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光致敏体外评价方法验证研究

光致敏体外评价方法验证研究

作者：董建欣中国食品药品检定研究院

学位级别：硕士

研究背景光致敏属于严重的皮肤毒性作用,是化合物在光照条件下所引起的一种特殊皮肤过敏反应。临床表现为皮肤曝光部位出现红斑、丘疹、水疱等改变,伴有瘙痒或灼痛感,严重者会引起全身症状。光致敏性评价是皮肤用药、某些系统给药药物... 详细信息

研究背景光致敏属于严重的皮肤毒性作用,是化合物在光照条件下所引起的一种特殊皮肤过敏反应。临床表现为皮肤曝光部位出现红斑、丘疹、水疱等改变,伴有瘙痒或灼痛感,严重者会引起全身症状。光致敏性评价是皮肤用药、某些系统给药药物和化妆品安全评价中的重要项目,FDA、ICH和NMPA的相关指导原则中都要求对具有潜在光致敏作用的化合物进行评价。目前国内外公认的光致敏评价方法只有豚鼠光致敏试验,但该方法应用动物数较多,试验周期长,对动物造成的损伤较大,不符合动物福利原则,并且该方法缺乏客观定量的评价指标。另外,多个国家和地区已经全面禁止化妆品动物试验,并禁止新近做过动物试验的化妆品上市销售。因此亟需开发化合物光致敏体外评价方法。研究目的本研究的目的是完善已建立的THP-1细胞光致敏体外评价方法,确定光致敏具体评价指标和判定标准,并对建立的方法进行准确性、特异性、灵敏度和重复性的验证。研究方法1、以细胞表面标志物为评价指标的光致敏体外评价方法的验证将THP-1细胞分别与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂及1种阴性受试物在细胞培养箱孵育24 h,每种受试物3-4个孵育浓度(皮肤刺激剂和阴性化合物为一个浓度),之后进行UVA照射或避光处理,照射强度为1.7 mw/cm2,照射或避光处理时间为50 min。UVA照射后将细胞换液,加入细胞培养基,放入培养箱继续培养24 h,然后用流式细胞仪测定THP-1细胞表面生物标志物CD54和CD86的表达水平。用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色测定活细胞百分比,在保证细胞活率大于75%的基础上进行CD54和CD86检测。检测照射组和未照射组表达CD54、CD86的阳性细胞百分比及平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),并计算CD54和CD86的相对荧光强度(relative fluorescence intensity,RFI)。(1)在未照射条件下:RFI= 受试物非照射组“抗CD54或CD86抗体”MFI-本组同型对照MFI/细胞对照非照射组“抗CD54或CD86抗体”MFI-本组同型对照MFI(2)在照射条件下:RFI=(受试物照射组“抗CD54或CD86抗体”MFI-本组同型对照MFI)/(细胞对照照射组“抗CD54或CD86抗体”MFI-本组同型对照MFI)对于具有光刺激性的4种受试物及部分光致敏剂额外增加预照射处理试验组,即先将受试物加入细胞培养基内(无细胞),UVA照射30 min,避光放置15 min,再与THP-1细胞共同孵育,之后进行后续的与其它受试物相同的试验操作,并检测CD54和CD86的表达水平。确定以细胞表面标志物为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法的具体评价指标和阳性结果判定标准,并对建立的方法进行准确性、特异性、灵敏度和重复性的验证。2、以细胞因子为评价指标的光致敏体外评价方法的验证本部分方法中所用受试物与第一部分相同。将THP-1细胞与上述多种不同类型的受试物分别孵育24h,每种受试物3-4个孵育浓度(皮肤刺激剂和阴性化合物为一个浓度),之后进行UVA照射,照射强度为1.7 mw/cm2,照射或避光处理时间为50 min在照射结束后5 h用Luminex技术检测各个受试物照射组和非照射组THP-1细胞上清液和裂解液中IL-8和TNF-α的含量,并计算照射组/非照射组IL-8含量的比值和照射组/非照射组TNF-α含量的比值。对于具有光刺激性的4种受试物及部分光致敏剂额外增加预照射处理试验组,即先将受试物加入细胞培养基内(无细胞),UVA照射30 min,避光放置15 min,再与THP-1细胞共同孵育,之后进行后续的与其它受试物相同的试验操作,并检测IL-8和TNF-α的含量。确定以细胞因子为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法的具体评价指标和阳性结果判定标准,并对建立的方法进行准确性、特异性、灵敏度和重复性的验证。研究结果1、以细胞表面标志物为评价指标的光致敏体外评价方法的验证THP-1细胞分别与多种不同浓度的光致敏剂孵育并经UVA照射后,19种光致敏剂中有15种引起照射组THP-1细胞表达CD54的MFI较非照射组显著性增加,,且照射组CD54的RFI值均在1.5以上。4种光刺激剂与THP-1细胞孵育以及UVA照射后也可引起细胞表达CD54的MFI显著性增加,但经过预照射处理后,预照射组CD54的表达比直接照射组(未经预照射)显著下降,预照射处理可以对光刺激剂和光致敏剂进行鉴别。本研究中所有光致敏剂和光刺激剂均未引起THP-1细胞光照前后CD86表达的明显变化。皮肤致敏剂DNCB和CHD在未经UVA照射时即可引起THP-1细胞表达CD54的MFI显著性增加,在照射后CD54

关键词： THP-1细胞光致敏性体外评价方法方法学验证细胞表面标志物CD54、CD86 细胞因子IL-8、TNF-α

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小白鼠对水饵引诱剂的选择性试验报告

中国媒介生物学及控制杂志 1991年第T03期2卷 34-36页

作者：董建欣董希超

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天津市生态补偿机制构建与实施情况研究

天津经济 2012年第1期 41-43页

作者：董建欣天津市发改委区域经济处

本文从生态补偿机制的涵义入手,介绍了目前中国生态补偿机制的模式、制定原则和天津市生态补偿工作的现状,着重分析了天津市生态补偿工作存在的问题,并提出了在天津市系统开展生态补偿工作的建议。

关键词：生态补偿机制生态保护生态补偿标准

天津加强产业合作巩固拓展脱贫攻坚成果有效衔接乡村振兴的工作思路研究

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天津经济 2021年第5期 3-6页

作者：韩静董建欣王震天津市发展和改革委员会 300040 天津市合作交流办 300061

脱贫攻坚战打响以后,天津的产业合作通过政府引导、市场主导的模式,引导企业赴结对地区落户投资,带动当地贫困群众增加收入,有效助力结对地区"造血生肌",为全面打赢脱贫攻坚战贡献了天津力量。本文在充分总结天津产业合作典型做法的基础... 详细信息

脱贫攻坚战打响以后,天津的产业合作通过政府引导、市场主导的模式,引导企业赴结对地区落户投资,带动当地贫困群众增加收入,有效助力结对地区"造血生肌",为全面打赢脱贫攻坚战贡献了天津力量。本文在充分总结天津产业合作典型做法的基础上,分析了存在的工作短板,对下一步天津加强产业合作、高质量接续助推结对地区产业发展、巩固拓展脱贫攻坚成果并与乡村振兴有效衔接,提出了工作思路。

关键词：产业合作乡村振兴创新扶贫

溴敌隆灭鼠效果观察——Ⅰ.农村大面积现场灭鼠试验报告

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中国鼠类防制杂志 1989年第2期5卷 75-77页

作者：董希超李春芳张兰花董建欣吴润昭刘代军内蒙古自治区流行病防治研究所内蒙古自治区灭鼠灭虫服务公司土默特左旗爱卫办

应用第一代抗凝血剂大面积创建无鼠害城镇早有报道,且取得突破性进展。但是,采用第一代抗凝血杀鼠剂多次饱和投饵技术,相对来说,存在着用工时多,耗饵量大,对残存小家鼠效果差等问题,尚待进一步探索。国外同行***等曾提出,可应用第二代... 详细信息

应用第一代抗凝血剂大面积创建无鼠害城镇早有报道,且取得突破性进展。但是,采用第一代抗凝血杀鼠剂多次饱和投饵技术,相对来说,存在着用工时多,耗饵量大,对残存小家鼠效果差等问题,尚待进一步探索。国外同行***等曾提出,可应用第二代抗凝血剂,并采用间断投饵技术(回合式投饵法)。对此,我们也曾进行过比较试验,证实方法可行。但因第二代抗凝血剂价格昂贵,使推广应用受到一定的限制。

关键词：溴敌隆灭鼠效果

以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法的确定和验证

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药物评价研究 2022年第1期45卷 20-29页

作者：董建欣黄舒佳王宇姜华赵华琛祝清芬刘丽李波山东省食品药品检验研究院国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室山东济南250101 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室北京100176 国家药品监督管理局药品审评中心北京100022

目的确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育,在光照射或避光处理后,用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的... 详细信息

目的确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育,在光照射或避光处理后,用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的表达水平并统计分析,进一步确定具体的评价指标,并对该方法的准确性、特异性、灵敏度、重复性进行验证。结果19种光致敏剂中有15种引起照射组THP-1细胞表达CD54的平均荧光强度(MFI)较非照射组显著增加(P<0.05、0.01),且照射组细胞表达CD54的相对荧光强度(RFI)值均在1.5以上。光刺激剂经光照射后也可引起细胞表达CD54的MFI显著增加(P<0.01),但经过预照射处理后,CD54的表达水平较直接照射组显著下降(P<0.01)。未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞表达CD54和CD86的MFI比对照组显著增加(P<0.01),光照后CD54的表达反而略有下降。在光照和避光条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物(乳酸)均未引起细胞表达CD54或CD86的显著性变化。以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是85.2%、100%和78.9%,具有良好的重复性。结论确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞表面标志物评价指标为CD54,判定标准为:(1)光照后THP-1细胞表达CD54的MFI较照射前显著性增加;(2)光照后THP-1细胞表达CD54的RFI≥1.5;(3)当上述条件均满足时,对受试物进行预照射处理,结果仍然满足前2条标准。

关键词：光致敏 THP-1细胞 CD54 CD86 平均荧光强度相对荧光强度方法学验证

以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法的确定和验证

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药物评价研究 2022年第1期45卷 10-19页

作者：董建欣黄舒佳王宇孙旭赵华琛祝清芬刘丽李波山东省食品药品检验研究院国家药品监督管理局仿制药研究与评价重点实验室山东济南250101 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心药物非临床安全评价研究北京市重点实验室北京100176 国家药品监督管理局药品审评中心北京100022

目的确定并验证以白细胞介素-8(IL-8)作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h,在光照射(1.7 mW·cm^(−2),50 min)或避光处理... 详细信息

目的确定并验证以白细胞介素-8(IL-8)作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h,在光照射(1.7 mW·cm^(−2),50 min)或避光处理后,细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射(光照30 min,然后避光15 min)处理。用Luminex液相芯片检测技术测定细胞培养上清和细胞裂解液中IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量并统计分析,进一步确定评价光致敏的细胞因子指标,并进行方法验证。结果与非照射组比较,13种光致敏剂均引起照射组THP-1细胞IL-8总含量显著增加(P<0.01),阿伏苯宗为非照射组的1148~2269倍,其余12种为非照射组的6.7~195.1倍;光刺激剂经光照射后也可引起细胞分泌IL-8显著增加(P<0.01),但经过预照射处理后,IL-8的含量相比直接照射组显著下降(P<0.01)。未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞分泌IL-8比对照组显著增加(P<0.01),光照后IL-8含量虽也较非照射组显著增加(P<0.01),但增加的幅度小于皮肤致敏剂本身引起IL-8变化的幅度。在光照条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物均可引起细胞分泌IL-8较非照射组显著性增加(P<0.05),但增加的幅度较小,与对照组相似。以上受试物引起光照前后细胞TNF-α变化的幅度均与对照组相近。以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是77.8%、100.0%、68.4%,并且该方法具有良好的重复性。结论确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞因子标志物评价指标为IL-8,判定标准为:①UVA照射后THP-1细胞中IL-8含量比非照射组显著增加;②UVA照射组与非照射组IL-8含量比值≥6.5;③当上述两条均满足时,对受试物进行UVA预照射处理,预处理照射组IL-8的含量与直接照射组(未经预照射)相比无显著性差异,且预处理照射组与预处理非照射组IL-8含量比值≥6.5。

关键词：光致敏 THP-1细胞白细胞介素肿瘤坏死因子-α 方法验证

以细胞因子为研究指标的光致敏体外评价方法的建立

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药物评价研究 2022年第1期45卷 1-9页

作者：赵华琛王宇黄舒佳姜华董建欣王庆利刘丽李波国家药品监督管理局药品审评中心北京100022 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心北京102629 山东省食品药品检验研究院山东济南250201

目的研究和建立以细胞因子水平变化作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法THP-1细胞分别与光致敏剂6-甲基香豆素(6-MC)和对氨基苯甲酸(PABA)、光致敏剂兼光刺激剂硫氯酚(bithionol)、光致敏兼皮肤致敏剂对苯二胺(PPD)和二苯甲酮(BP)... 详细信息

目的研究和建立以细胞因子水平变化作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法THP-1细胞分别与光致敏剂6-甲基香豆素(6-MC)和对氨基苯甲酸(PABA)、光致敏剂兼光刺激剂硫氯酚(bithionol)、光致敏兼皮肤致敏剂对苯二胺(PPD)和二苯甲酮(BP)、单纯皮肤致敏剂盐酸双氯苯双胍己烷(CHD)和二硝基氯苯(DNCB)、光刺激剂蒽(anthracene)和吖啶(acridine)、皮肤刺激剂月桂基磺酸钠(SDS)、阴性对照乳酸(LA)孵育24 h,与相应溶剂孵育作为对照组,经光照射(1.7 mW·cm^(−2),50 min)或避光处理后,细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射(在SOL 500人工太阳照射装置中照射30 min,然后避光放置15 min)处理。采用Luminex分析仪及多因子检测试剂盒分别检测细胞因子白细胞介素(IL)-12/P40、IL-12/P70、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8、IL-18、IL-4和IL-13水平的改变,确定光致敏相关特异性细胞因子,建立相应的光致敏体外评价方法。结果光致敏剂与THP-1细胞孵育并经光照后,与未照射组比较,细胞裂解液+上清液中IL-8和TNF-α的含量均显著增加(P<0.01),其中IL-8的增加幅度最大,光致敏剂6-MC、PABA、PPD和硫氯酚照射与未照射组的IL-8水平比值均大于10,TNF-α水平比值均大于1.5。光刺激剂吖啶和蒽细胞模型经过光直接照射后,IL-8水平是未照射组的10倍以上,TNF-α水平是未照射组的1.5倍以上;经过预照射处理后,其照射组与未照射组IL-8比值均下降到10以下,TNF-α比值均下降到1.5以下。皮肤致敏剂DNCB和CHD、皮肤刺激剂SDS、阴性对照LA和对照组,光照射与未照射组IL-8比值均小于10,TNF-α比值均小于1.5。结论在THP-1细胞模型中,IL-8和TNF-α对于评价化合物光致敏性具有较好的特异性和灵敏度,IL-8更优。

关键词：光致敏体外评价方法 THP-1细胞细胞因子白细胞介素-8 肿瘤坏死因子-α

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先进控制系统在氯乙烯精馏中的应用

聚氯乙烯 2024年第11期52卷 30-31,36页

作者：孙俊润周先锋李爱民董建欣德州实华化工有限公司山东德州253007

简述了氯乙烯精馏生产工艺,分析了氯乙烯精馏系统运行情况及存在的问题,介绍了精馏系统先进控制方案及应用效果。

关键词：氯乙烯精馏控制方案自动化优化节能