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对T细胞受体克隆型肽类的免疫应答(英文)

河南医科大学学报 1999年第1期34卷 2-7页

作者：董子明张义国杨洪艳赵明耀王念慈河南医科大学病理生理学教研室耶鲁大学医学院皮肤系

目的：皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＣＴＣＬ）是记忆性诱导Ｔ细胞肿瘤，表达独特的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的α和β链，两者各含有克隆性独特蛋白序列。这些序列由独特型或第３决定簇互补区（ＣＤＲ３）组成。理论上，来源于ＴＣＲＣＤＲ３的肽类... 详细信息

目的：皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＣＴＣＬ）是记忆性诱导Ｔ细胞肿瘤，表达独特的Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的α和β链，两者各含有克隆性独特蛋白序列。这些序列由独特型或第３决定簇互补区（ＣＤＲ３）组成。理论上，来源于ＴＣＲＣＤＲ３的肽类可作为由主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）Ⅰ类分子提呈的肿瘤特异抗原。本研究旨在确定细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）是否识别ＣＤＲ３来源的肽类。方法：首先培育出能裂解２例ＣＴＣＬ病人自身的肿瘤细胞的ＣＴＬ（ＣＤ８＋）细胞株，然后检测这些ＣＴＬ对由原始Ｂ淋巴细胞提呈的源于自身恶性细胞ＴＣＲＣＤＲ３序列的合成肽产生应答的能力。结果：ＣＴＬ分泌肿瘤坏死因子（ＴＮＦα），对自身ＴＣＲβ链独特型肽产生应答，但对来源于其他ＴＣＲβ链独特型区的肽或对照肽不产生应答。抗ＭＨＣⅠ类分子的单克隆抗体（Ｗ６／３２）能阻断其肽的识别。结论：首先表明ＣＴＬ可识别具有ＣＴＣＬ病人个体独特性的恶性淋巴细胞克隆的特异ＭＨＣⅠ类分子相关肽并对其产生应答；又提示起刺激作用的肽来源于ＴＣＲβ链独特型区。该研究建立了这种机制，其他Ｔ细胞可通过此机制调解既定的抗原特异性Ｔ细胞。ＣＴＣＬ的肿瘤特异性表位的鉴定，可能有助开发强化或启动ＣＤ８介导的?

关键词：皮肤肿瘤 T细胞受体免疫应答克隆型肽类

小鼠骨髓树突状细胞pcDNA3-hCEA转染疫苗的抗瘤作用

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中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1317-1323页

作者：黄幼田董子明赵明耀杨洪艳张义国郑智敏马俊芬汤黎明陈宁郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制... 详细信息

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制备DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗 ;同时制备CT2 6(hCEA+ ) ;采用RT -PCR检测DCs(pCDNA3 -hCEA)中CEAmRNA的表达 ,采用放射免疫法检测DCs(pCDNA3 -hCEA)培养上清中CEA的含量 ;使用DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗体外诱导小鼠同种异体T淋巴细胞靶向性杀伤。采用DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗预防免疫BALB/c小鼠 ,观察其对于荷临界致瘤量CT2 6(hCEA+ )小鼠的抗肿瘤效应。结果 :经G41 8筛选 ,DCs(pCDNA3 -hCEA)有 1 4 %的获得率 ;RT -PCR检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)内CEAmRNA呈阳性表达 ;放射免疫法检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)能微量表达人CEA ;DCs(pCDNA3 -hCEA)能够有效诱导CEA靶向免疫杀伤。DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗延长荷CT2 6(hCEA+ )瘤小鼠生存期 1周至 4周。结论 :编码肿瘤抗原基因的真核表达质粒转染的树突状细胞。

关键词：小鼠骨髓树突状细胞 pcDNA3-hCEA 癌胚抗原肿瘤免疫效应真核表达质粒

酪氨酸蛋白激酶p59fyn在白细胞介素-7诱导皮肤T细胞淋巴瘤信号传导中的作用(英文)

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 7-14页

作者：董子明张义国杨洪艳郑智敏赵明耀王念慈河南医科大学病理生理学教研室耶鲁大学医学院皮肤系

目的：探讨ＩＬ７对纯化瘤性Ｔ细胞群生长信号的刺激作用。白细胞介素（ＩＬ）７能刺激一些良性和恶性淋巴细胞群，包括来自皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＣＴＣＬ）病人的肿瘤细胞。由于角化细胞产生ＩＬ７，因而ＩＬ７可能在ＣＴＣＬ和... 详细信息

目的：探讨ＩＬ７对纯化瘤性Ｔ细胞群生长信号的刺激作用。白细胞介素（ＩＬ）７能刺激一些良性和恶性淋巴细胞群，包括来自皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＣＴＣＬ）病人的肿瘤细胞。由于角化细胞产生ＩＬ７，因而ＩＬ７可能在ＣＴＣＬ和其他炎性皮肤病的生物学上起作用。方法：细胞从ＣＴＣＬ患者外周血中分离，体外ＩＬ７处理１～１０ｍｉｎ，ＤＮＡ合成法检测细胞的增殖。应用免疫沉淀和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，研究酪氨酸激酶类对ＩＬ７的信号应答。结果：与正常Ｔ细胞不同的是，在无丝裂原下用ＩＬ７体外培养的ＣＴＣＬ细胞增殖。ＩＬ７孵育之后细胞内不同底物快速发生酪氨酸磷酸化。ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ能抑制其细胞增殖和酪氨酸磷酸化。Ｓｒｃ家族蛋白之一酪氨酸激酶ｐ５９ｆｙｎ，在ＩＬ７处理１ｍｉｎ内发生酪氨酸磷酸化，而作为酪氨酸磷酸化可能候选的ＰＩ３激酶的ｐ８５亚基并未发生。结论：提示ＩＬ７诱导酪氨酸蛋白激酶ｐ５９ｆｙｎ是其介导信号传导途径的早期事件，且在ＣＴＣＬ的病理生理学中起重要作用。

关键词：皮肤肿瘤 CTCL IL-7 酪氨酸蛋白激酶信号传导

白细胞介素-7诱发皮肤T细胞淋巴瘤细胞JAK-3的磷酸化和活化

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 14-18页

作者：董子明杨洪艳张义国赵明耀郑智敏河南医科大学病理生理学教研室耶鲁大学医学院皮肤系

目的：ＩＬ７可刺激一些良性和恶性淋巴细胞增生，其中包括来自皮肤样Ｔ细胞瘤（ＣＴＣＬ）病人的肿瘤细胞。Ｊａｎｕｓ激酶家族（ＪＡＫｓ）与许多细胞因子受体的信号传导系统有关。ＪＡＫ３是ＪＡＫｓ激酶家族的新成员，其在自然... 详细信息

目的：ＩＬ７可刺激一些良性和恶性淋巴细胞增生，其中包括来自皮肤样Ｔ细胞瘤（ＣＴＣＬ）病人的肿瘤细胞。Ｊａｎｕｓ激酶家族（ＪＡＫｓ）与许多细胞因子受体的信号传导系统有关。ＪＡＫ３是ＪＡＫｓ激酶家族的新成员，其在自然杀伤细胞（ＮＫ）和活化的Ｔ细胞上表达，并在这些细胞中从功能上和物理上与白细胞介素２受体（ＩＬ２Ｒ）结合起来。为此，本研究进一步探讨白细胞介素７（ＩＬ７）引起皮肤样Ｔ细胞瘤肿瘤细胞ＪＡＫ３的磷酸化和活化。方法：ＣＴＣＬ外周血中分离的肿瘤细胞，用ＩＬ７分别处理１、５、１０、２０ｍｉｎ，蛋白裂解物用抗ＪＡＫ３抗体，抗ｐ５９ｆｙｎ抗体进行免疫沉淀，用抗ＪＡＫ３和抗磷酸化酪氨酸作Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测。结果：ＩＬ７能引起ＣＴＣＬ肿瘤细胞的ＪＡＫ３酪氨酸磷酸化，抗ｐ５９ｆｙｎ抗体能结合ＪＡＫ３，未发现ＩＬ１２能诱导ＣＴＣＬ细胞的ＪＡＫ３磷酸化。结论：提示ＩＬ７可能在ＣＴＣＬ的病理生理学上起一定的作用，且证实在ＣＴＣＬ细胞中ＩＬ７受体介导了酪氨酸磷酸化的信号传导途径。

关键词：信号传导皮肤肿瘤 CTCL IL-7 JAK-3 磷酸化

骨髓树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫预防与治疗的实验研究

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 36-39页

作者：董子明张义国杨洪艳赵明耀郑智敏河南医科大学病理病理生理学教研室

目的：进一步研究树突状细胞与肿瘤细胞的融合瘤苗细胞主动免疫诱导体内抗肿瘤免疫反应及对荷瘤小鼠的免疫治疗效果。方法：直接分离骨髓树突状细胞和体外生长因子诱导扩增培养相结合，获得大量高纯度的树突状细胞，再以５００ｇ／ＬＰ... 详细信息

目的：进一步研究树突状细胞与肿瘤细胞的融合瘤苗细胞主动免疫诱导体内抗肿瘤免疫反应及对荷瘤小鼠的免疫治疗效果。方法：直接分离骨髓树突状细胞和体外生长因子诱导扩增培养相结合，获得大量高纯度的树突状细胞，再以５００ｇ／ＬＰＥＧ诱导其与ＮＳ１骨髓细胞融合，ＨＡＴ选择培养得到两者的融合细胞，体外进行混合淋巴细胞培养，并进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：融合细胞也能诱导淋巴细胞的增殖反应，而ＮＳ１无此作用。体内免疫预防试验表明，融合细胞活瘤苗１次免疫后，诱导出较强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ），并获得抵抗野生型ＮＳ１攻击的保护性反应，但对无关瘤株则无此抵抗力。融合细胞对荷瘤小鼠的免疫治疗试验显示，融合细胞静脉注射后，能够明显抑制肿瘤生长，延长其生存期。结论：树突状细胞与肿瘤细胞融合后的瘤苗体内免疫，能有效地诱导抗肿瘤免疫反应，可望成为肿瘤免疫预防和免疫治疗的新途径。

关键词：树突状细胞细胞融合肿瘤疫苗免疫疗法小鼠

小鼠骨髓来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞的融合瘤苗研制

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 26-30页

作者：张义国董子明杨洪艳郑智敏赵明耀吴皓河南医科大学病理生理学教研室郑州铁路中心医院

目的：为了提高肿瘤的免疫原性，有效地引发并增强宿主体内抗肿瘤免疫应答，特研制小鼠骨髓树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣｓ）与ＮＳ１骨髓瘤细胞的融合瘤苗。方法：利用特异的ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０单克隆抗体和补... 详细信息

目的：为了提高肿瘤的免疫原性，有效地引发并增强宿主体内抗肿瘤免疫应答，特研制小鼠骨髓树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣｓ）与ＮＳ１骨髓瘤细胞的融合瘤苗。方法：利用特异的ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０单克隆抗体和补体缓冲液及ＤＣｓ的半粘附性，直接从骨髓细胞中分离出高纯度的ＤＣｓ及其前体；再联用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）和白细胞介素（ＩＬ）４体外培育，协同诱导ＤＣｓ及其前体分化增殖，以获得大量高纯度的ＤＣｓ；然后用聚乙二醇（ＰＥＧ），使其与８氮杂鸟嘌呤（ＡＧ）处理过且处对数生长期的ＮＳ１骨髓瘤细胞融合，并用次黄嘌呤氨基蝶呤胸腺嘧啶核苷（ＨＡＴ）选择培养基筛选融合细胞，观察融合细胞的生长特性和体内致瘤性；最后直接从ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠尾静脉免疫接种活的融合细胞，再观察其诱导宿主抗肿瘤的免疫效果。结果：①融合细胞也有刺激混合淋巴细胞增殖反应的能力，其在体外能分裂增殖，但明显低于肿瘤细胞，无体内致瘤性；②接种活融合细胞的免疫小鼠能抵抗野生肿瘤攻击长达９０ｄ未见诱发肿瘤；③对照组小鼠１００％出现诱发肿瘤。结论：融合细胞可能加工处理并表达尚未鉴定的肿瘤特异抗原，进而激发宿主体内抗肿瘤免疫反应，使?

关键词：肿瘤疫苗树突状细胞骨髓肿瘤细胞融合小鼠

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 23-26页

作者：杨洪艳张义国董子明赵明耀郑智敏陈宁河南医科大学病理生理学教研室

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答，并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增... 详细信息

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答，并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法，并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫苗，然后进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：可从１只小鼠股骨中获得（３～５）×１０５个树突状细胞（ＤＣ），其纯度为９５％以上，对混合Ｔ淋巴细胞具有强刺激活性。主动免疫同系健康ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的试验显示，ＤＣ疫苗能诱导抗原特异的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性，免疫１次的动物首次受到肿瘤攻击后诱发肿瘤形成率为０％，再次攻击的肿瘤形成率为２０％；而免疫３次的动物两次攻击的肿瘤形成率皆为０％。主动免疫治疗同种荷瘤动物的试验表明，ＤＣ疫苗也能抑制肿瘤生长，荷瘤动物存活率提高及生存期明显延长。结论：肿瘤抗原体外致敏的树突状细胞能诱导宿主体内的抗肿瘤免疫保护性反应，且对荷瘤模型动物具有明显的免疫治疗作用。

关键词：树突状细胞肿瘤疫苗骨髓肿瘤免疫疗法

转输树突状细胞疫苗免疫脾淋巴细胞对小鼠骨髓瘤的继承性免疫防治作用

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 30-36页

作者：张义国董子明赵明耀杨洪艳吴皓郑光郑智敏陈宁河南医科大学病理生理学教研室郑州铁路中心医院

目的：研究树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣ）类瘤苗免疫小鼠脾淋巴细胞对实验性骨髓瘤的继承性免疫预防与免疫治疗的作用。方法：先前用骨髓ＤＣ作为佐剂，研制了ＤＣ与肿瘤细胞的融合瘤苗，以及用灭活肿瘤细胞及其裂解... 详细信息

目的：研究树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ，ＤＣ）类瘤苗免疫小鼠脾淋巴细胞对实验性骨髓瘤的继承性免疫预防与免疫治疗的作用。方法：先前用骨髓ＤＣ作为佐剂，研制了ＤＣ与肿瘤细胞的融合瘤苗，以及用灭活肿瘤细胞及其裂解产物体外脉冲的ＤＣ疫苗，并成功地诱导宿主产生抗肿瘤的免疫保护性反应，且对荷瘤动物具有免疫治疗作用。在此基础上，本研究用ＤＣ融合瘤苗及肿瘤抗原脉冲ＤＣ疫苗免疫的脾淋巴细胞作为免疫效应细胞，继承性转输到宿主体内，以观察其免疫预防与治疗的效果。结果：继承性免疫预防试验表明，转输免疫脾淋巴细胞后２组宿主均能够抵抗野生性肿瘤细胞的多次攻击，＞６０ｄ未见皮下移植性肿瘤形成，其６０ｄ存活率为１００％（５／５），与对照组相比，Ｐ＜０．０１。继承性免疫治疗（ａｄｏｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，ＡＩＴ）试验显示：①单用免疫淋巴细胞进行ＡＩＴ的２组，６０ｄ存活率分别为８０％（４／５）和６０％（３／５），其存活时间也明显延长，Ｐ＜０．０５；②先行化疗后进行ＡＩＴ，以及术前或术后再行ＡＩＴ，６０ｄ存活率提高到１００％（５／５），其存活时间显著延长，Ｐ＜０．０１；ＡＩＴ后宿主荷瘤生长明显被抑制，且部分荷瘤消退甚或治?

关键词：骨髓肿瘤树突状细胞肿瘤疫苗小鼠免疫疗法

贴壁树突状细胞群经瘤细胞裂解物脉冲的瘤苗及其抗瘤效应

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河南医科大学学报 1999年第1期34卷 40-44页

作者：张义国董子明杨洪艳赵明耀吴皓郑光陈宁郑智敏河南医科大学病理生理学教研室郑州铁路中心医院

目的：进一步探讨贴壁树突状细胞群经骨髓瘤细胞裂解物体外脉冲的瘤苗的抗肿瘤效应。方法：从骨髓细胞和脾细胞中分离扩增培育出大量贴壁生长的树突状细胞群，进而研制了一种经骨髓瘤细胞裂解物体外脉冲的树突状细胞瘤苗，后进行动物整... 详细信息

目的：进一步探讨贴壁树突状细胞群经骨髓瘤细胞裂解物体外脉冲的瘤苗的抗肿瘤效应。方法：从骨髓细胞和脾细胞中分离扩增培育出大量贴壁生长的树突状细胞群，进而研制了一种经骨髓瘤细胞裂解物体外脉冲的树突状细胞瘤苗，后进行动物整体实验探讨该类脉冲瘤苗的抗肿瘤效应。结果：该贴壁树突状细胞群的形态鉴定具异质性，但仍能刺激混合Ｔ淋巴细胞增殖反应。该脉冲瘤苗免疫预防效应的动物实验显示，树突状细胞的脉冲瘤苗免疫的动物能够产生且保持其特异抗肿瘤免疫保护效应，１２０ｄ内反复多次攻击后未见皮下移植瘤形成。瘤苗免疫治疗效应的动物实验表示，树突状细胞的脉冲瘤苗主动免疫治疗的荷瘤动物能够获得长期生存期，荷瘤生长被抑制直至完全消退，其治愈率达１００％（ｎ＝１０），之后１２０ｄ内未见肿瘤复发（ｎ＝５），且多次再攻击后也未见移植瘤形成（ｎ＝５）。经常规病理学尸解与镜检，实验动物皮下接种原位及其他器官均未发现骨髓瘤细胞存在，同时也未发现其他组织学异常。结论：这些结果说明脉冲的树突状细胞瘤苗具有高效的抗肿瘤预防效应、且可治愈荷瘤动物并获得免疫保护。进而提示该脉冲瘤苗主动免疫能够诱发或加强宿主体内免疫系统的抗肿瘤排斥功能，可完全抵御肿瘤细胞攻击或杀灭肿?

关键词：树突状细胞瘤苗骨髓肿瘤免疫疗法小鼠