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基因1型鹅星状病毒VP27蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2576-2584页

作者：向勇李林林张俊勤董嘉文黄允真翟颀徐志宏廖明孙敏华广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广州510640 仲恺农业工程学院动物科技学院广州510225

【目的】制备可特异性识别基因1型鹅星状病毒(Goose astrovirus genotype 1,GAstV-1)且与GAstV-2不发生交叉反应的多克隆抗体,以期为后续GAstV-1免疫检测技术的建立提供材料。【方法】通过比对GAstV-1与GAstV-2衣壳蛋白的氨基酸序列以... 详细信息

【目的】制备可特异性识别基因1型鹅星状病毒(Goose astrovirus genotype 1,GAstV-1)且与GAstV-2不发生交叉反应的多克隆抗体,以期为后续GAstV-1免疫检测技术的建立提供材料。【方法】通过比对GAstV-1与GAstV-2衣壳蛋白的氨基酸序列以寻找其差异较大的区域作为靶基因。对GAstV-1 GDYJ-21-01株VP27基因密码子进行偏嗜性优化合成,构建原核表达质粒pCZN1-GAstV-1 VP27,转化大肠杆菌Top10感受态细胞以诱导表达VP27蛋白;将纯化后的VP27蛋白免疫新西兰白兔后收获抗血清以制备GAstV-1 VP27多克隆抗体,通过间接ELISA和SDS-PAGE分析该纯化抗体的效价和纯度,并利用间接免疫荧光试验(IFA)检测多克隆抗体的特异性。【结果】试验成功构建重组质粒pCZN1-GAstV-1 VP27;SDS-PAGE显示其表达的重组蛋白分子质量约为35 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA试验结果显示,纯化后的GAstV-1 VP27多克隆抗体效价高达1∶9 841 500,纯度高于85%。IFA结果显示,GAstV-1 VP27多克隆抗体可特异性识别GAstV-1,且与GAstV-2无交叉反应。临床病料组织检测结果显示,GAstV-1核酸阳性的病料组织均可出现特异性荧光,而GAstV-2核酸阳性且GAstV-1核酸阴性的病料组织未出现荧光。【结论】本研究获得了高效价且可特异性识别GAstV-1(与GAstV-2无交叉反应)的VP27多克隆抗体,为建立鉴别诊断GAstV-1的抗原免疫检测技术奠定了基础。

关键词： 1型鹅星状病毒(GAstV-1) VP27 原核表达多克隆抗体

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三种消毒剂对鹅星状病毒杀灭效果的评价

广东畜牧兽医科技 2024年第3期49卷 88-92页

作者：邝瑞欢黄允真李林林向勇翟颀孙敏华李珂信爱国李海贤董嘉文广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所云南昆明650224 广州五丰动物保健品有限公司广东广州510640

为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病... 详细信息

为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病毒的杀灭效果进行实验室评价,结果显示:在室温环境下(25℃),作用时间为1 min、5 min和10 min,复方戊二醛1∶80倍稀释可完全杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),而复方戊二醛1∶300倍稀释及其他两种消毒剂在推荐使用浓度下均未能有效杀灭鹅星状病毒。对于尿囊液里高含量(104.0 EID50)的鹅星状病毒,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液在10℃时需要作用10 min才能有效杀灭星状病毒,但尿囊液里低含量(103.0 EID50)的鹅星状病毒在此浓度下作用1 min就能被完全杀灭。当温度达到25℃时,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液1 min即可杀灭鹅星状病毒;1:160倍稀释的复方戊二醛溶液则需要10 min才能完全杀灭鹅星状病毒。继续升高温度至37℃,1∶80和1∶160倍稀释的复方戊二醛溶液与鹅星状病毒作用1 min即可起到有效杀灭效果。综上所述,采用1∶80倍稀释的复方戊二醛杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),在10℃、25℃和37℃作用的最短时间分别是10 min、1 min和1 min。该研究明确了三种不同消毒剂首次用于消毒,在不同温度和作用时间下对鹅星状病毒的杀灭效果,为鹅星状病毒的生物安全防控提供参考。

关键词：鹅星状病毒消毒复方戊二醛异氰脲酸钠聚维酮碘

基于模态转换的红外图像与可见光图像配准方法研究

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基于模态转换的红外图像与可见光图像配准方法研究

作者：董嘉文哈尔滨工程大学

学位级别：硕士

图像配准技术是图像处理领域的关键技术,而红外图像和可见光图像的配准更是其中的重点与难点。红外光与可见光处于不同的波段,二者图像属于不同模态的图像,而不同模态的图像之间很难进行特征匹配,从而导致现有方法的配准精度较低。针对... 详细信息

图像配准技术是图像处理领域的关键技术,而红外图像和可见光图像的配准更是其中的重点与难点。红外光与可见光处于不同的波段,二者图像属于不同模态的图像,而不同模态的图像之间很难进行特征匹配,从而导致现有方法的配准精度较低。针对上述问题,本文提出了一种基于模态转换的红外图像与可见光图像配准方法,能够在完成图像配准的同时有效提高图像配准的精度。本文首先提出了一种基于生成对抗网络的模态转换方法。在对比非配对图像转换网络(CUT)的基础上,优化设计了一种多尺度注意力U网结构来代替原有的鉴别网络,其中一个鉴别器输入一个完整的生成图像来对细节纹理进行学习,另外一个鉴别器将下采样后的生成图像作为输入,负责对于整体图像的把握,以此提升模态转换后的图像质量。此外根据CUT的对比损失提出了一种空间相关损失用于约束模态转换网络。对模态转换的效果进行了实验和分析,发现单对图像之间进行模态转换很难取得满意的转换效果,生成的图像会产生很大的扭曲,而存在数据集的图像对进行模态转换则能够取得较好的转换效果,生成的图像与原始的可见光图像在颜色、轮廓和外观上基本一致。通过选择一些经典的算法对模态转换前后图像的特征匹配结果进行分析,证明了经过模态转换后,算法可以获取更多匹配的特征点对数量与正确匹配的特征点对数量,并且正确匹配的特征点对数量最低从8增长到11,最高从6增长到111,数量明显提升。实验证明了本文模态转换方法能够有效降低特征匹配的难度,对于多模态图像配准工作有着重要的意义。结合模态转换的方法,本文提出了一种基于模态转换的红外图像与可见光图像配准方法。根据本文实际工程应用的数据集,对配准网络进行参数优化与重新训练。将原始红外图像经过模态转换网络得到的生成可见光图像与原始可见光图像输送到配准网络中,从而输出对应的匹配关系。随后计算出相应的单应性矩阵,并将这个单应性矩阵应用到原始红外图像上完成配准。结合相关指标与经典配准算法进行对比实验,本文方法正确匹配的特征点对数量最低为76,最高为97,本文方法的配准精度最低为91.11%,最高为96.23%,并且本文方法在正确匹配的特征点对数量上和配准精度上都优于各种对比方法,最终验证了本文配准方法具有更好的配准性能,能够严格完成红外图像与可见光图像的配准工作。最后针对图像融合这一具体的图像配准应用,实验证明了未配准的图像直接融合会产生重影,融合效果较差,而经过严格的配准后则能取得良好的融合效果,并验证了本文提出的配准方法对于图像融合起到了积极的作用。

关键词：红外图像可见光图像模态转换特征匹配图像配准

高端装备制造上市企业融资效率及影响因素研究

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高端装备制造上市企业融资效率及影响因素研究

作者：董嘉文江苏科技大学

学位级别：硕士

高端装备制造业具有高技术含量、高附加值的特点,是推动我国工业产业转型升级的重要引擎。近些年国家在推动战略新兴产业发展与制造业升级,相关支持政策陆续出台,《中国制造2025》提出抓紧进行中国高端装备制造业核心和关键技术的自主... 详细信息

高端装备制造业具有高技术含量、高附加值的特点,是推动我国工业产业转型升级的重要引擎。近些年国家在推动战略新兴产业发展与制造业升级,相关支持政策陆续出台,《中国制造2025》提出抓紧进行中国高端装备制造业核心和关键技术的自主研发等。任何上市企业的发展均离不开资金的支持,资金对于上市企业的发展举足轻重,融资则是上市企业取得资金的重要途径,所以实现高效的融资资金筹集与融资资金配置,提高总体融资效率,对于高端装备制造上市企业的发展具有积极意义。如此背景下,本文选择了42家高端装备制造上市企业作为样本研究对象,结合文献以及高端装备制造上市企业的实际情况,选取营业总成本、产权比率、总资产三个投入指标,债权融资总额、股权融资总额两个中间指标,营业收入、净利润、无形资产三个产出指标,选用两阶段网络DEA模型,对2015-2020年六年间高端装备制造上市企业融资效率进行测算,分别从总体融资效率、第一阶段资金筹集效率、第二阶段资金配置效率三个方面进行分析。在此基础上,本文再构建Tobit模型,选取外部与内部的影响因素作为解释变量,总体融资效率值作为被解释变量,对影响高端装备制造上市企业融资效率的因素进行分析。基于上述分析可知:高端装备制造上市企业总体融资效率偏低,实现融资有效的高端装备制造上市企业数量较少,资金配置阶段效率偏低,是拉低总体融资效率的主要原因,且两阶段效率存在两极分化的情况。对此本文结合高端装备制造上市企业融资效率影响因素分析,提出以下对策建议:高端装备制造上市企业可以关注宏观政策变动,完善管理体系,优化融资结构,提高盈利水平以及扩大企业规模。

关键词：融资效率网络DEA 高端装备制造上市企业 Tobit模型

L-肉碱对巴克夏×民育肥猪肉品质及脂肪代谢相关基因表达的影响

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L-肉碱对巴克夏×民育肥猪肉品质及脂肪代谢相关基因表达的影响

作者：董嘉文东北农业大学

学位级别：硕士

巴克夏×民猪是一种含有民猪血统的杂交猪,作为对民猪肉品质改良的育种产物,取得一定的效果,但仍存在着体内脂肪沉积过多,背膘过厚的缺点。本试验以巴克夏×民育肥猪为试验对象,通过饲养试验、屠宰试验从生理生化、脂肪酸组成及脂肪代... 详细信息

巴克夏×民猪是一种含有民猪血统的杂交猪,作为对民猪肉品质改良的育种产物,取得一定的效果,但仍存在着体内脂肪沉积过多,背膘过厚的缺点。本试验以巴克夏×民育肥猪为试验对象,通过饲养试验、屠宰试验从生理生化、脂肪酸组成及脂肪代谢相关的基因表达水平方面探讨L-肉碱对巴克夏×民育肥猪脂肪代谢的影响,旨在阐明L-肉碱在改善巴克夏×民育肥猪胴体特性和肉品质方面的作用,为L-肉碱在养猪业上的应用提供科学依据。本试验选取108头初始体重为(65.42±0.19)kg的巴克夏×民育肥猪,随机分为3组,每组6个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加100mg/kg、200 mg/kg L-肉碱的试验饲粮,正试期90 d。试验结束后,每个重复中选取2头试验猪(公母各半),共36头,进行屠宰取样。试验结果表明:(1)饲粮中添加L-肉碱对育肥猪生长性能无显著影响(P>0.05)。对胴体直长、胴体斜长、热胴体重、屠宰率、瘦肉率及外周脂肪含量的影响均不显著(P>0.05),但显著提高眼肌面积,降低背膘厚(P0.05),但添加200mg/kg L-肉碱育肥猪肝脏指数显著降低(P0.05)。(3)饲粮中添加L-肉碱显著降低育肥猪背最长肌a*24h值(P0.05),但添加200mg/kg L-肉碱显著降低压榨损失(P0.05),能够显著提高有机阳离子转运体2(OCTN2)的基因表达量(P<0.05)。饲粮中添加200mg/kgL-肉碱显著降低背部脂肪中脂肪酸转运蛋白(CD36)的基因表达量(P<0.05)。(6)饲粮中添加L-肉碱对背最长肌中脂肪氧化基因CPT1、CPT2和OCTN2的基因表达量无显著影响(P<0.05);添加200mg/kgL-肉碱显著提高背最长肌中脂肪合成基因ACC、F

关键词： L-肉碱巴克夏×民育肥猪肉品质脂肪酸组成基因表达

L-肉碱对巴民育肥猪背脂脂代谢相关基因表达的影响

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东北农业大学学报 2023年第2期54卷 56-65页

作者：李建平董嘉文宋海宁吴泽马智卓东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

探究饲粮中添加L-肉碱对巴民育肥猪生长性能、胴体指标、血清生化指标、器官指数及背脂的脂代谢通路相关基因表达的影响,选取108头初始体重为(65.42±0.19)kg巴民育肥猪,随机分为3组,每组6个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,试验... 详细信息

探究饲粮中添加L-肉碱对巴民育肥猪生长性能、胴体指标、血清生化指标、器官指数及背脂的脂代谢通路相关基因表达的影响,选取108头初始体重为(65.42±0.19)kg巴民育肥猪,随机分为3组,每组6个重复,每个重复6头。对照组饲喂基础饲粮,试验组A和B分别在基础饲粮中添加100、200 mg·kg^(-1)L-肉碱(纯度为50%,以纯品计),正试期90 d。结果表明,与对照组相比,饲粮中添加L-肉碱对巴民育肥猪平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)均无显著影响(P>0.05);对胴体直长及胴体斜长均无显著影响(P>0.05),但显著降低平均背膘厚(P0.05),但试验组B,添加200 mg·kg^(-1)L-肉碱显著降低肝脏指数(P0.05);对背脂中G蛋白偶联受体120(GPR120)基因表达量无显著影响(P>0.05),但显著提高有机阳离子转运体2(OCTN2)基因表达量(P<0.05),但试验组B,饲粮中添加200 mg·kg^(-1)L-肉碱显著降低脂肪酸转运蛋白(CD36)基因表达量(P<0.05);显著提高背脂中过氧化物酶殖激活受体α(PPARα)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)及脂蛋白脂酶(LPL)基因表达量(P<0.05),PPARα基因表达量随L-肉碱添加量增加显著提高(P<0.05),且试验组B添加200 mg·kg^(-1)L-肉碱显著提高肉毒碱脂辅酶A转移酶1(CPT1)、肉毒碱脂辅酶A转移酶2(CPT2)及肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)基因表达量(P<0.05);显著降低背脂中乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)及过氧化物酶殖激活受体γ(PPARγ)基因表达量(P<0.05)。综上,饲粮中添加L-肉碱可能通过提高背脂脂肪分解基因表达量,降低脂肪合成基因表达量促进其脂肪脂解及脂肪酸β-氧化,抑制背脂脂肪合成,减少脂肪沉积,降低背膘厚。

关键词： L-肉碱巴民育肥猪背脂脂肪代谢基因表达

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复杂工业系统模型化：多层智能辨识途径

控制与决策 1996年第A1期11卷 119-124页

作者：董嘉文钱积新

复杂工业系统模型化是实现多层次要求、多任务控制的基础和前提。详细论述了复杂工业系统的特征，研究其模型化要求、结构及其设计原则，提出实现系统模型化的多层智能辨识的概念和途径，最后给出了例子说明。

关键词：复杂工业系统多层智能辨识控制理论系统辨识

2型鹅星状病毒VP27蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国家禽 2023年

作者：向勇李林林张俊勤董嘉文黄允真翟颀杨希孙敏华广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站猪禽种业全国重点实验室(广州)

为进一步研究2型鹅星状病毒（GAstV-2）及其纤突结构蛋白VP27，通过基因密码子优化合成构建pCZN1-VP27原核表达质粒；利用大肠杆菌系统通过IPTG诱导表达VP27蛋白后进行纯化，以纯化的VP27蛋白免疫新西兰白兔，收获抗血清并纯化得到VP27... 详细信息

为进一步研究2型鹅星状病毒（GAstV-2）及其纤突结构蛋白VP27，通过基因密码子优化合成构建pCZN1-VP27原核表达质粒；利用大肠杆菌系统通过IPTG诱导表达VP27蛋白后进行纯化，以纯化的VP27蛋白免疫新西兰白兔，收获抗血清并纯化得到VP27多克隆抗体；分别通过间接ELISA和SDS-PAGE分析抗体的效价和纯度；将GAstV-1、GAstV-2病毒液接种LMH细胞，通过免疫印迹和免疫荧光试验对VP27多克隆抗体进行验证；将GAstV-2阳性或阴性的临床病料组织研磨液接种LMH细胞，利用VP27多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其临床应用效果。结果显示：纯化后的VP27多克隆抗体效价高达1∶3 280 500，纯度高于85%。免疫印迹试验结果显示，GAstV-2感染组在35 ku处出现特异性条带，GAstV-1感染组则未出现该条带；免疫荧光结果显示仅GAstV-2感染组可观察到特异性荧光；临床病料组织的免疫荧光试验结果显示，GAstV-2阳性的病料组织均可出现特异性荧光，GAstV-2阴性的病料组织未出现荧光。研究获得了可特异性识别GAstV-2的VP27多克隆抗体，为深入研究VP27蛋白在GAstV-2的感染和致病机制中的作用提供了生物材料，也为建立GAstV-2抗原免疫检测技术奠定了基础。

关键词： 2型鹅星状病毒 VP27 多克隆抗体

鸭疫里默氏杆菌RIA0940基因缺失株的构建及主要生物学特性测定

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1464-1472页

作者：李林林董嘉文张俊勤黄允真孙敏华广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广州510640

【目的】通过构建鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株并测定其生物学特性,探讨RIA_0940基因的潜在功能。【方法】以鸭疫里默氏杆菌RA-GD株为亲本株,扩增其左右同源臂及红霉素抗性基因(ermR)盒片段,构建左同源臂-ermR抗性基因盒-右同源臂... 详细信息

【目的】通过构建鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株并测定其生物学特性,探讨RIA_0940基因的潜在功能。【方法】以鸭疫里默氏杆菌RA-GD株为亲本株,扩增其左右同源臂及红霉素抗性基因(ermR)盒片段,构建左同源臂-ermR抗性基因盒-右同源臂融合片段,通过自然转化的方法缺失RA-GD株RIA_0940基因,并利用PCR筛选、鉴定RA-GDΔRIA_0940基因缺失株。分别对亲本株RA-GD和缺失株RA-GDΔRIA_0940的生长特性、对雏鸭的半数致死量、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能进行比较分析。【结果】试验成功构建了RA-GD株的RIA_0940基因缺失株(RA-GDΔRIA_0940);生物学特性检测结果显示,RA-GDΔRIA_0940株体外生长能力较亲本株低,基因缺失株在生长后期生长受到显著或极显著抑制(P<0.05;P<0.01);RA-GDΔRIA_0940株对雏鸭的半数致死量是亲本株的114倍;与亲本株相比,缺失株感染鸭血液和组织的载菌量显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);缺失株对Vero细胞的黏附和入侵性能均极显著低于亲本株(P<0.01)。【结论】本试验成功构建RA-GD株RIA_0940基因缺失株,该缺失株在体外培养条件下生长能力较亲本株低,对雏鸭的致病力、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能均显著或极显著低于亲本株。本试验结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌 RIA_0940基因基因缺失生物学特性毒力因子