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固定化脂肪酶合成3-TBDMSO戊二酸甲酯

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化学工程 2014年第7期42卷 6-10,21页

作者：王霞董文玥陈雄飞付雁天津大学化工学院天津300072

脂肪酶主要催化醇、酸、内酯的酯化反应,脂肪酶催化反应可在非水溶剂中进行,并且反应条件温和,被认为是制备单一对映异构体的有效方法。文中利用固定化脂肪酶Novozym 435催化3-TBDMSO戊二酸酐不对称醇解制备3-TBDMSO戊二酸甲酯,通过高... 详细信息

脂肪酶主要催化醇、酸、内酯的酯化反应,脂肪酶催化反应可在非水溶剂中进行,并且反应条件温和,被认为是制备单一对映异构体的有效方法。文中利用固定化脂肪酶Novozym 435催化3-TBDMSO戊二酸酐不对称醇解制备3-TBDMSO戊二酸甲酯,通过高效液相色谱考察了不同反应条件对底物转化率、产物选择性的影响规律。实验研究了四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醚、甲基叔丁基醚和甲苯5种溶剂对酶催化反应的影响,结果表明:在甲基叔丁基醚溶剂中,Novozym 435的催化效果最好。最优反应条件:温度25℃,酶质量浓度30 mg/mL,醇与3-TBDMSO戊二酸酐摩尔比1.0,酸酐浓度100 mmol/L,pH值为6.5,水活度0.66,反应时间6 h。实验采用萃取的方法分离出反应产物,通过结晶纯化得到无色晶体,利用核磁氢谱证明产物为3-TBDMSO戊二酸甲酯,通过圆二色光谱说明合成产物为对映体过剩产品。

关键词：他汀脂肪酶醇解对映选择性

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纳米材料固定化酶的研究进展

微生物学通报 2020年第7期47卷 2161-2176页

作者：董文玥姚培圆吴洽庆中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室天津300308

近年来,纳米技术为酶固定化提供了多种纳米级材料,纳米材料固定化酶不仅具有高的酶负载量,而且具有良好的酶稳定性。本文基于纳米材料固定化酶,对纳米材料的种类进行了总结,分析了纳米材料对固定化酶性能的影响,并介绍了纳米级固定化方... 详细信息

近年来,纳米技术为酶固定化提供了多种纳米级材料,纳米材料固定化酶不仅具有高的酶负载量,而且具有良好的酶稳定性。本文基于纳米材料固定化酶,对纳米材料的种类进行了总结,分析了纳米材料对固定化酶性能的影响,并介绍了纳米级固定化方法及纳米材料固定化酶在生物转化、生物传感器、生物燃料电池等领域的应用。

关键词：生物催化纳米材料固定化酶固定化方法

生物催化3-(4-氯苯基)-戊二腈去对称性水解合成光学纯巴氯芬的关键前体

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生物工程学报 2013年第1期29卷 31-40页

作者：徐美珍任杰龚劲松董文玥吴洽庆许正宏朱敦明江南大学医药学院制药工程研究室江苏无锡214122 中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室天津300308

研究了利用生物催化剂制备(S)-4-氰基-3-(4-氯苯基)-丁酸。以3-(4-氯苯基)-戊二腈为底物,采用苯酚-次氯酸钠法对实验室保藏的菌株进行筛选,得到一株产物立体选择性较高的菌株赤霉菌Gibberellaintermedia WX12,并对其催化特性和发酵条件... 详细信息

研究了利用生物催化剂制备(S)-4-氰基-3-(4-氯苯基)-丁酸。以3-(4-氯苯基)-戊二腈为底物,采用苯酚-次氯酸钠法对实验室保藏的菌株进行筛选,得到一株产物立体选择性较高的菌株赤霉菌Gibberellaintermedia WX12,并对其催化特性和发酵条件进行了初步研究。以30 g/L的乳糖和20 g/L的蛋白胨分别为碳、氮源,发酵培养96 h,收集的菌体在50 mmol/L磷酸缓冲液(pH 8.0)中30℃催化反应24 h,将3-(4-氯苯基)-戊二腈转化为4-氰基-3-(4-氯苯基)-丁酸,产率为90%。将产物化学转化为巴氯芬,手性HPLC分析表明水解产物构型是(S),其对映异构体过量值ee>99%。该产物可以用来合成光学纯的(R)-和(S)-巴氯芬。

关键词：腈水解酶 3-(4-氯苯基)-戊二腈 4-氰基-3-(4-氯苯基)-丁酸巴氯芬

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舒适护理在带状疱疹患者护理中的应用研究

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第10期 196-197页

作者：董文玥重庆市中医院重庆400000

研究舒适护理在带状疱疹患者护理中的应用效果。方法:自2019.6~2020.4内我院接治的带状疱疹患者中纳入80例遵照随机电脑盲化法列为一般组(n=40,一般护理)与舒适组(n=40,舒适护理),将两组护理效果进行对比。结果:两组护理前焦虑(SAS)、抑... 详细信息

研究舒适护理在带状疱疹患者护理中的应用效果。方法:自2019.6~2020.4内我院接治的带状疱疹患者中纳入80例遵照随机电脑盲化法列为一般组(n=40,一般护理)与舒适组(n=40,舒适护理),将两组护理效果进行对比。结果:两组护理前焦虑(SAS)、抑郁(SDS)评分相比无差异,P>0.05,护理后舒适组均低于一般组,P<0.05;舒适组疼痛消失时间及愈合时间均短于一般组,P<0.05。结论:舒适护理能明显改善带状疱疹患者焦虑、抑郁等负面情绪,同时减轻其疼痛感,缩短疱疹愈合时间,有应用价值。

关键词：带状疱疹舒适负面情绪疼痛

一种来源于Burkholderia phytofirmans PsJN的ω-转氨酶的表达纯化及性质分析

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生物工程学报 2016年第7期32卷 912-926页

作者：杜允成董文玥姜进举陈启佳冯进辉吴洽庆朱敦明中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室天津300308 中国科学院大学北京100049

ω-转氨酶(ω-transaminase)可以通过手性拆分和不对称合成的催化反应来获得光学纯的手性胺类化合物和非天然氨基酸,在医药中间体合成中是一种重要的生物催化剂。采用基因挖掘技术,在基因组数据库中获得一个来自伯克氏菌Burkholderia ph... 详细信息

ω-转氨酶(ω-transaminase)可以通过手性拆分和不对称合成的催化反应来获得光学纯的手性胺类化合物和非天然氨基酸,在医药中间体合成中是一种重要的生物催化剂。采用基因挖掘技术,在基因组数据库中获得一个来自伯克氏菌Burkholderia phytofirmans Ps JN的ω-转氨酶基因(hbp),将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆、表达,利用镍柱亲和层析将该酶(HBP)进行纯化并研究了其酶学性质和底物谱。结果表明,以β-苯丙氨酸(β-Phe)为氨基供体、丙酮酸为氨基受体,HBP具有较高的活力(33.80 U/mg)和立体选择性;其最适温度为40℃左右,最适p H在8.0–8.5之间。研究过程中,建立了一种简便快捷的紫外吸收法来检测β-Phe的脱氨反应,证明了该反应的热力学平衡性质。底物谱研究表明HBP可以以β-Phe及其衍生物为氨基供体。结果表明HBP能够有效地手性拆分rac-β-Phe及其衍生物,转化率在50%左右,ee>99%。

关键词： ω-转氨酶伯克氏菌芳香族β-氨基酸手性拆分

半理性设计改造ω-转氨酶不对称合成β-氨基酸酯

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半理性设计改造ω-转氨酶不对称合成β-氨基酸酯

第十二届中国酶工程学术研讨会

作者：王寅刚董文玥吴洽庆朱敦明中国科学院大学中国科学院天津工业生物技术研究所

β-氨基酸作为一种非天然氨基酸,是多种重要手性胺类药物的合成前体。ω-转氨酶是一种重要的合成手性胺生物催化剂,可以通过动力学拆分和不对称合成的催化反应合成手性胺类化合物和光学纯氨基酸,在酶催化合成β-氨基酸的研究中展现出巨... 详细信息

β-氨基酸作为一种非天然氨基酸,是多种重要手性胺类药物的合成前体。ω-转氨酶是一种重要的合成手性胺生物催化剂,可以通过动力学拆分和不对称合成的催化反应合成手性胺类化合物和光学纯氨基酸,在酶催化合成β-氨基酸的研究中展现出巨大的研究价值。利用ω-转氨酶偶联脂肪酶不对称合成手性β-氨基酸的难点在于底物β-酮酸的不稳定性[1],以β-酮酸酯代替β-酮酸为作为合成底物,则可以解决因底物水解造成的产率损失问题。野生型的ω-转氨酶对β-酮酸酯类底物活性较低,我们通过基因挖掘发现一种来源于越南伯克氏菌Burkholderia vietnamiensis G4的S立体选择性ω-转氨酶HBV对小分子β-酮酸酯具有较高的天然活性和立体选择性[2],由于HBV的底物结合口袋内空间较小导致其无法催化大位阻β-酮酸酯类底物。针对这一问题,我们通过对HBV进行同源建模,并基于ω-转氨酶双底物结合口袋模型进行半理性设计改造,扩大底物结合口袋内空间,减小了底物通道内的位阻效应。经过5轮迭代饱和突变筛选获得突变体HBV-L57A/W58F/F86M/154S/I260V提升了对小分子β-酮酸酯的催化活性,对野生型不具有活性的脂肪族β-酮酸酯类底物丁酰乙酸乙酯、异丁酰乙酸乙酯及特戊酰乙酸乙酯酶活分别达28.03mU/mg、39.51mU/mg和38.52mU/mg,且对直链脂肪族β-酮酸酯类底物具有极高的立体选择性（ee＞99%）,为不对称合成光学纯S构型β-氨基酸酯奠定了基础。

关键词： β-酮酸酯 β-氨基酸酯 ω-转氨酶不对称合成

来源： cnki会议评论

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等温扩增荧光法快速鉴定羊肉掺假

食品安全导刊 2023年第9期 62-64页

作者：段真文许绍坤张薇李鲜鲜董文玥云南瑞栢泰生物科技有限公司云南昆明650000

本文建立了快速鉴定羊肉掺假的等温扩增荧光检测方法。针对羊的线粒体Cytb基因设计两套引物,在恒温下,以直扩法处理的样本为模板进行扩增,通过特异性、灵敏度实验对该方法体系进行验证和分析。结果表明,最佳反应温度为65℃,最低检测限为... 详细信息

本文建立了快速鉴定羊肉掺假的等温扩增荧光检测方法。针对羊的线粒体Cytb基因设计两套引物,在恒温下,以直扩法处理的样本为模板进行扩增,通过特异性、灵敏度实验对该方法体系进行验证和分析。结果表明,最佳反应温度为65℃,最低检测限为5.54×10^(-5) ng·μL^(-1)。本研究建立的等温扩增荧光法快速鉴定羊肉掺假结果准确可靠、反应快速,具有良好的特异性和灵敏度,可以同时满足实验室和现场检测要求,为快速鉴定羊肉种属提供了一种新的检测方法,为其他肉类种属快速鉴定提供理论依据。

关键词：等温扩增荧光检测方法羊肉掺假现场检测

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