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Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用

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Claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用

作者：董兵吉林大学

学位级别：硕士

前列腺癌是前列腺上皮源性恶性肿瘤,转移和复发是晚期前列腺癌患者主要的死亡原因。目前研究认为,肿瘤的生长和转移受多种因素调控,其中紧密连接（tight junction,TJ）与肿瘤细胞的增殖、运动以及侵袭等转移表型密切相关。紧密连接蛋白C... 详细信息

前列腺癌是前列腺上皮源性恶性肿瘤,转移和复发是晚期前列腺癌患者主要的死亡原因。目前研究认为,肿瘤的生长和转移受多种因素调控,其中紧密连接（tight junction,TJ）与肿瘤细胞的增殖、运动以及侵袭等转移表型密切相关。紧密连接蛋白CLDNs作为紧密连接的主要构成成分,其表达异常能够影响紧密连接结构、功能以及相关的细胞信号传递,在上皮来源恶性肿瘤的发生和转移过程中起着重要作用。Claudin-6作为紧密连接蛋白CLDNs家族的成员之一,对维护细胞间紧密连接结构和功能起着重要作用。我们课题组的前期研究中,发现claudin-6能够明显抑制乳腺癌,宫颈癌,结肠癌细胞的迁移侵袭能力;推测claudin-6表达沉默可能在上皮来源的恶性肿瘤发生转移过程中发挥着作用。目前,关于前列腺癌细胞中claudin-6是否能够抑制前列腺癌细胞侵袭表型的研究尚未见报道。本文通过使用分子生物学技术,首次研究claudin-6对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用,为前列腺癌治疗提供一定的理论支持。目的:探讨过表达claudin-6对前列腺癌细胞生物学表型的影响。方法:通过RT-PCR和Western Blot方法检测人前列腺癌细胞LNCAP和DU145中claudin-6基因和蛋白的表达状况;利用携带claudin-6的慢病毒转染前列腺癌细胞LNCAP和DU145,经过嘌呤霉素（puromycin;PM）筛选获得过表达claudin-6的稳定克隆;通过RT-PCR、Western Blot及细胞免疫荧光法鉴定慢病毒转染效率以及稳定细胞克隆中claudin-6蛋白的表达和定位;利用CCK-8试剂盒检测前列腺癌细胞的增殖能力并绘制细胞增殖曲线;流式细胞术检测过表达claudin-6后前列腺癌细胞周期的分布情况;通过跨上皮电阻实验检测前列腺癌细胞LNCAP和DU145的跨上皮电阻;通过倒置显微镜观察过表达claudin-6后前列腺癌细胞形态的改变;通过鬼笔环肽荧光染色法观察过表达claudin-6后前列腺癌细胞骨架的改变;细胞划痕实验、Transwell小室实验检测过表达claudin-6后前列腺癌细胞的迁移侵袭能力;Western Blot检测过表达claudin-6后,EMT相关蛋白的表达情况。结果:RT-PCR和Western Blot结果显示,前列腺癌细胞LNCAP和DU145中claudin-6低表达;慢病毒转染后获得过表达claudin-6的稳定克隆LNCAP和DU145;RT-PCR和Western Blot结果显示,过表达claudin-6组的RNA以及蛋白水平表达均明显高于空载组;细胞免疫荧光染色实验结果显示,转染目的基因组中claudin-6均有表达,并且主要表达于细胞膜上,而空载组未见明显表达;CCK-8细胞活性实验结果显示,与空载组相比,过表达claudin-6组细胞的增殖能力均有下降;流式细胞仪检测细胞周期的结果显示,过表达claudin-6组细胞增殖活性与空载组相比均有减弱;通过跨上皮电阻实验结果显示,过表达claudin-6组单层细胞间跨上皮电阻明显高于空载组;倒置显微镜下观察发现过表达claudin-6后,前列腺癌细胞形态向上皮细胞形态转变,呈多角形,胞体扁平,界限不清;通过鬼笔环肽荧光染色法观察过表达claudin-6后前列腺癌细胞骨架Factin荧光强度减弱,胞质中微丝结构不明显;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验的结果显示,转染目的基因组的迁移能力与空载组相比明显降低;Transwell细胞侵袭实验结果显示,过表达claudin-6组的侵袭能力与空载组相比明显降低;Western Blot结果显示,过表达claudin-6后上皮细胞标志物E-cadherin表达显著上调,而间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin的表达明显下调。结论:过表达claudin-6抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及逆转EMT,增加前列腺癌细胞的紧密连接功能。

关键词：前列腺癌紧密连接 Claudin-6 迁移侵袭

鹿感染人五毛滴虫巢式PCR检测方法的建立与应用

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鹿感染人五毛滴虫巢式PCR检测方法的建立与应用

作者：董兵吉林大学

学位级别：硕士

人五毛滴虫为一种机会性致病的人兽共患的寄生虫,多寄生于宿主的盲肠、结肠,宿主范围广泛。近几年,临床人感染人五毛滴虫的病例常有报道,主要分布在我国河南、安徽、湖北、广东等地,而在动物粪便样品检测中也发现了人五毛滴虫的感染,已... 详细信息

人五毛滴虫为一种机会性致病的人兽共患的寄生虫,多寄生于宿主的盲肠、结肠,宿主范围广泛。近几年,临床人感染人五毛滴虫的病例常有报道,主要分布在我国河南、安徽、湖北、广东等地,而在动物粪便样品检测中也发现了人五毛滴虫的感染,已检测到的有犬、猫、非灵长类和啮齿类动物感染。为了探索鹿感染人五毛滴虫的情况并进一步评估其人兽共患潜力,就显得十分有必要构建一个快速有效的检测方法来评估鹿感染人五毛滴虫的情况。肠道毛滴虫的检测常用方法包括:直接涂片镜检法、染色镜检法、普通PCR检测法、虫体培养法、巢氏PCR检测法、原位杂交检测法等,其中虫体培养法、直接涂片镜检法、虫体培养法、普通PCR检测法和染色镜检法精确度不高,原位杂交检测法实验条件要求高且步骤复杂,而巢式PCR检测法常被视为一种快速、便捷、有效的检测方法。本试验通过18S r RNA设计了特异性的巢式PCR引物,对镁离子浓度及退火温度进行了优化,确定了最佳镁离子浓度为2.5 mmol/L,两轮PCR反应的最佳退火温度均为53℃,在对巢式PCR检测方法的特异性试验中发现其与柔嫩艾美尔球虫、伊氏锥虫、弓形虫、阴道毛滴虫、蓝氏贾第虫、犬心丝虫基因组DNA等无交叉反应,可检测灵敏度达10个虫体/ml。采用构建的基于18S r RNA基因的巢式PCR检测方法对长春地区139份鹿粪便样品进行了检测,检测结果显示人五毛滴虫感染率为21.59%(30/139),巴特里四毛滴虫感染率为54.68%(76/139)。采用EF1-α基因设计了特异性的巢式PCR引物,对相关影响因素条件进行了优化,确定了最佳镁离子浓度为0.75mmol/L,两轮PCR反应的最佳退火温度分别为57℃、55℃,在对巢式PCR检测方法的特异性试验中发现其与柔嫩艾美尔球虫、伊氏锥虫、弓形虫、阴道毛滴虫、蓝氏贾第虫、犬心丝虫基因组DNA等无交叉反应,可检测灵敏度达10个虫体/ml。应用基于EF1-α基因构建的巢式PCR检测方法,检测对长春地区139份鹿粪便样品,检测结果显示人五毛滴虫感染率为21.59%(30/139)。通过对阳性样品的序列进行分析,结果显示,检测到的人五毛滴虫阳性样品的18S r RNA基因序列突变位点主要集中在三个部位,即第1034个碱基存在着C/T的差异,第1051-1053的碱基存在着TGC/TGT/GAT的差异,第1144-1165的碱基存在着复杂的多样性;检测到的人五毛滴虫阳性样品的EF-1α基因序列未表现出多态性。综上所述,基于人五毛滴虫EF-1α基因的巢式PCR检测方法更适合检测人五毛滴虫的感染情况,而基于18S r RNA基因的巢式PCR检测方法更适合用于人五毛滴虫基因亚型的鉴定,在临床检测过程中,可先用基于EF-1α基因的巢式PCR检测方法进行检测,将检测到的阳性样品再采用基于18S r RNA基因的巢式PCR检测方法进行基因分型等的研究。本试验成功的构建了基于特异性诊断基因的诊断方法,为流行病学的研究提供了新的手段。

关键词：人五毛滴虫 18S rRNA EF-1α 巢式PCR

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几种数字图像水印的算法及应用

几种数字图像水印的算法及应用

作者：董兵南京信息工程大学

学位级别：硕士

随着网络技术和多媒体技术的飞速发展,如何保护多媒体信息的安全成为国际上研究的热门话题,数字水印技术应运而生。作为保护数字作品版权的一种重要手段,数字水印技术己成为当今学术界研究的一个热点。数字水印技术是通过在原始数据中... 详细信息

随着网络技术和多媒体技术的飞速发展,如何保护多媒体信息的安全成为国际上研究的热门话题,数字水印技术应运而生。作为保护数字作品版权的一种重要手段,数字水印技术己成为当今学术界研究的一个热点。数字水印技术是通过在原始数据中嵌入秘密信息来证实该数据的所有权。被嵌入的水印可以是一段文字、标识、序列号等。水印通常是不可见或不可察的,它与原始数据紧密结合并隐藏其中,成为源数据不可分离的一部分,并可以经历一些不破坏源数据使用价值或商用价值的操作而存活下来。本文以静态的数字图像作为主要研究对象,重点研究了几种水印的算法及应用。主要工作有以下几个方面: 针对传统的相关值检测盲水印方法嵌入容量小,鲁棒性较差的缺点,利用数字图像SVD(奇异值)分解后的特点,提出一种结合分块SVD分解的相关值检测盲水印方法,该方法具有实现简单,运算复杂度低的特点,并对常见的图像处理具有鲁棒性。对抵抗几何攻击的数字水印算法进行分析,介绍了几种对RST鲁棒的水印算法的思路。着重对Fourier-Mellin变换构造几何不变域的算法进行探讨,深入研究了算法的思想。数字图像矩阵在傅立叶变换后的幅度谱能够体现图像的重要信息,且具有平移不变性,然而单纯的修改傅立叶频谱系数进行水印嵌入,不能够达到稳定的检测响应。因此利用图像傅立叶幅度谱系数量化的方法嵌入水印信息,并通过多点嵌入和检测,不仅提高检测的准确性,而且对于图像的尺度变换也有较好的鲁棒性。同时,利用傅立叶幅度谱的特点,在检测前对图像进行旋转检测并矫正,避免旋转所造成的破坏检测同步性。在图像受到轻微几何攻击的情况下,能够对水印准确提取。抵抗几何变换一直是水印算法研究的难点和重点,构造图像强的几何不变性空间是解决问题的一种思路。图像的伪Zernike矩具有较强的旋转不变性,通常在模式识别中有着广泛应用。利用数字图像伪Zernike矩的旋转不变性进行改进,对矩归一化,使得归一化后的矩在保持旋转不变性的同时,还具有缩放不变性。直接在图像的矩上嵌入水印需要重建图像,会严重破坏图像质量,且计算量巨大,本文提出改进的嵌入方案,结合图像的伪Zernike矩重构水印信息,直接添加在图像空域内,避免图像的重建,不仅保证图像质量,时间效率也有大幅提高。实验结果表明,提出的方法在对抗常规信号处理及图像旋转、缩放等方面有较好的鲁棒性。

关键词：数字水印奇异值分解 Fourier-Mellin变换傅立叶变换伪Zernike矩

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地面定向钻超前探查陷落柱技术与实践

中国煤炭 2022年第S2期48卷 94-100页

作者：董兵朱乐意甘圣丰安徽省皖北煤电集团有限责任公司安徽省宿州市234000

针对岩溶陷落柱等垂向构造在井下超前探查困难等问题,在任楼煤矿新采区中六采区采用地面区域定向超前探查技术探查区域内是否存在陷落柱等导水构造,通过观测钻井液漏失情况,未探查到断层裂隙或陷落柱等垂向导水通道,并进行钻孔轨迹与地... 详细信息

针对岩溶陷落柱等垂向构造在井下超前探查困难等问题,在任楼煤矿新采区中六采区采用地面区域定向超前探查技术探查区域内是否存在陷落柱等导水构造,通过观测钻井液漏失情况,未探查到断层裂隙或陷落柱等垂向导水通道,并进行钻孔轨迹与地质录井的综合分析。结果表明,探查区域未发现断层裂隙或隐伏陷落柱等垂向导水隐蔽致灾因素,实现了掩护7_(2)64、8_(2)64工作面的目的,达到了利用新技术探查隐蔽致灾构造的效果。

关键词：岩溶陷落柱地面定向钻超前探查地质录井导水通道

关于我国教育培训市场形成和发展的研究 ——宜昌市教育培训市场的个案分析

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关于我国教育培训市场形成和发展的研究 ——宜昌市教育培训市场...

作者：董兵华中师范大学

学位级别：硕士

不管人们赞成还是反对，恐怕现在没有人会否认教育培训市场在我国的存在。而且随着我国加入WTO，教育培训的市场化运作范围还会进一步扩大。教育培训市场的形成与发展是我国社会主义市场经济体制的必然产物。但是它的不成熟和不完善决... 详细信息

不管人们赞成还是反对，恐怕现在没有人会否认教育培训市场在我国的存在。而且随着我国加入WTO，教育培训的市场化运作范围还会进一步扩大。教育培训市场的形成与发展是我国社会主义市场经济体制的必然产物。但是它的不成熟和不完善决定了我们现在的主要任务是：加强对教育培训市场的理论研究，从理论上明晰如何在市场经济理论的指导下，遵循教育自身特有的规律，完善和发展我国的教育培训市场，并把理论付诸实践，以适应和服务于社会主义市场经济的发展。有鉴于此，本文试图运用教育经济学的相关理论来对我国教育培训市场的形成与发展作尝试性的研究。期望一方面能为我国今后的教育培训市场研究提供一个基本的研究范式，另一方面也为我国教育培训市场的健康发展提供一些有建设性的对策和建议。全文共分为四个部分：第一部分，在界定教育培训市场的一些基本概念的基础上，进一步分析教育培训市场化发展的必然性和必要性。认为教育培训市场化是由教育培训的性质所决定的，是经济体制改革的必然结果，体现了我国人力资源开发的需要，是适应国际竞争的需要，也是解决再就业问题的需要。第二部分，具体分析我国教育培训市场的现状和存在的问题。如：教育培训市场鱼龙混杂，缺乏法律规范，培训机构自身建设不力等。第三部分，针对前文所指出的问题提出了一些相应的对策建议。强调我国在发展教育培训市场的过程中，始终要坚持先进文化的引导，要不断建立和完善培训市场体系，注重加强对培训市场的宏观管理与调控，积极利用网络技术发展新的培训模式以形成较强的国际竞争能力。第四部分，将分析落实到一个具体的培训市场，即宜昌培训市场，对宜昌市教育培训市场进行个案分析，找到地方教育培训市场中具有共性和特性的一些问题，针对提出的问题就地方教育培训市场的发展策略进行了一定的探讨，并对教育培训机构在激烈的市场竞争中如何生存和发展提出一些建议。

关键词：教育培训培训市场市场竞争宜昌市

HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌的临床病理特征及新辅助化疗疗效对比分析研究

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齐齐哈尔医学院学报 2024年第3期45卷 217-221页

作者：董兵斌殷照才赵晚君王亚兵皖南医学院第一附属医院/皖南医学院弋矶山医院安徽芜湖240001

目的探讨HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌的临床病理特征,以及HER2状态与乳腺癌新辅助化疗疗效的相关性。方法回顾性分析2017年1月—2023年7月本院甲乳外科收治的HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌患者的临床资料,依据治... 详细信息

目的探讨HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌的临床病理特征,以及HER2状态与乳腺癌新辅助化疗疗效的相关性。方法回顾性分析2017年1月—2023年7月本院甲乳外科收治的HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌患者的临床资料,依据治疗方案分为确诊后直接行手术及辅助治疗和确诊后行新辅助治疗两个部分。统计分析确诊后直接行手术及辅助治疗患者的临床病理特征差异。采用单因素和多因素分析评估乳腺癌新辅助化疗患者治疗后达病理学完全缓解(pathological complete response,pCR)的独立影响因素,评估HER2状态与乳腺癌新辅助化疗疗效的相关性。结果本研究纳入符合标准的乳腺癌患者共356例,其中确诊后直接行手术及辅助治疗(未行新辅助治疗)患者共267例,确诊后行新辅助治疗89例。与HR阴性HER-2(0)组相比,HR阴性HER2低表达组患者年龄大于50岁比例更高(58.7%vs 44.9%,P=0.027),已绝经比例更高(56.9%vs 43.7%,P=0.034),肿瘤大小>2 cm比例更高(80.7%vs 63.9%,P=0.003),脉管癌栓比例更低(39.4%vs 55.7%,P=0.009)。多因素Logistic回归分析结果显示,临床T分期(OR为0.353,95%CI为0.140~0.894,P=0.028)和临床TNM分期(OR为0.123,95%CI为0.040~0.379,P<0.001)为新辅助化疗获得pCR的独立预测因子,而HER2状态并非新辅助化疗pCR的预测因子。结论HR阴性HER2低表达与HR阴性HER-2(0)乳腺癌的临床病理特征具有一定差异性。HER2状态并非是乳腺癌新辅助化疗pCR的独立预测因子。

关键词：乳腺癌人表皮生长因子受体2 新辅助治疗病理学完全缓解

基于边界扫描的非完全BS电路板测试诊断技术

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半导体技术 2005年第12期30卷 38-41页

作者：王宁董兵空军第一航空学院河南信阳464000

由BS器件和非BS器件组装的非完全BS电路板仍将在今后相当长时间内广泛存在,如何对它们应用边界扫描测试是板级边界扫描测试技术需要研究的关键问题。本文从非完全BS电路板的测试性优化设计入手,举例说明了基于边界扫描的非完全BS电路板... 详细信息

由BS器件和非BS器件组装的非完全BS电路板仍将在今后相当长时间内广泛存在,如何对它们应用边界扫描测试是板级边界扫描测试技术需要研究的关键问题。本文从非完全BS电路板的测试性优化设计入手,举例说明了基于边界扫描的非完全BS电路板测试诊断技术的原理和过程。

关键词：边界扫描非完全BS电路板测试性优化设计

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天津电能信息系统建设成效及意义

电力需求侧管理 2008年第6期10卷 50-52页

作者：董兵天津市电力公司天津300010

本系统作为将电能信息采集和面向营销基础业务实时在线管理调控紧密融合的基础信息管理系统,实现了自动化技术、Web网络技术、SOA技术和具有现代化管理理念的业务流程再造(BPR)模型一体化融合;系统通信信道集成了移动公网(GPRS、CDMA)... 详细信息

本系统作为将电能信息采集和面向营销基础业务实时在线管理调控紧密融合的基础信息管理系统,实现了自动化技术、Web网络技术、SOA技术和具有现代化管理理念的业务流程再造(BPR)模型一体化融合;系统通信信道集成了移动公网(GPRS、CDMA)、电力无线专网(230 MHz)、光纤数字网(SDH)、广域网,采用了多种类型的智能终端设备;系统创新性地设计开发了GPRS、CDMA、230 MHz无线专网等多种信道兼容、非对等和对等通信方式均衡的调度采集算法;发展了自纠错非对称海量数据快速同步算法,解决了海量数据处理技术的瓶颈,保证了系统数据的一致性;系统构建了高性能的综合管理平台,通过对用电信息和计量设备工况信息的实时在线监视和调控,实现了基础营销业务的自动化管理。

关键词：电能信息采集实时在线管理营销自动化管理效益分析

呼吸疗法配合整脊治疗脊柱相关疾病的理论分析

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中医研究 2023年第9期36卷 21-23页

作者：董兵刘华杨杰张彦锁王培庞志勇河南省中西医结合医院河南郑州450004

在临床干预脊柱相关疾病的方法中,整脊是经典措施,并已经被广泛运用于临床,但存在疗效不持久、易复发的问题,且在远期康复方面存在一定的局限性。呼吸疗法具有丰富的中医学理论支撑及大量现代科学依据,其疗效亦被证实,但国内鲜有报道,... 详细信息

在临床干预脊柱相关疾病的方法中,整脊是经典措施,并已经被广泛运用于临床,但存在疗效不持久、易复发的问题,且在远期康复方面存在一定的局限性。呼吸疗法具有丰富的中医学理论支撑及大量现代科学依据,其疗效亦被证实,但国内鲜有报道,可能是其原理尚未明确。针对这样的情况,围绕呼吸疗法配合整脊治疗脊柱相关疾病的理论这一主题,在对呼吸疗法的中医学认识基础上,结合现代研究,从经络理论、藏象学说、解剖学等方面阐述呼吸疗法与脊柱的理论联系。通过对比单纯整脊疗法治疗脊柱相关疾病的疗效后,得到以下主要结论:呼吸疗法配合整脊治疗脊柱相关疾病,标本兼治、内外同调,临床疗效持久,且远期疗效更佳。

关键词：脊柱相关疾病呼吸疗法整脊疗法