD11C^lowCD45RB^highDC治疗组（C组40只）和内毒素耐受小鼠脾脏CD11C^lowCD45RB^highDC治疗组（D组40只）；B、C、D三组小鼠同时腹腔注射D-GaIN600mg／kg和脂多糖10μg／只，A组注射等体积0．9％氯化钠溶液；30min后C组腹腔注射正常小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC（1×10^6／只，0．2mL／只），D组腹腔注射内毒素耐受小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC（1×10^6／只，0．2mL／只）进行干预，A、B组则给予相同剂量的0．9％氯化钠溶液。检测各组小鼠各时间点血ALT、AST水平；采用HE染色观察各组小鼠各时间点肝组织病理变化；反转录（RT）-PCR和Western免疫印迹法检测各组小鼠各时间点TNF-α、核因子-κB、锌指蛋白A20表达情况。样本均数比较采用单因素方差分析。进行正态性检验和方差齐性分析，方差齐者采用LSD检验。结果B组在造模2h后ALT、AST开始逐渐升高，于24h达高峰，明显高于A组（t值分别为31．00和11．52，均P〈0．05）。C、D两组于造模2h后ALT、AST也逐渐升高，于24h达高峰，与B组比较，差异均有统计学意义（t值分别为14．60和26．43，均P〈0．05）。B组小鼠TNF-αmRNA（t=427．58）、核因子-κBmRNA（t=122．42）及蛋白表达量（￡值分别为179．35和165．98）随着时间的推移逐渐升高，至12h达高峰，与A组相比差异有统计学意义（均P〈0．05）。B组小鼠锌指蛋白A20mRNA及蛋白则随着时间的延长逐渐降低，在12h达到最低，与A组相比差异有统计学意义（t值分别为90．80和160．43，均P〈0．05）；A20mRNA及蛋白表达量则随着时间的延长逐渐增加，在12h达到最高值，且D组增加较C组更明显，差异有统计学意义（t值分别为11．21和24．80，均P〈0．05）。结论内毒素耐受小鼠脾脏来源CD11C^lowCD45RB^highDC治疗可减轻肝脏损害。

关键词：肝功能衰竭急性脂多糖类树突细胞 NF—κB 锌指蛋白A20

内毒素耐受小鼠脾脏CD11clowCD45RBKgh树突状细胞培养与生物学特性鉴定

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中华传染病杂志 2014年第12期32卷 710-714页

作者：施春玮董进中张赛男董培红许烂漫卢明芹陈永平温州医科大学附属第一医院感染科 325000

目的分离培养内毒素耐受状态小鼠脾脏CDIiclowCD45RBhlghDC并探讨其生物学特性。方法12只体质量为20~25g的健康BALB／c小鼠，采用随机数字表法分成两组，每组6只。正常对照组小鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液0．2mL；内毒素耐受组小鼠以0．... 详细信息

目的分离培养内毒素耐受状态小鼠脾脏CDIiclowCD45RBhlghDC并探讨其生物学特性。方法12只体质量为20~25g的健康BALB／c小鼠，采用随机数字表法分成两组，每组6只。正常对照组小鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液0．2mL；内毒素耐受组小鼠以0．1弘g脂多糖腹腔注射，每日1次，连续注射5d建立内毒素耐受小鼠模型。免疫磁珠分选法分选正常对照组和内毒素耐受小鼠脾脏CDIIclowCD45RBhigchDC，流式细胞术检测细胞表型，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测T淋巴细胞增殖抑制率，ELISA法检测上清液中IL-10和IL-12表达量。样本均数比较采用单因素方差分析，Levene法检验方差齐性，方差齐时采用LSD-t检验，方差不齐时采用DunnettT3检验。结果正常对照组小鼠CDIIclowCD45RBhighDC浓度为30％，细胞计数为（5．30±0．12）×10。个；内毒素耐受组CDlllowCD45RBhightDC浓度为80％，细胞计数为（1．20±0．13）×i0。个，两组差异有统计学意义（t=3．23，P〈0．01）。两组细胞形态上未见明显差别。内毒素耐受小鼠脾脏CDIIc“”CD45RB“ghDC表面标志主要组织相容性抗原（MHC）-II、CD40、CD80的表达均较正常对照组明显降低。内毒素耐受组在细胞浓度为i：10、1：50、I：100时细胞增殖率均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义（t值分别为1．36、2．49和1．88，均P〈0．01）。内毒素耐受组各浓度细胞与正常对照组比较，IL-10分泌量显著增加，差异有统计学意义（t值分别为13．63、13．45和9．31，均P〈0．01）；IL-12分泌量明显下降，差异有统计学意义（t值分别为2．62、2．74和2．99，均P〈0．05）。结论内毒素耐受小鼠脾脏CDllclowCD45RBhighDC具有较弱的抗原提呈能力及刺激异基因淋巴细胞增殖能力。

关键词：内毒素类树突细胞白细胞介素10 白细胞介素12

重症监护病房脑出血患者并发高钠血症的临床研究

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现代实用医学 2020年第9期32卷 1048-1050页

作者：陈国栋樊恒李丹辉董进中朱建华宁波市第一医院宁波315000

目的探讨脑出血患者并发高钠血症的特点及预后。方法选取200例脑出血患者,记录患者的最高血钠和平均血钠值,根据血钠浓度进行分组和分层比较,分析其临床特征及预后情况。结果与非高钠血症组相比,高钠血症组格拉斯哥昏迷评分法(GCS)评分... 详细信息

目的探讨脑出血患者并发高钠血症的特点及预后。方法选取200例脑出血患者,记录患者的最高血钠和平均血钠值,根据血钠浓度进行分组和分层比较,分析其临床特征及预后情况。结果与非高钠血症组相比,高钠血症组格拉斯哥昏迷评分法(GCS)评分更低,急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)评分更高,肝功能异常和各类感染的并发症更易发生,且预后更差。进一步分层分析结果显示,血钠指标与脑出血患者的并发症和预后呈正相关。结论高钠血症与脑出血疾病的发展及预后密切相关,高钠血症既是影响患者疗效的独立危险因素,同时也是判断患者预后的临床指标。

关键词：脑出血高钠血症临床指标预后危险因素

OX40在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达及意义

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OX40在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达及意义